ایمنی زایی کونژوگه آلژینات سودوموناس آئروژینوزا و توکسوئید دیفتری در موش

محورهای موضوعی : میکروب شناسی مولکولی

غزاله جابری ¹ (کارشناس ارشد، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم تحقیقات کرمان، گروه میکروب شناسی)
رضا شاپوری ² (استادیار، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد زنجان، گروه میکروب شناسی)
اشرف کریمی نیک ³ (مربی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد کرمان، گروه میکروب شناسی)

تاریخ دریافت : 1392/01/12 تاریخ پذیرش : 1392/02/15 تاریخ انتشار : 1392/03/11

کلید واژه: الایزا, سودوموناس آئروژینوزا, آلژینات, توکسوئید دیفتری, واکسن کونژوگه,

چکیده مقاله :

سابقه و هدف: : سودوموناس آئروژینوزا از مهم ترین پاتوژن های عفونی در پزشکی به شمار می آید. این باکتری عفونت های مختلفی به ویژه در بیماران دچار سوختگی های شدید و افراد دارای نقص سیستم ایمنی ایجاد می نماید. این پژوهش با هدف تهیه ترکیب آنتی ژنی کونژوگه با قابلیت القای تولید آنتی بادی و ایمنی خاطره ای علیه سودوموناس آئروژینوزا در مدل موش انجام شد. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت تجربی بر روی سویه PAO1 باکتری سودوموناس آئروژینوزا انجام شد. در ابتدا باکتری در محیط اختصاصی کشت و آلژینات آن استخراج و تغلیظ گردید. سپس توکسوئید دیفتری، ADH و EDAC به عنوان مولکول فاصله گذار و مولکول اتصال دهنده اضافه شدند. محلول کونژوگه آلژینات و توکسوئید دیفتری از ستون کروماتوگرافی (CL-2B) عبور و آزمون های کنترل کیفی بر روی آن انجام شد. آنتی ژن تهیه شده به موش های نژاد BALB/c با میزان 10 میکروگرم تزریق گردید. واکسیناسیون در سه دوز به صورت داخل صفاقی با فواصل دو هفته ای انجام و خون گیری دو هفته پس از هر تزریق صورت گرفت. سپس میزان آنتی بادی های سرمی برای IgG ، IgA و IgM با روش الایزا اندازه گیری شد. یافته ها: آنتی بادی های سرمی گروه واکسینه شده با ALG-DT پس از هر تزریق افزایش معنی داری از لحاظ آماری داشتند. به طوری که میزان تیتر IgG تام، IgM و IgA تولید شده علیه آلژینات در گروه های واکسینه با کونژوگه نسبت به آلژینات خالص در سه تزریق به ترتیب به طور متوسط 3/5، 1/7 و 1/2 برابر افزایش نشان داد. نتیجه گیری: افزایش تیتر آنتی بادی در گروه های واکسینه با کونژوگه آلژینات نشان دهنده فعال شدن سلول های T و ایجاد خاطره ایمنی می باشد. بنابراین کونژوگه آلژینات و توکسوئید دیفتری می تواند کاندید مناسبی به منظور تهیه واکسن باشد.

چکیده انگلیسی:

Background and Objectives: Pseudomonas aeruginosa is one of the most important infectious agent in medicine. These bacteria cause several infections especially in the patient with high degrees of burns and in immunodeficiency cases. The purpose of this study was providing conjugated antigen component that can induct production of antibody and memory immune in mouse model against Pseudomonas aeruginosa.  Materials and Methods: After culturing P. aeruginosa strain PAO1 and extraction of alginate, Diphteria toxoid, ADH and EDAC were added as protein carrier, spacer and linker, respectively to the alginate. After passing the Alginate diphtheria toxoid conjugated (ALG-DT) through chromatography column (CL-2B), its quality was checked to get the quality control label. The prepared antigens were intraperitoneally injected to BALB/c mice (10µg/ml/mouse) for three times once each two weeks. Blood sampling was performed after two weeks of each injection and the levels of serum IgG, IgA and IgM were measured by ELISA. Results: The titer of serum antibodies of vaccinated group with ALG-DT increased significantly after each injection. The levels of serum IgG, IgM and IgA against alginate in vaccinated group was significantly more than the control groups, and after third injection reached to 3.5, 1.7 and 1.2 times increases, respectively. Conclusion: The increases in the levels of  antibodies in vaccinated groups are an indicator of activation of T-cells and memory cells. As a result, the conjugated alginate-diphtheria toxoid can be appropriate candidates for production of vaccine.