معتبرسازی روش کروماتوگرافی مایع با کارکرد بالا در اندازه‌گیری هیستامین در ماست

محورهای موضوعی : علوم و صنایع غذایی

مریم جاهدی نیا ¹ , گیتی کریم ² , ایرج سهرابی حقدوست ³ , ، سید مهدی رضوی روحانی ⁴ , محبوبه اسکندری ⁵

1 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی، دانشجوی دکترای تخصصی بهداشت مواد غذایی، تهران، ایران
2 - - استاد گروه بهداشت مواد غذایی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
3 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، استاد گروه پاتولوژی دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی، تهران، ایران
4 - استاد گروه بهداشت مواد غذایی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران.
5 - - دانشجوی دکترای تخصصی شیمی تجزیه، دانشگاه صنعتی شاهرود، شاهرود، ایران

تاریخ دریافت : 1392/04/08 تاریخ پذیرش : 1393/01/17 تاریخ انتشار : 1392/12/01

کلید واژه: هیستامین, ماست, کروماتوگرافی مایع با کارکرد بالا, معتبرسازی,

چکیده مقاله :

آمین‌های بیوژن ترکیبات نیتروژنی آلی باوزن مولکولی پایین هستند که در اثر دکربوکسیلاسیون اسیدهای آمینه آزاد ایجاد می‌شوند. فرآورده‌های شیر از جمله غذاهایی هستند که میزان آمین‌های بیوژن در آنها بالاست. جهت اندازه‌گیری هیستامین و سایر آمین‌های بیوژن در مواد غذایی روش‌های مختلفی مورد استفاده قرار گرفته است که از بین آنها روش‌هایHPLC به عنوان روش مرجع اندازه‌گیری هیستامین در مواد غذایی مطرح می‌باشد. هدف این مطالعه معتبرسازی روشHPLC فاز معکوس جهت اندازه‌گیری هیستامین در ماست بود. فاز متحرک متشکل از استونیتریل و آب به نسبت (v/v 18:88) با سرعت جریان ml/min5/0 به صورت ایزوکراتیک بوده و پیک‌ها با استفاده از دتکتور UV در طول موج nm254 ردیابی گردیدند. پس از تزریق غلظت‌های مختلف از استاندارد هیستامین منحنی کالیبراسیون خطی بوده و ضریب تعیین‌کننده(r2) به میزان 998/0 بدست آمد. بازیافت مناسب در همه سطوح آلودگی مشاهده گردید و میانگین بازیافت84% برآورد گردید. در آزمون تکرارپذیری نیز درصد انحراف معیار نسبی (RSD (%4/4% بدست آمد. حد تشخیص و حد سنجش نیز به ترتیب /mlµ 14/ 0 و /mlµ42/0 بودند. نتایج آزمون معتبرسازی نشان داد که می‌توان از این روش به عنوان یک روش قابل اعتماد و سریع جهت اندازه‌گیری هیستامین در ماست استفاده نمود.

چکیده انگلیسی:

   Biogenic amines are organic, basic nitrogenous compounds of low molecular weight that are mainly generated by the enzymatic decarboxylation of amino acids by microorganisms. Dairy products are among the foods with the highest amine content. A wide variety of methods and procedures for determination of histamine and biogenic amines have been established. Amongst, HPLC method is considered as reference method. The aim of this study was to validate Reversed Phase HPLC method determination of histamine in yoghurt. The mobile phase consisted of acetonitrile/water (18:88 v/v) and the flow rate was set at 0.5 ml/min using isocratic HPLC. Detection was carried out at 254 nm using UV-detector. Calibration curve that was constructed using peak area of standards was linear and value of correlation coefficient (r2) was estimated at 0.998. Good recoveries were observed for histamine under investigation at all spiking levels and average of recoveries was 84%. The RSD% value from repeatability test was found to be %4.4. Limit of detection and limit of quantitation were 0.14 and 0.42 µ/ml, respectively. The results of validation tests showed that the method is reliable and rapid for quantification of histamine in yoghurt.

منابع و مأخذ:

• Aliakbarlu, J., Alizadeh, M., Razavi-Rohani, M., Vahabzade, Z., Saei, S. and Agh, A. (2009). Effects of Processing Factors on Biogenic Amines Production in Iranian White Brine Cheese, Research Journal of Biological Sciences, 4(1): 23-28.


• Amakoromo, E.R., Innocent-Adiele, H.C. and Njoku, H.O. (2012). Physico-chemicial Quality of a Yoghurt-Like Product from African Yam Bean, Report and Opinion, 4(4): 58-61.


• Baston, O., Stroia, A.L., Moise, M. and Barna, O. (2008). Validation study of a HPLC method able to measure Biogenic amines in chicken meat, Food Technology, New Series 2(31): 44-50.


• Baston, O., Moise, D., Barna, O. and Pricop, E.(2009). Validation study of a HPLC method for biogenic amines quantification in bananas, Scientific Paper Journal Agronomy Series, 52: 593-602.


• Battu, P.R. and Reddy, M.S. (2009). Development and Validation of RP-HPLC for the Rabeprazole Sodium in Pharmaceutical Formulations and Human Plasma, Asian Journal of Research in Chemistry. 2(1):49-51.


• Bodmer, S., Imark, C. and Kneubuhl, M. (1999).Biogenic amines in foods: Histamin and food processing, Inflammation Research, 48: 296-300.


• ·    Center for Drug Evaluation and Research. (1994). Reviewer Guidance' Validation of Chromatographic Methods – CDERwww.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/UCM134409.pdf.


• Cinquina, A.L., Longo, F., Cali, A., De Santis, L., Baccelliere, R. and Cozzani, R. (2004). Validation and comparison of analytical methods for the determination of histamine in tuna fish samples, 1032: 79-85.


• Commission Regulation (EC) N° 2073. (2005). Microbiological criteria for foodstuffs    http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2005:338:0001:0026: EN: PDF.


• Etienne, M. (2006). Methodology for histamine and biogenic amines analysis. http://archimer.ifremer.fr/doc/2006/rapport-6484.pdf.


• Food and Agriculture Organization Q2B. (2000). Validation of Analytical Procedures and Methods Validation- FDA.www.fda.gov/downloads/Drugs/Guidances/ucm122858.pdf.


• Food and Drug Administration, ora laboratory procedure. (2012). Methods, method verification and validation, FDAhttp://www.fda.gov/ora/science_ref/lm/default.htm


• Magwamba, C., Matsheka, M.I., Mpuchane, S. and Gashe, B.A. (2010). Detection and Quantification of Biogenic Amines in Fermented Food Products Sold in Botswana, Journal of Food Protection, 73(9):1703-8.


• McCabe Sellers, B.J., Staggs, C.G. and Bogle, M.L. (2005). Assessment of histamine content in foods. Proceedings of 29th National Nutrient Databank Conference. United State, Iowa.


• Onal, A. (2007). A review: Current analytical methods for the determination of biogenic amines in foods, Food Chemistry, 103(4): 1475-1486.


• Pourahmad, R. and Mazaheri Assadi, M. (2005). Yoghurt production by Iranian native starter cultures, Nutrition and Food Science, 35(6): 410-415.


• Simon-Sarkadai, L., elencser, E. and Vida, A. (2003). Immunoassay method for detection of histamine in foods, Acta Aliment Hung, 32(1): 89-93.


• Victorio, H.G. (2009). The development of a Direct Competitive ELISA for the determination of histamine in wine, Instituto Superior de Agromonia.


• Yeunyongsuwan, K., Kongkiattikajorn, J.,  Improved Procedure for Biogenic Amine Extraction from Fermented Food Products for HPLC Determination, fervaap. kku.a c.th / inter / images / Fervaap2005 / Oral.../FF/P-FF22FP.