کلون سازی وبیان ژن Spy استرپتوکوکوس پیوژنزدر سلول‌های مستعد Origami به عنوان کاندید واکسن
محورهای موضوعی : میکروب شناسی مولکولیمبینا پورتوکل 1 , ساسان ساکی 2 , بهروز شجاعی سعدی 3 , رضوان ناعمی 4
1 - کارشناس ارشد، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه دانشگاه آزاد اسلامی اراک، اراک ، ایران.
2 - استادیار، گروه علوم آزمایشگاهی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی اراک، اراک، ایران.
3 - استادیار، گروه علوم آزمایشگاهی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی اراک، اراک، ایران.
4 - کارشناس ارشد، گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه تربیت دبیر شهید رجایی تهران، تهران، ایران.
کلید واژه:
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: استرپتوکوکوس پیوژنز (گروه A، GAS) عامل طیف وسیعی از عفونت‌ها می باشد. همچنین، تب حاد روماتیسمی و گلومرولونفریت حاد نیز به دنبال عفونت های گروه A استرپتوکوک ها بروز می کنند. مطالعات متعددی نشان داده اند که بیان ژن Spy مربوط به استرپتوکوکوس پیوژنز در بروز ایمونوژنیسیته و عفونت های وخیم افزایش دارد. هدف از مطالعه حاضر کلونینگ و بیان ژن Spy در سلول مستعد Origami به منظور تهیه واکسنی برای این عفونت در آینده بوده است.
مواد و روش ها: در این مطالعه توصیفی-مقطعی، تعداد 100 سواب حلق از بیماران مراجعه کننده به درمانگاه های شهر تهران در شرایط استریل جمع آوری به آزمایشگاه منتقل شد. جداسازی سویه ها با روش های میکروبیولوژی انجام شد. پس از استخراج DNA و انجام آزمون PCR به منظور ردیابی ژن Spy، کلونینگ در وکتور اشریشیا کلی اوریگامی و پلاسمید pET-26b انجام شد. کلونال سلکشن و PCR کلونی، آزمون Real-Time PCR به منظور بررسی صحت کلونینگ انجام گردید.
یافته ها: از مجموع 12 سویه استرپتوکوکوس پیوژنز، 11 جدایه حامل ژنSpy بودند. برش آنزیمی پلاسمید pET-26 b و کلونینگ در وکتور بیانی اشریشیا کلی اوریگامی موفقیت آمیز بود. همچنین Ct سلول کلون شده در مقایسه با کنترل داخلی فاقد کلون، نشان دهنده بیان موفقیت آمیز بیان مناسب ژن Spy می باشد.
نتیجه گیری: نتایج این مطالعه بیان مناسب ژن Spy در روش کلونینگ در وکتور اشریشیا کلی اوریگامی و پلاسمید pET-26b بود و تایید این نتایج با روش Real-Time PCR را نشان می دهد.
Introduction: Streptococcus pyogenes (Group A , GAS ) is responsible for a wide range of infections. Additionally, acute rheumatic fever and acute glomerulonephritis can occur following the Group A infections. Numerous studies have shown that the Spy gene is associated with increased immunogenicity and severe infections. The aim of this study was to clone and express the Spy gene of Streptococcus pyogenes in Origami susceptible cells to develop a potential vaccine for this infection in the future.
Methods: In this descriptive cross-sectional study, 100 throat swabs were collected from patients visiting clinics in Tehran under sterile conditions. After transfer to the laboratory, strains isolation was performed using microbiological methods. Following DNA extraction and PCR testing to detect Spy gene, cloning was carried out in Escherichia coli Origami, the pET-26b plasmid. Colony selection, colony PCR, and Real-Time PCR were performed to confirm the accuracy of cloning.
Results: Out of 12 Streptococcus pyogenes strains, 11 isolates carried the Spy gene. Enzymatic digestion of the pET-26b plasmid and cloning into the Escherichia coli Origami expression vector were successful. Additionally, the Ct value of the cloned cells compared to the internal control without cloning indicated successful expression of the gene.
Conclusion: The results of this study indicate appropriate expression of the Spy gene using the cloning method in the Escherichia coli Origami vector and pET-26b plasmid, confirmed by Real-Time PCR.