مطالعه با هدف بررسی اثر ضد باکتریایی ترکیبی وبه تنهایی لاکتوفرین وسیستم لاکتو پراکسیداز استخرج شده از شیر شتر بر روی استافیلو‌کوکوس اورئوس انجام شد.خالص سازی لاکتوفرین و لاکتوپراکسیداز با استفاده از سانتریفوژ و استخراج آنزیم‌ها با روش کروماتوگرافی تعویض یونی با سفادکس چکیده کامل
مطالعه با هدف بررسی اثر ضد باکتریایی ترکیبی وبه تنهایی لاکتوفرین وسیستم لاکتو پراکسیداز استخرج شده از شیر شتر بر روی استافیلو‌کوکوس اورئوس انجام شد.خالص سازی لاکتوفرین و لاکتوپراکسیداز با استفاده از سانتریفوژ و استخراج آنزیم‌ها با روش کروماتوگرافی تعویض یونی با سفادکس CMC-50انجام گرفت .آنزیم ها با روش SDS.PAGE شناسائی ودر حضورمحلول فسفات سدیم دیالیز( تغلیظ)گردید که با اسپکتوفتومتردرطول موج 600 نانو‌متر عدد 23/714میکروگرم برای لاکتوفرین وعدد 4/774 برای لاکتو پر اکسیداز اندازه گرفته شد .جهت تعیین خاصیت ضد باکتریایی این دو آنزیم ترکیبی وجداگانه با سه رقت وهر رقت سه تکرارهمراه با یک کنترل مثبت ومنفی استفاده گردید.استافیلو کوکوس اورئوس بر روی محیط MHBبرده و 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گرادگرمخانه گذاری شد.جهت بررسی از سه رقت 100 و 200و 300میلی گرم بر میلی لیتر آنزیم لاکتوفرین و 01/0 و02/0 و04/0 میلی گرم بر میلی لیتر آنزیم لاکتو پراکسیداز به همراه 03/0 تیوسیانات و و 1مول پراکسید هیدروژن به همراه 6-10 باکتری کشت داده در زمانهای مختلف با اسپکتوفتومتر سنجیده شد . لاکتو فرین در غلظت 100 و200 میلی‌گرم بر میلی لیترسبب رشدبهتر باکتری ودرغلظت 300 میلی گرم بر میلی لیتر در ساعت 6 پس از شروع کشت 37% کاهش رشد نسبت به کنترل مثبت داشته است،لاکتو پراکسیداز در هر سه غلظت جلوی رشد را گرفته واثر غلظت 02/0 و04/0 اثر مشابه ای داشته است .در کشت ترکیبی آنزیم ها در هر سه غلظت بطور کامل رشد باکتری را جلوگیری کرده ولاکتوفرین اثر لاکتوپراکسیداز را افزایش داده است. می توان نتیجه گرفت که این دو پروتئین اثرهم افزایی برای مقابله با باکتری از خود نشان داده اند.
پرونده مقاله
لاکتوفرین یک پروتئین چند عملکردی با خاصیت ضدمیکروبی است که خواص متنوع و شگفت آوری داردو می‌تواند کاندید مناسبی جهت کاربرد‌های بالینی و تجاری باشد.در این بررسی جهت جداسازی لاکتوفرین ابتدا پروتئین‌های قسمت آب پنیری شیر با استفاده از روش کروماتوگرافی تعویض یونی توسط CM sep چکیده کامل
لاکتوفرین یک پروتئین چند عملکردی با خاصیت ضدمیکروبی است که خواص متنوع و شگفت آوری داردو می‌تواند کاندید مناسبی جهت کاربرد‌های بالینی و تجاری باشد.در این بررسی جهت جداسازی لاکتوفرین ابتدا پروتئین‌های قسمت آب پنیری شیر با استفاده از روش کروماتوگرافی تعویض یونی توسط CM sephadex C-50 خالص و جهت تایید خالص سازی ، از آزمایش SDS-PAGE و نیز عدم ایجاد رنگ در حضور تترامتیل بنزدین استفاده شد. در ادامه خرگوش سفید نر نیوزلندی با µg/ml120 لاکتوفرین و با استفاده از ادجوانت کامل و ناقص فروند به مدت 6 هفته ، ایمن شد وپس از جدا سازی سرم با آزمایش های دات بلات و الایزا آنتی بادی اختصاصی تایید گردید. جهت خالص سازی آنتی بادی اختصاصی از روش رسوب دهی با سولفات آمونیوم 40 درصد استفاده گردیدکه پس از تایید به سفارز فعال شده با سیانوژن متصل گردید، قسمت آب پنیری آغوز گاو از ستون کروماتوگرافی تمایلی عبورداده شد.بمنظور خالص نمودن لاکتوفرین، برای تشکیل کمپلکسی از آنتی ژن آنتی بادی واکنش داده و در نهایت سایر ترکیباتی که اتصال نیافته‌اند شسته شده وخارج می گردند.خالص سازی لاکتوفرین تایید و غلظت آن با آزمایش برادفورد محاسبه گردید.نتایج تحقیق نشان داد که روش ایمن نمودن، جهت تولید آنتی بادی اختصاصی بر علیه لاکتوفرین روشی مناسب بوده و خالص سازی لاکتوفرین ازشیرگاو با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی دارای بازده 64 درصد می باشد.
پرونده مقاله
