جداسازی، شناسایی و تعیین بیوتیپ یرسینیا انتروکولیتیکای بیماری‌زا از شیرهای پاستوریزه
محورهای موضوعی :
علوم و صنایع غذایی
شهرام حنیفیان
1
1 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تبریز، دانشکده کشاورزی، گروه علوم و صنایع غذایی، تبریز، ایران
تاریخ دریافت : 1391/03/21
تاریخ پذیرش : 1391/04/06
تاریخ انتشار : 1390/12/01
کلید واژه:
PCR,
یرسینیا انتروکولیتیکا,
شیر پاستوریزه,
Ail,
VirF,
چکیده مقاله :
به منظور بررسی وجود سویه های بیماری زای یرسینیا انتروکولیتیکا در شیر پاستوریزه، طی سال 1390 تعداد 242 نمونه شیر پاستوریزه عرضه شده در تبریز جمع آوری گردید. نمونه ها در محیط PSBB غنی سازی شد و از ژن های ail و virFبه عنوان توالی های هدف برای ردیابی سویه های بیماری زای یرسینیا انتروکولیتیکا در نمونه های غنی شده استفاده گردید. از نمونه های مثبت در آزمایش PCR در محیط CIN آگار وMacConkeyآگار کشت داده شد و پرگنه های مشکوک با duplex-PCRتأیید گردید. جهت تعیین بیوتیپ یرسینیا انتروکولیتیکا،جدایه باکتری به وسیله آزمون های بیوشیمیایی مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین شمارش تعداد باکتری های شاخص بهداشتی و آزمون کیفی فسفاتاز قلیایی (ALP) بر روی نمونه های شیر پاستوریزه انجام یافت. یرسینیا انتروکولیتیکای بیماری زا در 61/6% (16 نمونه) از نمونه های شیر پاستوریزه با روش ail-PCR ردیابی گردید. در حالی که 13/4% (10 نمونه) از نمونه ها با روش virF-PCRمثبت تشخیص داده شد. از بین نمونه های مثبت در آزمایش PCR، فقط 41/0% (1 نمونه) به وسیله کشت جداسازی و با duplex-PCR تأیید گردید. بر اساس آزمایش های بیوشیمیایی، جدایه یرسینیا انتروکولیتیکا ازنوع بیوتیپ 4 تعیین گردید. طبق نتایج مطالعه، 57/11% (28 نمونه) از نمونه های شیر پاستوریزه ALP مثبت بودند و تعداد باکتری های شاخص بهداشتی در این نمونه ها در قیاس با نمونه های ALP منفی تفاوت معنی دار (01/0>p) نشان داد. با توجه به حساسیت زیاد یرسینیا انتروکولیتیکا نسبت به حرارت پاستوریزاسیون، لذا آلودگی ثانویه می تواند دلیل اصلی حضور یرسینیا انتروکولیتیکای زنده در شیر پاستوریزه باشد.
چکیده انگلیسی:
In order to investigate the presence of virulent Yersinia enterocolitica in pasteurized milk, 242 samples were collected from Tabriz retails from 2011 to 2012. The samples were enriched in PSBB. Afterwards, virF and ail genes were exploited as target sequences for the detection of virulent Y. enterocolitica. PCR-positive samples were cultured on CIN agar and MacConkey agar. The selected isolates were confirmed by second-phase duplex PCR. For the biotyping of Y. enterocolitica, certain biochemical tests were performed on the isolate. The pasteurized milk samples were further analyzed for the enumeration of hygiene indicator bacteria and qualitative alkaline phosphatase (ALP) test. Virulent Y. enterocolitica were detected in 6.61% (16/242) of samples by ail-PCR, however, using virF-PCR 4.13% (10/242) of the samples were identified as positive. Among PCR-positive samples only 0.41% (1/242) were isolated by culture method and confirmed by second-phase duplex-PCR. Based on the biochemical assays, the isolated Y. enterocolitica was identified as biotype 4. Furthermore, 11.57% (28/242) of the samples were found positive for alkaline phosphatase test. The results revealed that the number of hygiene indicator bacteria in ALP-positive samples was significantly (p<0.01) higher than ALP-negative samples. Since Y. enterocolitica is very susceptible to pasteurization process, cross contamination could be the main reason for the presence of virulent Y. enterocolitica in the pasteurized milk.
منابع و مأخذ:
Anzabi, Y. and Hanifian, S. (2012). Detection of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis in pasteurized milk by IS900 PCR and culture method. African Journal of Microbiology Research, 6: 1453-1456.
Domig, K.J., Mayer, H.K. and Kneifel, W. (2003). Methods used for the isolation, enumeration, characterisation and identification of Enterococcus spp.: 1. Media for isolation and enumeration. International Journal of Food Microbiology, 88: 147-164.
Fredriksson-Ahomaa, M., Korte, T. and Korkeala, H. (2000). Contamination of carcasses, offals and the environment with yad A-positive Yersinia enterocolitica in a pig slaughterhouse. Journal of Food Protection, 63: 31-35.
Fredriksson-Ahomaa, M. and Korkeala, H. (2003). Low occurrence of pathogenic Yersinia enterocolitica in clinical, food, and environmental samples: a methodological problem. Clinical Microbiology Reviews, 16: 220-229.
Fredriksson-Ahomaa, M., Hartmann, B., Scheu, P. and Stolle, A. (2007). Detection of pathogenic Yersinia enterocolitica in meat using real-time PCR. Journal für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit, 2: 202-208.
Grant, T., Bennett-Wood, V., and Robins-Browne, R.M. (1998). Identification of virulenceassociated characteristics in clinical isolates of Yersinia enterocolitica lacking classical virulence markers. Infectious and Immunity, 66: 1113-1120.
Hanifian, S. and Karim, G. (2006). A study on the effect of Lactobacillus bulgaricus and Streptococcus thermophilus on survival of Yersinia enterocolitica during manufacture and storage of Iranian white cheese. Iranian Journal of Veterinary Sciences, 3: 485-492 [In Farsi].
Hanifian, S. (2009). The effect of inoculation levels of Yersinia enterocolitica on its survival in brined white cheese. Veterinary Journal of Islamic Azad University of Tabriz Branch, 3: 427-434 [In Farsi].
Hanifian, S. and Khani, S. (2012a). Prevalence of virulent Yersinia enterocolitica in bulk raw milk and retail cheese in northern-west of Iran. International Journal of Food Microbiology, 155: 89-92.
Hanifian, S. and Khani, S. (2012b). Fate of Yersinia enterocolitica during manufacture, ripening and storage of Lighvan cheese. International Journal of Food Microbiology, 156: 141-146.
Hartman, P.A., Deibel, R.H. and Sieverding, L.M. (2001). Enterococci, In: Pouch Downes, F., Ito, K. (Editors.), Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 3th Edition. American Public Health Association, Washington DC, pp. 83-87.
Hudson, J., King, N., Cornelius, A., Bigwood, T., Thom, K. and Monson, S. (2008). Detection, isolation and enumeration of Yersinia enterocolitica from raw pork. International Journal of Food Microbiology, 123: 25-31.
Institute of Standards and Industrial Research of Iran. (2008). Microbiology of milk and milk products specifications. 2nd revision, ISIRI No. 2406 [In Farsi].
Pearce, L.E., Smythe, B.W., Crawford, R.A., Oakley, E., Hathaway, S.C. and Shepherd, J.M. (2012). Pasteurization of milk: the heat inactivation kinetics of milk-borne dairy pathogens under commercial-type conditions of turbulent flow. Journal of Dairy Science, 95: 20-35.
Robins-Browne, R.M. and Hartland, E.L. (2003). Yersinia species, In: Miliotis, D. M. and Bier, J. W. (Editors.), International Handbook of Foodborne Pathogens. Marcel Dekker, Inc, pp. 143-144.
Soltan-Dallal, M.M., Tabarraie, A. and MoezArdalan, K. (2004). Comparison of four methods for isolation of Yersinia enterocolitica from raw and pasteurized milk from northern Iran. International Journal of Food Microbiology, 94: 87-91.
Sharifzade, A., Akhavan, M., Zarasvandi, A. and Al-Agha, S. (2005). Isolation of Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes from raw and pasteurized milk of Chahar-Mahal-Bakhtiyari province. Iranian Food Science and Technology Journal, 1: 15-19 [In Farsi].
Skurnik, M., Radström, P., Knutsson, R., Segerman, B., Hallanvuo, S., Thisted Lambertz, S., Korkeala, H. and Fredriksson-Ahomaa, M. (2010). Yersinia. In: Liu, D. (Editor), Molecular detection of foodborne pathogens. CRC Press, New York, pp. 501-513.
Thisted Lambertz, S. and Danielsson-Tham, M.L. (2005). Identification and characterization of pathogenic Yersinia enterocolitica isolates by PCR and pulsed-field gel electrophoresis. Applied and Environmental Microbiology, 71: 3674-3681.
Vishnubhatla, A., Fung, D., Oberst, R., Hays, M., Nagaraja, T., and Flood, S. (2000). Rapid 5′-nuclease (TaqMan) assay for detection of virulent strains of Yersinia enterocolitica. Applied and Environmental Microbiology, 66: 4131-4135.
Weagant, S.D. and Feng, P. (2001). Yersinia, In: Pouch Downes, F. and Ito, K. (Editors.), Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, 3th Edition. American Public Health Association, Washington DC, pp. 421-428.
Weagant, S.D., Feng, P. and Stanfield, J.T. (1998). Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis, In: Jackson, G.J., Merker, R.I. and Bandler, R. (Editors.), Bacteriological analytical manual, 8th Edition. FDA publication, USA, pp. 156-170.
