هورمون رشد باعث تحریک رشد و تکثیر سلول ها در انسان و حیوانات می شود. این هورمون یک پلی پپتید تک زنجیره ای با 191 اسید آمینه است که در سلول های سوماتوتروف واقع در بال جانبی غده هیپوفیز پیشین ساخته شده و ذخیره و ترشح می گردد. هدف از این تحقیق کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری برای اولین بار در ایران می باشد. به منظور کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری، RNA از غده هیپوفیز گوسفند تازه کشتار شده، استخراج و cDNA هورمون رشد ساخته شد. با استفاده از روش کلون سازی T/A، قطعه cDNA هورمون رشد کلون شد و سپس به باکتری E. coli به عنوان میزبان منتقل گردید. تأیید صحت کلون های به دست آمده با روش های PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی انجام گرفت. کلون سازی cDNA ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری با موفقیت انجام شد و توالی ژن کد کننده هورمون رشد گوسفند با طول690 جفت باز مشخص گردید. مقایسه توالی ژن هورمون رشد موجود در پلاسمید نوترکیب ساخته شده با رکوردهای ثبت شده در بانک ژن جهانی، نشان دهنده شباهت بسیار زیادی بین توالی هورمون رشد گوسفند بومی ایران با سایر نژادهای دنیا می باشد. تفاصيل المقالة

بیماری برونشیت عفونی یک بیماری ویروسی واگیردار تنفسی است که عامل بیماری واجد سروتیپ های متعددی است. در این بررسی به شناسایی تیپ 91/4 (793/B) برونشیت عفونی در استان چهارمحال و بختیاری پرداخته شده است. به این منظور از 18 گله جوجه گوشتی واجد سندرم تنفسی مشکوک به برونشیت عفونی با تلفات بیش از یک درصد در روز نمونه نای اخذ شد. پس از استخراج RNA از نمونه های بافتی نای، در واکنش RT-PCR یک مرحله ای قطعه ای از ژن S1 ویروس برونشیت عفونی تکثیر شد و محصول RT-PCR با پرایمرهای اختصاصی تیپ91/4 به روش Nested-PCR تکثیر شد. نتایج نشان داد از 18 گله مبتلا به مشکلات تنفسی 11 گله یا به عبارتی 11/61% آلوده به ویروس برونشیت عفونی بودند که در گله های مبتلا به برونشیت عفونی، 45/45% آلودگی با تیپ 91/4 را نشان دادند. لذا به نظر می رسد تیپ 91/4 برونشیت عفونی در شکل گیری و پیچیده سازی علایم تنفسی در جوجه های گوشتی مبتلا به سندرم تنفسی در استان چهارمحال و بختیاری نقش داشته باشد و لازم است سیاست های کنترلی مناسب در جهت پیشگیری از آلودگی با تیپ 91/4 برونشیت عفونی اتخاذ گردد. تفاصيل المقالة

سابقه و هدف: رشد مناسب شترمرغ به هورمون رشد آن و تغذیه بستگی دارد. هورمون رشد شترمرغ یک پلی پپتید است که موجب تحریک رشد و تکثیر سلول ها می شود. هدف از این مطالعه همسانه سازی و تولید دو سازواره ژنی به منظور بیان هورمون رشد شترمرغ در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی می باشد. مواد و روش ها: در این پژوهش، RNA از غده هیپوفیز شترمرغ تخلیص شد و cDNA آن به روش رونوشت برداری معکوس تهیه گردید. cDNA حاصل، به روش همسانه سازی T/A در پلاسمید TOPO کلون شد. سپس ساب کلونینگ cDNA هورمون رشد شترمرغ در وکتورهای pcDNA3.1 و pET32 انجام شد. یافته ها: همسانه سازی cDNA هورمون رشد شترمرغ در پلاسمید TOPO با موفقیت انجام شد و روش های PCR و هضم اندونوکلئازی، صحت کلون سازی را تایید نمود. پس از ساب کلونینگ این cDNA، پلاسمید های نوترکیب، pcDNA3.1-gh و pET32-gh حاصل گردید و سازواره های حاصل توسط هضم آنزیمی تایید گردیدند. نتیجه گیری: با استناد به نتایج به دست آمده در این مطالعه به نظر می رسد که سازه های ژنی تازه ساخته شده در این پژوهش می تواند به عنوان یک راهکار مناسب برای تولید صنعتی هورمون رشد شترمرغ مورد استفاده قرار گیرند. تفاصيل المقالة

سابقه و هدف: داشتن فلاژل و تحرک از عوامل مهم در استقرار و بیماری زایی هلیکوباکتر پیلوری می باشد. flaB ، یکی از ژن های مهم کد کننده پروتئین تاژکی است که آنتی بادی تولید شده علیه آن نقش عمده ای در ایمنی زایی ایفا می کند. هدف از این پژوهش، ساخت سازواره ژنی حامل ژن flaB و بررسی بیان آن در سلول های یوکاریوتی به عنوان گزینه ای برای تولید واکسن می باشد.مواد و روش ها: کلون سازی و ساب کلونینگ ژن flaB در پلاسمیدهای pTZ57RT و pBudCE4.1 انجام شد. سپس صحت کلون های بدست آمده با روش های PCR، هضم آنزیمی دوگانه و توالی یابی تایید شد. پس از انتقال سازواره تایید شده به سلول های HDF، بیان ژن در سطح ترانس کریپتوم و پروتئوم به دو روش RT-PCR و SDS-PAGE بررسی شد.یافته ها: نتایج PCR نشان دهنده تکثیر قطعه 1563 جفت بازی مربوط به ژن flaB بود. کلون سازی ژن مورد نظر با استفاده از سه روش PCR، هضم آنزیمی دوگانه و توالی یابی تایید گردید. مشاهده باند های 1563 جفت بازی و 56 کیلودالتونی حاصل از RT-PCR و SDS-PAGE نشان دهنده بیان موفق این سازواره در سلول های HDF بود.نتیجه گیری: سازواره نوترکیب توانایی تولید پروتئین FlaB را در سلول های جانوری دارد، بنابراین با توجه به نتایج بدست آمده این سازواره می تواند به عنوان یک انتخاب به منظور تولید واکسن ژنی موثر علیه هلیکوباکتر پیلوری استفاده گردد. تفاصيل المقالة

روش تکثیر هم دمایی به واسطه حلقه (LAMP) مبتنی بر تکثیر اسید نوکلئیک در دمای ثابت ˚C 65-62 است. در این روش بدون نیاز به مرحله واسرشت شدن حرارتی، به کمک آنزیم DNA پلی مراز Bst به صورت هم زمان امکان جداسازی و تکثیر دو رشته DNA وجود دارد. بنابراین بر خلاف سایر روش های متداول تکثیری ، بدون نیاز به چرخه های دمایی و دستگاه ترموسایکلر و با استفاده از تجهیزات ارزان قیمتی مانند حمام آب گرم و یا بلوک حرارتی قابل انجام است. برای طراحی واکنش LAMP نیاز به 6 عدد پرایمر وجود دارد که توانایی اتصال کاملاً اختصاصی به 8 ناحیه مجزا از توالی هدف را داشته باشند. در نتیجه واکنش LAMP مقدار بسیار زیادی محصول ایجاد می شود که بدون نیاز به روش پر زحمت الکتروفورز در ژل، به کمک روش های ساده تری مانند مشاهده کدورت و یا تغییر رنگ ناشی از رنگ های فلورسنس در مخلوط واکنش به سادگی قابل تشخیص می باشد. بدین ترتیب روش LAMP با توجه به مزایایی مانند حساسیت و ویژگی مناسب ، کارایی بالا ، عدم نیاز به تجهیزات آزمایشگاهی گران قیمت و سادگی تشخیص، می تواند به عنوان ابزاری ارزشمند برای تشخیص سریع بیماری های عفونی در آزمایشگاه های کلینیکی و بیمارستانی به ویژه در کشورهای درحال توسعه به کار برده شود. این مقاله با هدف معرفی مبانی و کاربردهای روش LAMP در تشخیص عوامل عفونی تدوین گردیده است. تفاصيل المقالة

سابقه و هدف: یون یک بیماری مزمن روده ای در نشخوار کنندگان اهلی و وحشی می باشد که عامل ایجاد آن مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس است. این باکتری عامل بیماریزای مشترک بین انسان و دام است که گسترش جهانی دارد و نیازمند روشی مطمئن برای پیشگیری و کنترل می باشد. هدف از این پژوهش، ارائه روشی سریع و دقیق براساس Nested PCR برای تشخیص مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس در مدفوع گاو می باشد. مواد و روش ها: از تعداد 120 نمونه مدفوع گاو های مشکوک به بیماری یون، استخراج DNA صورت گرفت سپس با استفاده از پرایمر های اختصاصی ژن IS900واکنش Nested PCR تنظیم و انجام شد. محصولات PCR بدست آمده روی ژل آگارز الکتروفورز گردید. یافته ها: از مجموع 120 نمونه مورد بررسی، 22 مورد (33/18 درصد) به مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس آلوده بودند که در آزمون PCR مثبت تشخیص داده شدند. نتیجه گیری: تکنیک Nested PCR یکی از روش های سریع، مطمئن و کم هزینه برای تشخیص مایکوباکتریوم پاراتوبرکیلوسیس محسوب می شود. تفاصيل المقالة

سابقه و هدف: روش های سنتی در تشخیص باکتری های پاتوژن منتقله از طریق غذا بسیار وقت گیر و زمانبر می باشند، بنابراین استفاده از روش های دقیق و قابل اطمینان در تشخیص پاتوژن های میکروبی مورد نیاز است. هدف از این پژوهش طراحی پرایمرهای یونیورسال برای تکثیر ژن 23S rDNA و هیبریدیزاسیون ریز آرایه های الیگونوکلئوتیدی به منظور ارزیابی کارایی و عملکرد توالی 23S rDNA در تشخیص باکتری های منتقل شونده از طریق غذا می باشد. مواد و روش ها: با مقایسه نواحی ثابت و متغیر ژن 23S rDNA از 9 گونه باکتری پاتوژن منتقله از طریق غذا و با استفاده از اطلاعات موجود در بانک ژنی، طراحی پروب های الیگونوکلئوتیدی با استفاده از نرم افزار Vector NTI صورت گرفت. پروب های الیگونوکلئوتیدی برای هر گونه از باکتری ها (مجموعاً 28 پروب) برای اتصال به غشای نیتروسلولزی استفاده شد. PCR از ژن مذکور با استفاده از یک جفت پرایمر یونیورسال نشاندار شده توسط Digoxigenin صورت گرفت. سپس محصولات بدست آمده با آرایه های نوکلئوتیدی متصل به غشای نیتروسلولزی هیبربد گردیدند. یافته ها: در این مطالعه از اشریشیا کلی، لیستریا مونوسیتوژنز، انتروکوکوس فکالیس، ویبریو کلرا، شیگلا دیسانتری، استافیلوکوکوس اورئوس، سالمونلا انتریکا، پروتئوس ولگاریس و باسیلوس سرئوس به عنوان شایع ترین باکتری های پاتوژن منتقله از طریق غذا استفاده گردید. نتایج نشان داد که به استثنای شیگلا دیسانتری سایر باکتری ها قادر به تشخیص و شناسایی توسط ریز آرایه های الیگونوکلئوتیدی می باشند. حساسیت روش ریز آرایه ها 103 واحد تشکیل دهنده کلنی (CFU) محاسبه گردید. نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که 23S rDNA، به دلیل داشتن نواحی متغییر کافی و همچنین با استفاده از پرایمرهای یونیورسال و تکثیر نواحی حفاظت شده ژن یاد شده می توان در تشخیص باکتری های پاتوژن استفاده نمود. بنابراین تکنیک ریزآرایه های الیگونوکلئوتیدی یک روش سریع و قدرتمند در تشخیص این پاتوژن ها می باشد. تفاصيل المقالة

سابقه و هدف: باکتری‌های سالمونلا ابورتوس اویس و بروسلا از مهم‌ترین عوامل سقط جنین گوسفند در سراسر دنیا می‌باشند. روش‌های مستقیم جداسازی باکتری شناسی برای تشخیص این آلودگی‌ها قابل انجام است اما این روش‌ها مشکل، زمان‌بر و خطرناک می‌باشند. هدف از این پژوهش، مقایسه روش‌های متداول باکتری شناسی و مولکولی برای شناسایی باکتری‌های یاد شده می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی، 38 نمونه جنین سقط شده از گله‌های مختلف گوسفند در استان چهارمحال و بختیاری جمع آوری گردید. سپس با استفاده از روش‌های مستقیم کشت و PCR چندگانه (mPCR) نمونه‌ها مورد ارزیابی قرار گرفتند. یافته‌ها: 5 مورد (1/13%) از نمونه‌ها به بروسلا، 19 مورد (50%) از نمونه‌ها به سالمونلا ابورتوس اویس و 4 مورد (6/10%) از نمونه‌ها به بروسلا و سالمونلا ابورتوس اویس به شکل توام آلوده بودند. در 10 مورد (3/26%) از نمونه‌ها نیز هیچ آلودگی در روش mPCR تشخیص داده نشد. در بررسی‌های باکتری شناسی 5 مورد (1/13%) از نمونه‌ها آلوده به بروسلا، 9 مورد (7/23%) آلوده به سالمونلا ابورتوس اویس و در 24 (2/63%) نمونه نیز هیچ آلودگی تشخیص داده نشد. نتیجه گیری: با توجه به سادگی و توانایی جستجوی هم‌زمان باکتری‌ها با روش PCR چندگانه، استفاده از آن برای تشخیص هم‌زمان سالمونلا ابورتوس اویس و بروسلا پیشنهاد می‌شود. تفاصيل المقالة