هدف از این پژوهش بررسی اثر ضد باکتریایی پپتید نوترکیب لاکتوفرامپین-لاکتوفریسین شتری بر روی رشد باکتری استافیلوکوکوس اورئوس مولد ورم پستان گاو شیری است. پپتید نوترکیب لاکتوفرامپین-لاکتوفریسین شتری که از مطالعات قبلی در آزمایشگاه بیوتکنولوژی گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد تهیه شده بود مورد استفاده قرار گرفت. اثر ضدباکتریایی این پپتید به روش شمارش کلونی بر روی باکتری‌های استافیلوکوکوس اورئوس (25923 ATCC) و استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌‌سیلین (1764PTCC ) انجام گرفت. همچنین بررسی اثر حرارت 100 درجه سانتی گراد و لئوفلایز کردن این پپتید بر فعالیت ضد باکتریایی آن به روش انتشار از دیسک انجام شد. نتایج نشان داد که پپتید نوترکیب تولیدی در برابر باکتری‌ استافیلوکوکوس اورئوس اثر ضد باکتریایی داشت )0001/0(p < ولی بر روی باکتری استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین بی‌تأثیر بود. همچنین بررسی اثر حرارت نشان داد که اعمال حرارت 100 درجه سانتی‌گراد تا مدت‌زمان 40 دقیقه تأثیر معنی‌داری بر میزان فعالیت این پپتید نداشت ولی در زمان های 70 و 100 دقیقه کاهش معنی داری در فعالیت ضد باکتریایی این پپتید مشاهده شد )0001/0(p پرونده مقاله

استفاده مکرر و بیش از حد ازآنتی‌بیوتیک‌ها در صنعت دامپزشکی موجب مقاومت باکتری‌های بیماریزا نسبت به انواع آنتی-بیوتیک‌های رایج گردیده است. با توجه به این مسئله، محققان به دنبال روش‌های جدیدی برای جایگزین کردن آنتی‌بیوتیک‌ها می‌باشند که می‌توان به پپتید‌های ضدمیکروبی (AMP) اشاره کرد. لذا؛ هدف از مطالعه حاضر بررسی بیوانفورماتیکی اثر افزودن his taq بر فعالیت ضدباکتریایی پپتید بتا‌دفنسین گیاهی و همسانه‌سازی ژن کدکننده آن در وکتور بیانیpAMJ1653 در باکتری لاکتوکوکوس‌لاکتیس است. ساختار سوم پپتید بتادفنسین همراه با his-taq از طریق I-TASSER پیش بینی شد و توسط نرم افزارهای SAVE 6 و prosA صحت سنجی گردید. در نهایت داکینگ مولکولی از طریق نرم افزار Cluspro بین بتا دفنسین با و بدون توالی his-taq با آنتی‌ژن LPTD باکتری اشرشیاکلای انجام شد. در بخش آزمایشگاهی، ژن بتادفنسین همراه با توالی his-taq و سیگنال ترشحی در وکتور تکثیری pGEM-DFF و میزبان تکثیری DH5α مورد استفاده قرار گرفت. پس از استخراج پلاسمید و هضم آنزیمی توسط آنزیم‌های Sap1 و Sal1ژن بتادفنسین گیاهی به داخل وکتور بیانیpAMJ1653 همسانه‌سازی گردید و با استفاده از روش الکتروپویشن به داخل باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس سویه 1543 انتقال یافت. کلونی‌های مثبت حاوی وکتور نوترکیب با روش کلونی PCR بررسی و در نهایت هضم آنزیمی صورت گرفت. در بخش بیوانفورماتیک، ساختار سوم ساختار با صحت قابل قبولی پیش بینی شد. نتایج داکینگ نشان داد پپتید بتادفنسین با و بدون his-taq به آنتی‌ژن LPTDدر موقعیت مناسب در تماس است. در بخش آزمایشگاهی نشان داده شد که ژن کد کننده بتا دفنسین گیاهی با موفقیت در وکتور بیانی pAMJ1653 همسانه‌سازی شد. پرونده مقاله