بررسی بیان توالی کامل ژن گلیکوپروتئین سطحی 2 ویروس هپاتیت C در مخمر پیکیا پاستوریس
محورهای موضوعی : ویروس شناسیراحله صولت 1 , پونه رحیمی 2 , غلامرضا بخشی خانیکی 3 , محمدرضا آقاصادقی 4 , روح الله وهاب پور 5 , مهدی شکری 6
1 - کارشناس ارشد، دانشگاه پیام نور، واحد تهران شرق، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی
2 - استادیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران ، گروه ویروس شناسی
3 - استاد، دانشگاه پیام نور، واحد تهران شرق، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی
4 - دانشیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، گروه ویروس شناسی
5 - دانشجوی دکتری تخصصی، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران
6 - دانشجوی دکتری تخصصی، بخش ایمونولوژی، انستیتو پاستور ایران
کلید واژه: گلیکوپروتئین E2, ویروس هپاتیت C سویه JFH1, وکتور pPICZAa, پیکیا پاستوریس,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: عفونت ویروس هپاتیت C با اتصال پروتئینE2 ویروس به گیرنده سطح سلول کبد انسان آغاز می شود. بنابراین به عنوان یکی از اهداف تحقیقات دارو و واکسن بر علیه این عفونت مطرح می باشد. این مطالعه برای اولین بار در ایران با هدف انتقال تمام طول ژن HCV-2a (JFH1) E2 توسط وکتور نوترکیب E2-pPICZAa به مخمر پیکیاپاستوریس سویه KM71H و بیان ژن یاد شده در این سیستم بیانی انجام شد. مواد و روش ها: ژنE2 با پرایمرهای واجد جایگاه آنزیم های برش دهنده EcoRI و XbaI به طور تمام طول تکثیر شد. این ژن به وکتورهای T-PTG19 وpPICZAa وارد و سپس به باکتری اشریشیا کلی منتقل گردید. وکتور نوترکیب pPICZAa-E2 با روش الکتروپوریشن به مخمر منتقل شد. انتقال توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی بررسی گردید. مخمر به مدت 5 شبانه روز در محیط کشت بیانی YNB متانول دار رشد کرد و بیان ژن مورد نظر با روش وسترن بلات بررسی شد. یافته ها: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول pPICZAa-(JFH1) E2، انتقال به میزبان های باکتریایی و مخمری و نیز بیان ژن در سیستم مخمری KM71H با موفقیت انجام شد. نتیجه گیری: در این پژوهش امکان بیان ژن تمام طولE2 ویروس هپاتیت C سویه JFH1 (به عنوان سویه مدل در تحقیقات بر روی این ویروس) با موفقیت انجام گرفت. نتایج این مطالعه می تواند راه گشای پژوهش های آینده جهت بررسی ساختار و عملکرد این پروتئین باشد.
Background & Objectives: Hepatitis C virus infection initiates through binding of E2 glycoprotein to its specific human liver cell receptor. Therefore, this glycoprotein is considered as one of the important targets in drug and vaccine researches against this infection. This project was accomplished for the first time to transfer the full length of E2 gene by using recombinant pPICZAa-E2 (HCV-2a, JFH1) vector into Pichia pastoris yeast KM71H strain, and to evaluate the possibility of its expression in this expression system. Materials & Methods: The E2 gene was amplified by using primers containing the EcoRI and XbaI restriction sites and was inserted into the (T-PTG 19) and (pPICZAa) vectors to be transferred into the E. coli. The recombinant pPICZAa-E2 vector was transferred into the yeast through electroporation, and it was evaluated by digestion and sequencing. The yeast was grown in YNB medium contained methanol for five days. Gene expression was studied by western blot. Results: Construction of a recombinant vector pPICZAa-(JFH1)E2, transforming the yeast and its expression in KM71H strain were successfully done. Conclusion: In this study, the whole length of E2 Ag of HCV JFH1, as the protype strain of this virus, was successfully expressed. The result of this study can be used for further analysis of the structure and function of this protein.