تشخیص‌روغن پالم در فرمولاسیون ماست با روشDNA بارکدگذاری به وسیله Real-time PCR

محورهای موضوعی : فراورده های شیر و صنایع لبنی

محمد دولت آبادی ¹ , سید علی مرتضوی ² , حسن روان سالار ³ , محمد رضا سعیدی اصل ⁴ , احمد پدرام نیا ⁵

1 - گروه علوم و صنایع غذایی، واحد سبزوار، دانشگاه آزاد اسلامی، سبزوار، ایران.
2 - استاد، گروه علوم و صنایع غذایی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.
3 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی سبزوار، سبزوار، ایران.
4 - گروه علوم و صنایع غذایی، واحد سبزوار، دانشگاه آزاد اسلامی، سبزوار، ایران.
5 - گروه علوم و صنایع غذایی، واحد سبزوار، دانشگاه آزاد اسلامی، سبزوار، ایران.

تاریخ دریافت : 1400/04/19 تاریخ پذیرش : 1400/09/11 تاریخ انتشار : 1403/01/01

کلید واژه: تقلب, ماست, روغن پالم, واکنش زنجیره‌ای پلیمراز زمان واقعی, DNA بارکدگذاری,

چکیده مقاله :

یکی از تقلبات رایج در شیر و فرآورده‌های لبنی، افزودن روغن‌های گیاهی با قیمت پائین نظیر روغن پالم با هدف افزایش سودآوری محصولات می‌باشد. بنابراین نیاز فوری برای توسعه تکنیک‌های شناسایی دقیق، سریع و قابل اعتماد برای محافظت از مصرف‌کنندگان در برابر این گونه از تقلبات وجود دارد. هدف از پژوهش حاضر، استفاده از روش DNA بارکدگذاری با انجام PCR زمان واقعی به عنوان یک روش قابل اعتماد برای ردیابی تقلب روغن پالم با سطوح 2، 3، 4 ، 5 ، 10، 30، 50 و 100 درصد و نمونه کنترل مثبت و منفی در ماست است. نتایج بدست آمده از مطالعه حاضر حاکی از آن بود که بیشترین و کمترین غلظت DNA استخراج شده به ترتیب متعلق به نمونه روغن پالم 3 درصد و 100 درصد بود؛ در حالی که در بین تمام نمونه‌ها، غلظت DNA استخراج شده در روغن کنجد و بعد از آن در نمونه روغن کنترل کمتر از سایر نمونه‌ها تعیین گردید. در نمونه‌های مورد بررسی کمترین و بیشترین میزان جذب (10mm) به ترتیب مربوط به نمونه روغن کنترل (غیر از پالم) و روغن پالم 100 درصد بود. بین نمونه‌های روغن پالم 4 درصد، 5 درصد و روغن کنجد تفاوت معنی‌داری در میزان جذب وجود نداشت. دامنه مورد نظر برای تشخیص تقلب روغن پالم از 05/0 تا 100 درصد روغن پالم بود. حد کمی‌سازی(LOQ) وحد تشخیص(LOD)به ترتیب برابر با 1/0 درصد و 05/0 درصد روغن پالم بود.

منابع و مأخذ:

1. آزمایشگاه‌جامع تحقیقاتی دانشگاه علوم پزشکی تربت‌حیدریه‌، 13۹۷. دستورالعمل آنالیز و تفسیر Real-time PCR. روش‌عملیاتی استاندارد، کد SOP-A-005، چاپ اول.


2. پیرانی،ن.،الیاسی‌زرین‌‌قبایی،ق. ۱۳۸۸‌. ‌استفاده ‌از ژن‌‌سیتوکروم‌‌b‌‌میتوکندری‌‌برای تشخیص همزمان گوشت ‌گاو، ‌گاو میش، ‌گوسفند ‌و ‌بز‌ به ‌روش Multiplex-PCR. ‌‌مجله‌پژوهش‌های‌علوم‌دامی، جلد۱۹، شماره ۱، ۴۹-۴۱


3. موسسه‌استاندارد‌و‌تحقیقات صنعتی ایران، 13۸۷. ماست – ویژگی و روش‌های آزمون. استاندارد ملی ایران، شماره ۶۹۵، تجدیدنظر پنجم.


4. هاشم‌زادگان،م.،حسینی،س.،تفویضی،ف.،بیات،م. ۱۳۹۷. سنجش مولکولی تقلب گوشت مرغ در همبرگر‌ممتاز‌به‌روش‌Simplex PCR و Duplex PCR.‌بهداشت ‌مواد ‌غذایی،‌ دوره ۸،‌ شماره۲، پیاپی۳۰، ۱۲-۱


5. Alonso, L., Fontecha, J., Lozada, L. and Juarez, M. 1997. Determination of mixtures in vegetable oils and milk fat by analysis of sterol fraction by gas chromatography. Journal of the American Oil Chemists' Society,‌74: 131-135.


6. Aparico, R. and Aparico-ruiz, R. 2000. Authentication of vegetable oils by chromatographic techniques. Journal of Chromatography A, 881: 93-104.


7. Aziznia, S., Khosrowshahi, A., Madadlou, A. and Rahimi, J. 2008. Whey Protein Concentrate and Gum Tragacanth as Fat Replacers in Nonfat Yogurt: Chemical, Physical, and Microstructural Properties. Journal of Dairy Science, 91: 2545-2552.


8. Breck, G. S. and Bhatia, S. C. 2008. Hand book of industrial oil and fat products, CBS publisher and distributors.


9. Casiraghi, M., Labra, M., Ferri, E., Galimberti, A. and De Mattia, F. 2010. DNA barcoding: a six-question tour to improve users' awareness about the method. Briefings in bioinformatics, 11: 440-453.


10. Derewiaka, D., Sosinska, E., Obiedzinski, M., Krogulec, A. and Czaplicki, S. 2011. Determination of the adulteration of butter. European Journal of Lipid Science and Technology, 113: 1005-1011.


11. Forootan, A., Sjöback, R., Björkman, J., Sjögreen, B., Linz, L. and Kubista, M. 2017. Methods to determine limit of detection and limit of quantification in quantitative real-time PCR (qPCR). Biomolecular Detection and Quantification, 12:1-6.


12. Horwitz, W. 1975. Official methods of analysis, Washington, DC, Association of Official Analytical Chemists.


13. Joseph A, O. D. 1989. Milk Fat Technologies and Markets: A Summary of the Wisconsin Milk Marketing Board 1988 Milk Fat Roundtable. J Dairy Sci, 72:‌ 3109-3115.


14. Kamm, W., Dionisi, F., Hischenhuber, C., Schmarr, H.-G. and Engel, K.-H. 2002. Rapid detection of vegetable oils in milk fat by on-line LC-GC analysis of β-sitosterol as marker. European Journal of Lipid Science and Technology, 104:756-761.


15. Karoui, R. and Debaerdemaeker, J. 2007. A review of the analytical

 

 methods coupled with chemometric tools for the determination of the quality and identity of dairy products. Food Chemistry, 102:621-640.

16. Khandelwal, G. and Bhyravabhotla, J.2010.A phenomenological model for predicting melting temperatures of DNA sequences. PloS one, 5(8): e12433.‏


17. Ong, A. S. H. 1994. Nutritional aspects of palm oil: an introductory review. Asia Pacific J Clin Nutr, 3:201-206.


18. Pei, A. Y., Oberdorf, W. E., Nossa, C. W., Agarwal, A., Chokshi, P., Gerz, E. A., et al.2010. Diversity of 16S rRNA Genes within Individual Prokaryotic Genomes. Applied and Environmental Microbiology, 76:3886-3897.


19. Poonia, A., Jha, A., Sharma, R., Singh, H. B., Rai, A. K. and Sharma, N. 2017. Detection of adulteration in milk: A review. International Journal of Dairy Technology,70:23-42 .


20. Ramchandran, L. and Shah, N. P. 2008. Effect of Addition of Versagel on Microbial, Chemical, and Physical Properties of Low-Fat Yogurt. Journal of Food Science, 73:M360-M367.


21. Reed, G. H., Kent, J. O. and Wittwer, C. T. 2007. High-resolution DNA melting analysis for simple and efficient molecular diagnostics. Pharmacogenomics, 8:597-608.


22. Shukla, A., Dixit, A. and Singh, R. 2005. Detection of adulteration in edible oils. Journal of oleo science, 54:317-324.


23. Singh, J., Birbian, N., Sinha, S. and Goswami, A. 2014. A critical review on PCR, its types and applications.  Int J Adv Res Biol Sci,1(7): 65-80.


24. Soha, S., Mortazavian, A., Piravi-vanak, Z., Mohammadifar, M., Sahafar, H. and Nanvazadeh, S. 2015. Adequacy of the Measurement Capability of Fatty Acid Compositions and Sterol Profiles to Determine Authenticity of Milk Fat Through Formulation of Adulterated Butter. Recent Patents on Food, Nutrition and Agriculture, 7:134-140.


25. Tiwari, A. and Wadhwa, V. MeltDNA: A Tool for Prediction of DNA Duplex Hybridization and Melting Thermodynamics. Bioinformatics India, 1:35-43.


26. Valentini, A., Pompanon, F. and Taberlet, P. 2009. DNA barcoding for ecologists. Trends in Ecology and Evolution, 24:110-117.


27. Winder, L., Phillips, C., Richards, N., Ochoa-Corona, F., Hardwick, S., Vink, C. J., et al. 2011. Evaluation of DNA melting analysis as a tool for species identification: DNA melt analysis for species identification. Methods in Ecology and Evolution, 2:312-320.


28. Wittwer, C. T. 2009. High-resolution DNA melting analysis: advancements and limitations. Human Mutation, 30:857-859.


29. Zhang, L., Wu, G., Wu, Y., Cao, Y., Xiao, L. and Lu, C. 2009. The Gene MT3-B Can Differentiate Palm Oil from Other Oil Samples. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 57:7227-7232.