بهینه‌سازی تثبیت آنزیم پکتیناز بر سیلیکا آئروژل و‌کاربرد ‌آن در استخراج ترکیبات فنلی‌تفاله انگور

محورهای موضوعی : ریز پوشانی - نانو تکنولوژی

اسماعیل فرامرزی آق گنبد ¹ , لیلا امیرخانی ² , سید مهدی هدایت زاده ³ , فهیمه درخشانفرد ⁴

1 - دانشجوی دکتری،گروه مهندسی شیمی‌، واحد ‌اهر، دانشگاه آزاد اسلامی، اهر، ایران.
2 - استادیار،گروه مهندسی شیمی، واحد اهر، ‌دانشگاه آزاد اسلامی‌، اهر، ایران.
3 - استادیار،گروه مهندسی شیمی، واحد ایلخچی، ‌دانشگاه آزاد اسلامی‌، ایلخچی، ایران.
4 - استادیار،گروه مهندسی شیمی، واحد اهر، ‌دانشگاه آزاد اسلامی‌، اهر، ایران.

تاریخ دریافت : 1400/10/12 تاریخ پذیرش : 1400/12/20 تاریخ انتشار : 1403/04/16

کلید واژه: ترکیبات فنلی, تفاله انگور, تثبیت آنزیم, پکتیناز, سیلیکا آئروژل,

چکیده مقاله :

یکی از کاربردهای تجاری آنزیم پکتیناز، پکتین زدایی و شفاف سازی آب میوه ها و استخراج ترکیبات فنلی از میوه ها است. تثبیت پکتیناز یکی از روشهای پایدارسازی آن است که امکان جداسازی آنزیم از واکنش و استفاده مجدد از آن را فراهم ساخته و در نتیجه هزینه استفادة آنزیم در صنعت را کاهش می دهد. در این تحقیق آنزیم پکتیناز حاصل از آسپرژیلوس نایجر بر روی سیلیکا آئروژل آبدوست به روش جذب سطحی تثبیت گردید. جذب سطحی شامل برهمکنش های هیدروژنی، آبگریز و وان‌دروالس بین حامل جامد و مولکول‌های جذب شونده هستند و به دلیل سادگی، باقی ماندن فعالیت کاتالیستی بالا و قابلیت استفادة مجدد حامل ها بعد از غیر فعال شدن آنزیم‌های تثبیت شده، پتانسیل اقتصادی بالاتری را در مقایسه با سایر روش های تثبیت دارد. پایه‌های سیلیکا آئروژل حاوی پکتیاز توسط آزمون های طیف سنجی زیر قرمز تبدیل فوریه و میکروسکوپ الکترونی روبشی تعیین خواص شدند. پارامترهای تاثیرگذار در تثبیت آنزیم (زمان تثبیت، نسبت آنزیم به پایه و pH) با استفاده از روش سطح پاسخ مطالعه و کاربرد آنزیم تثبیت شده در استخراج ترکیبات فنلی از تفاله انگور بررسی گردید. نتایج بدست آمده از آزمونهای تعیین خواص و اندازه‌گیری بازده تثبیت، نشان از تثبیت موثر آنزیم بر پایه سیلیکا آئروژل داشت. شرایط بهینه برای تثبیت، در pH معادل 5، نسبت آنزیم به پایه معادل 0/1 و زمان 89/2 دقیقه بدست آمد. بازده تثبیت در این شرایط 1/78 درصد بود. نتایج آزمایشگاهی و مدل‌سازی تفاوت معناداری با هم نداشتند که نشان از کفایت مدل بدست آمده داشت. میزان استخراج ترکیبات فنلی توسط آنزیم پکتیناز تثبیت شده بر پایه سیلیکا آئروژل از تفاله انگور، %78/7 و درصد گیرندگی رادیکال آزاد %55/7، نسبت به حالتی که تیمار آنزیمی انجام نگرفت، افزایش یافت.

منابع و مأخذ:

1. Alagöz, D., Tükel S.S. and Yildirim, D., 2016. Immobilization of pectinase on silica-based supports: Impacts of particle size and spacer arm on the activity. International Journal of Biological Macromolecules, 87, pp. 426–432.


2. Amirkhani, L., Moghaddas, J. and Jafarizadeh-Malmiri, H., 2019. Optimization of biodiesel production using immobilized Candida rugosa lipase on magnetic Fe₃O₄-silica aerogel, Iranian Journal of Chemistry and Chemical Engineering, 38(2),‌ pp.193-201.


3. Amirkhani, L., Moghaddas, J. and Jafarizadeh-Malmiri, H., 2016. Candida rugosa lipase immobilization on

 

 magnetic silica aerogel nanodispersion. RSC Advances, 6, pp.12676-12687.

4. Bangi, U.K.H., Rao, A.V. and Rao, A.P., 2008. A new route for preparation of sodium-silicate-based hydrophobic silica aerogels via ambient-pressure drying. Science and technology of advanced materials, 9, p. 035006.


5. Brena, B., González-Pombo, and Batista-Viera, F., 2013. Immobilization of Enzymes: A Literature Survey. Immobilization of Enzymes and Cells, 1051, pp.15-31.


6. Buisson, P., Hernandez, C., Pierre M. and Pierre A.C., 2001. Encapsulation of lipases in aerogels. Journal of Non-Crystalline Solids,‌285(1-3), pp.‌295-302.


7. Buisson, P. and Pierre A.C., 2006. Immobilization in quartz fiber felt reinforced silica aerogel improves the activity of Candida rugosa lipase in organic solvents. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 39(1-4), pp. 77-82.


8. Chamorro, S., Viveros, A., Alvarez, I., Vega, E. and Brenes, A., 2012. Changes in polyphenol and polysaccharide content of grape seed extract and grape pomace after enzymatic treatment. Food Chemistry, 133, pp. 308–314.


9. Dal Magro, L., de Moura, K.S., Backes, B.E., de Menezes, E.W., Benvenutti, E.V.‌and Nicolodi, S. et al., 2019. Immobilization of pectinase on chitosan-magnetic particles: Influence of particle preparation protocol on enzyme properties for fruit juice clarification. Biotechnology Reports, 24, e00373.


10. Delcheva, G., Pishtiyski, I., Dobrev, G. and Krusteva S., 2007. Immobilization of Aspergillus niger Pectinase on Polyacrylonitrile Copolymer Membrane. Trends in Applied Sciences Research, 2, pp. 419-425.


11. Dorcheh, A.S. and Abbasi M.H., 2008. Silica aerogel: synthesis, properties and characterization. Journal of materials processing technology, 199, pp. 10-26.


12. El Rassy, H., Maury, S., Buisson, P. and Pierre, A.C., 2004. Hydrophobic silica aerogel-lipase biocatalysts: Possible interactions between the enzyme and the gel. Journal of Non-Crystalline Solids, 350(0), pp. 23-30.


13. Fernández, K., Vega, M. and Aspé, E., 2015. An enzymatic extraction of proanthocyanidins from País grape seeds and skins. Food Chemistry, 168, pp.‌7–13.


14. Garg, G., Singh, A., Kaur, A., Singh, R., Kaur, J‌. and Mahajan, R., 2016. Microbial pectinases: an ecofriendly tool of nature for industries. 3 Biotech, 6, p.47.


15. Gesser, H.D. and Goswami P.C. 1989. Aerogels and Related Porous Materials. Chemical Review, 89, pp. 765-788.


16. Ghandahari Yazdi, A.P., Barzegar, M. Sahari M.A. and Ahmadi Gavlighi, , 2018. Optimization of the enzyme-assisted aqueous extraction of phenolic compounds from pistachio green hull. Food Science & Nutrition, 7, pp. 356-366.


17. Husing, N. and Schubert, U., 2005. Aerogels. Wiley.


18. Karout, A., Chopard, C. and Pierre, A.C., 2007. Immobilization of a lipoxygenase in silica gels for application in aqueous media. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 44(3-4), pp. 117-127.


19. Lee, C.-H., Lin, T.-S. and Mou, C.-Y., 2009. Mesoporous materials for encapsulating enzymes. Nano Today, 4, pp. 165-179.


20. Leventis, N. and Koebel, M. M., 2011. Aerogels Handbook. Springer.


21. Li, T., Wang, N. Li, S., Zhao, Q., Guo M. and Zhang, C., 2007. Optimization of covalent immobilization of pectinase on sodium alginate support. Biotechnology Letters, 29(9), pp. 1413-1416.


22. Maury, S., Buisson, P., Perrard, A. and Pierre, A.C., 2005. Compared esterification kinetics of the lipase from Burkholderia cepacia either free or encapsulated in a silica aerogel. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 32(5-6), pp. 193-203.

 

23. Mohammadi, M., Khakbaz Heshmati, M., Sarabandi, K., Fathi, M., Lim, L.-T. and Hamishehkar, H., 2019. Activated alginate-montmorillonite beads as an efficient carrier for pectinase immobilization. International Journal of Biological Macromolecules, 137, pp.253-260.


24. Orcaire, O., Buisson, P. and Pierre, A.C., 2006. Application of silica aerogel encapsulated lipases in the synthesis of biodiesel by transesterification reactions. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 42(3-4), pp. 106-113.


25. Ramirez, H. L., Briones, A.I., Úbeda, J. and Arevalo, M., 2013. Immobilization of pectinase by adsorption on an alginate-coated chitin support. Biotecnología Aplicada, 30, pp.101-104.


26. Tambuk, P., Tomaskovic, D., Tomaz, I., Maslov, L., Stupic, D. and Kontic, J.K., 2016. Application of pectinases for recovery of grape seeds phenolics. 3 Biotech, 6, p. 224.


27. Zahedi, M., Memar Maher, B., Anarjan, N. and Hamishehkar, H.,   Investigation the synergistic effects of licorice, garlic and fennel essential oils Microemulsions as natural antioxidant and antibacterial agents. Food Hygiene, 11, pp. 23-36.


28. Zdarta, J., Meyer, A.S., Jesionowski, T. and Pinelo, M., 2018. A general overview of support materials for enzyme immobilization: characteristics, properties, practical utility. Catalysts, 8(3), p. 92.