مقایسه واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز (PCR) و الیزای تجاری به‌منظور شناسایی عفونت با ویروس لکوز در گاوهای شیری
محورهای موضوعی :
آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی
رضی‌اله جعفری‌جوزانی
1
,
غلامعلی مقدم
2
,
محسن آسمند
3
1 - دانشیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران.
2 - استاد گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تبریز، تبریز، ایران.
3 - دانش‌آموخته دامپزشکی، شرکت سوا، تهران، ایران.
تاریخ دریافت : 1394/06/29
تاریخ پذیرش : 1394/09/30
تاریخ انتشار : 1394/09/01
کلید واژه:
لکوز گاو,
واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز (PCR),
الیزای تجاری,
چکیده مقاله :
ویروس لوسمی گاوی (BLV) یک رتروویروس است که باعث لکوز انزوتیک گاوی می شود. روش متداول برای شناسایی وجود عفونت با BLV غربالگری آنتی بادی ها است. آگار ژل ایمونودیفیوژن و الیزا به طور گسترده ای برای شناسایی آنتی بادی های ضد BLV استفاده می شود. تکثیر و شناسایی DNA پروویروس لکوز گاو به وسیله واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) روش توانمندی است که قادر به تشخیص مستقیم عفونت می باشد. با این حال، استفاده گسترده از این روش به منظور تشخیص آزمایشگاهی بیماری محدودیت‌هایی داشته و نیاز به مطالعات بیشتری دارد. هدف از این مطالعهمقایسه نتایج آزمون واکنش زنجیره ای پلی مراز و یک الیزای تجاری در شناسایی پروویروس لکوز گاو و آنتی بادی های ضد این ویروس در خون گاو های شیری بود. بدین منظور حساسیت و ویژگی نسبی واکنش زنجیره ای پلی مراز در مقایسه با یک الیزای تجاری مورد ارزیابی قرار گرفت. نمونه های خونی از 173 رأس گاو شیری از گاوداری های اطراف تبریز تهیه شد و توسط یک الیزای تجاری به منظور تشخیص آنتی بادی ضد لکوز ویروس گاو و نیز توسط واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز مورد ارزیابی قرار گرفتند. حساسیت و ویژگی نسبی آزمون واکنش زنجیره ای پلی مراز در مقایسه با الیزای تجاری به ترتیب 100% و 6/98% محاسبه شد. فراوانی حضور بخش هدف از ژن gag در واکنش زنجیره ای پلی مراز 3/13% و فراوانی پاسخ سرمی مثبت با الیزای تجاری 1/12% به دست آمد. نتایج حاکی از آن است که امکان استفاده از واکنش زنجیره ای پلی مراز در تشخیص آزمایشگاهی بیماری وجود دارد.
چکیده انگلیسی:
Bovine Leukemia Virus (BLV) is a retrovirus that causes bovine enzootic leukemia (EBL). The routine method for the diagnosis of the infection is antibody screening tests. Agar gel immunodiffusion (AGID) and ELISA are widely used for detection of the antibody against BLV. Amplification and detection of the proviral DNA by PCR is a powerful method for direct detection of the infection. However there are some limitations for routine use of this method in laboratory diagnosis of the disease and it requires further investigations. The objective of this study was to compare the results of a PCR assay with a commercial ELISA in detection of the bovine leukemia provirus and antibodies to this agent, in blood samples of dairy cows. The ELISA was assumed as reference test and the relative sensitivity and specificity of the PCR assay was calculated by testing samples from 173 cows in suburb of Tabriz. Blood sample were taken and taken sera and DNA contents were harvested. Sensitivity and specificity of the PCR assay in caparison to commercial ELISA were 100% and 98.6% respectively. The frequency of the presence of the targeted part of gag gene in PCR was 13.3% and the frequency of the seropositive reaction by commercial ELISA was 12.1%. The results showed that it is possible to use PCR as a laboratory diagnostic method for identification of the disease.
منابع و مأخذ:
حاجی حاجیکلایی، م.ر.، صیفی آباد شاپوری، م.ر. و اکبری م. (1375). مطالعه سرولوژیکی آلودگی به ویروس لکوز گاوی (BLV) در گاوهای اهواز. پژوهش و سازندگی، شماره 71، صفحات: 30-26.
حدادزاده، ح.ر. (1364). فراوانی آلودگی با ویروس لکوز انزئوتیک گاوها در گاوداری های اطراف تهران، پایان نامه برای دریافت دکتری دامپزشکی از دانشگاه تهران، شماره 1577.
کارگر موخر، ر.، اهورایی، پ.، قابوسی، ب.، خدمتی. ک.، عزی، ع.، پورزاهدی، ر. و همکاران (1375). بررسی سرواپیدمیولوژیک بیماری لکوز آنزوتیک گاوان (EBL) در ایران، پژوهش و سازندگی، شماره 30، صفحات: 166-164.
ممتاز، ح. و همت زاده، ف. (1374). بررسی سرولوژیک آلودگی به ویروس لکوز گاو ها (BLV) در گاوداریهای استان چهارمحال و بختیاری. مجله تحقیقات دامپزشکی ایران، دوره 4، شماره1، صفحات: 44-37.
Brandon, R., Naif, H., Daniel, R.C.W. and Lavin, M.F. (1991). Early detection of bovine leucosis DNA in infected sheep using the polymerase chain reaction. Research in Veterinary Sciences, 50: 79-94.
Burkhardt, H., Fechner, H., Mewes, G., Mewes, L., Wagner, H. and Ebner, D. (1993). Search with capture-ELISA nucleic acid probe and DNA-ampli®cation for BLV in a AGID seronegative dairy cattle herd in a long term study. In: 22nd FEBS Meeting, Stockholm, Sweden.
Eaves F.W., Molloy, J., Dimmock, C. and Eaves, L. (1994). A field evaluation of the polymerase chain reaction procedure for the detection of bovine leukaemia virus proviral DNA in cattle. Veterinary Microbiology, 39: 313-321.
Fechner, H., Kurg, A., Geue, L., Blankenstein, P., Mewes, G., Ebner, D., et al. (1996). Evaluation of polymerase chain reaction (PCR) application in diagnosis of bovine leukaemia virus (BLV) infection in naturally infected cattle. Zentralbl Veterinarmed, 43(10): 621-30.
Heeney, J., Valli, P., Jacobs, R. and Valli, V. (1992). Evidence for bovine leukemia virus infection of peripheral blood monocytes and limited antigen expression in bovine lymphoid tissue. Laboratory Investigations, 66: 607-617.
Jacobs, R.M., Smith, H.E., Gregory, B., Valli, V.E. and Whetstone, C.A. (1992). Detection of multiple retroviral infections in cattle and cross-reactivity of bovine immunode®ciency-like and human immunode®ciency virus type 1 proteins using bovine and human sera in a Western blot assay. Canadian Journal of Veterinary Research, 56: 353-359.
Jafari Jozani, R., Moghaddam, Gh., Khazraiinia, P. and Jabbari Nooghabi, H. (2010). Adaptation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay by purified gp51SU for detection of antibodies to bovine leukemia virus. Iranian Journal of Veterinary Research, 11 (4): 332-336.
Johnson, R. and Kaneene, J.B. (1991). Bovine leukemia virus. Part 1.Descriptive epidemiology, clinical manifestations and diagnostic tests. Compensation Continuing Education 13: 315-325.
Johnson, R. and Kaneene, J.B. (1992). Bovine leukaemia virus and enzootic bovine leukosis. Veterinary Bulletin, 62: 276-312.
Kittelberger, R., Laybourn, B.J., Diack, D.S., Penrose, M.E., Reichel, M.P., Motha, J., et al. (1996). Evaluation of electrophoretic immunoblotting for the detection of antibodies against the bovine leukosis virus in cattle. Journal of Virological Methods, 61: 7-22.
Klintevall, K., Ballagi-Pordany, A., Naslund, K. and Belak, S. (1994). Bovine leukemia virus: rapid detection of roviral DNA by nested PCR in blood and organs of experimentally infected calves. Veterinary Microbiology, 42: 191-204.
Landis, J.R. and Koch, G.G.) 1977(. The measurement of observer agreement for categorical data. Biometrics, 33: 159-174.
Poon, H., Jimenez, E., Jacobs, R.M., Song, Z. and Jefferson, B. (1993). Detection of bovine leukemia virus RNA in serum using the polymerase chain reaction. Journal of Virological Methods, 41: 101-112.
Schwartz, I., Bensaid, A., Polack, B., Perrin, B., Berthelemy, M. and Levy, D. (1994). In vivo leukocyte tropism of bovine leukemia virus in sheep and cattle. Journal of Virology, 67: 4579-4596.
Sherman, M., Ehrlich, G., Ferrer, J., Sninsky, J., Zandomeni, R., Dock, N. and Poiesz, B. (1992). Amplification and analysis of specific DNA and RNA sequences of bovine leukemia virus from infected cows by polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology, 30: 175-191.
Sherman, M.P., Ehrlich, G.D., Ferrer, J.F., Sninsky, J.J., Zandomeni, R., Dock, N.L., et al. (1992). Ampli®cation and analysis of speci®c DNA and RNA sequences of bovine leukemia virus from infected cows by polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology, 30: 175-191.
Simard, C., Richardson, S., Dixon, P., Bélanger, C. and Maxwell, P. (2000). Enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of bovine leukosis: comparison with the agar gel immunodiffusion test approved by the Canadian Food Inspection Agency. Canadian Journal Veterinary Research, 64(2): 101-106.
Tani, K., Asahina, M., Wu, D.L., Ajito, T., Murakami, K., Goryo, M., et al. (1997). Further analysis of the phenotype and distribution of tumor cells in sporadic B-cell and T-cell lymphomas in the lymph node and spleen of cattle. Veterinary Immunology and Immunopathology, 55: 273-290.
