غربالگری و کلونینگ ژن کد کننده آنزیم دکستراناز از استرپتومایسس¬های خاک جهت استفاده در موارد دندان پزشکی

محورهای موضوعی :

اشکان گودرزی ¹ , کیومرث امینی ^{2 *} , Mohaddeseh Larypoor ³

1 - دانشگاه آزاد اسلامی
2 - دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران
3 - .دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شمال

تاریخ دریافت : 1403/07/30 تاریخ پذیرش : 1403/09/22 تاریخ انتشار : 1404/01/25

کلید واژه: واژگان کلیدی: استرپتومایسس خاک, دکستراناز, کلونینگ ,

چکیده مقاله :

مقدمه: دکستراناز یکی از مهم‌ترین آنزیم¬های درمانی و صنعتی است. به دلیل اهمیت و کاربرد گسترده این آنزیم، هدف از این مطالعه تعیین مولکولی ،کلونینگ و کینتیک آنزیم دکستراناز از استرپتومایسس¬های خاک جهت استفاده در دندان پزشکی بود. روش کار: پس از شناسایی و انجام تست¬های بیوشیمیایی و مولکولی، استرپتومایسس¬های خاک جداسازی شدند. از طریق واکنش PCR سویه¬های استرپتومایسس دارای ژن آنزیم دکستراناز مشخص شدند. اسیدیته و دمای بهینه به منظور تولید دکستراناز نیز تعیین گردید. ژن دکستراناز سویه¬های مثبت از طریق وکتور به باکتری میزبان اشرشیا کلی الحاق و از طریق تکنیک TA کلونینگ کلون شد. در پایان از طریق تکنیک Real Time PCR، بیان ژن دکستراناز در اشرشیا کلی XL1blue سنجیده شد. نتایج: از غربالگری نمونه های خاک که بر اساس خصوصیات مورفولوژیک و بیوشیمیایی تعیین هویت شدند، در مجموع 12 ایزوله استرپتومایسس جداسازی شد. از 12 ایزوله تنها 3 ایزوله استرپتومایسس کویلی¬کالر دارای ژن دکستراناز بودند. اسیدیته بهینه دکستراناز 2/5 و دمای بهینه در محدوده 65-55 درجه سانتی¬گراد تعیین شد. صحت کلونینگ از طریق کلنی سلکشن، PCR و توالی¬یابی محصول PCR تایید شد. نتایج Real time PCR نیز بیان ژن دکستراناز را در باکتری اشریشیا کلی XL1blue تایید نمود. نتیجه¬گیری: نتایج این تحقیق نشان داد بررسی استرپتومایسس خاک بدلیل پتانسیل بالا در توليد دکستراناز، این سویه می-تواند زمینه¬ساز مطالعات آینده باشد و می¬توان این ایزوله¬ها را به عنوان کاندیدای مناسبی در طراحی و ساخت سویه¬های تولید کننده¬ی آنزیم معرفی نمود