شناسایی باکتری‌های روده گونه موریانه Microcerotermes diversus Silvestri (Isoptera: Termitidae) و جداسازی باکتری‌های تجزیه کننده لیگنین
محورهای موضوعی : حشره شناسی و سایر بندپایان
بهزاد حبیب پور
1
(دانشیار/ دانشکده کشاورزی، گروه گیاهپزشکی)
زینب فتح اللهی
2
()
سهراب ایمانی
3
(مدیرگروه و استاد)
نادر حسن زاده
4
(گروه گیاهپزشکی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران،ایران.)
محمد عبدی گودرزی
5
(دانشیار موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی/بخش انگل شناسی)
کلید واژه: 16S rRNA, میکروفلور روده, gut microbiota, واژه‌های کلیدی:: Microcerotermes diversus, endosymbionts, تجزیه لیگنین, Key Words: Microcerotermes diversus, lignin degradation 16S rRNA,
چکیده مقاله :
لیگنین فراوان ترین پلیمر معطر (فنلی) و دومین ماده اولیه فراوان در محیط زیست است. لیگنین در طبیعت توسط باکتری ها و قارچ ها تخریب می شود. جهت ارزیابی نقش باکتری های همزیست موریانه ها در تخریب لیگنین، چهار کلنی از گونه موریانه Microcerotermes diversus Silvestri (Termitidae) که از طریق تله گذاری در مناطق اهواز، بندرعباس و دو جزیره خارک و کیش جمع آوری شدند. سوسپانسیون روده موریانه های هر منطقه در 5 میلی لیتر D.H2O تهیه شد. نمونه ها در محیط کشت مغذی آگار (NA) کشت داده شدند. پتری دیش های حاوی نمونه کشت داده شده در دمای 270C به مدت 24-72 ساعت درانکوباتور قرار گرفتند. کلنی باکتریایی متنوع با مورفولوژی های متفاوت انتخاب و خالص سازی شدند. برای تمایز باکتری های تجزیه کننده لیگنین، تمام 47 جدایه باکتریایی برروی محیط کشت حاوی آگار لیگنین مختلف استخراج شده حاوی MSM رشد داده شدند. در مجموع، 45 جدایه از نظر تجزیه لیگنین مثبت بودند. تعیین توالی 16S rDNA در ترکیب با روش های کشت کلاسیک برای شناسایی باکتری ها استفاده شد. شناسایی شامل جنس / گونه Stenotrophomonas maltophilia ، Elizabethkingia anopheles ، Ochrobactrum anthropic ، Serratia marcescens ، Lysinibacillus pakistanensis ، Actinetobacter pitti ، Pseudomonas spp. و Bacillus spp بودند. برای تعیین میزان فعالیت لیگنینولیتیک ، باکتری ها از خانواده های شناسایی شده در محیط لیگنین آگار پرورش داده شدند. هیدرولیز لیگنین با استفاده از متیلن بلو بر روی محیط کشت مورد بررسی قرار گرفت. حاله های ایجاد شده دراطراف کلنی باکتری ها اندازه گیری شدند.
Lignin is the most abundant aromatic (phenolic) polymer and the second most plentiful raw material in the terrestrial environment. It is degraded by bacteria and fungi in the natural world. To evaluate whether the role of symbiotic bacteria in lignin degradation among termites, four colonies of Microcerotermes diversus Silvestri (Termitidae) were collected from traps in Ahvaz, Bandar Abbas, and two islands of Khark and Kish. Sample suspensions were prepared from guts in 5 ml D.H2O. The samples were cultured on nutrient agar (NA) medium. The plates were incubated at a temperature of 270C for 24-72 h. Different types of bacteria with different colony morphologies were selected and purified. To differentiate lignin-degrading bacteria, all 47 bacterial isolates were grown on different extracted lignin agar containing MSM. In total, 45 isolates were positive for lignin degradation. Culture-independent 16S rDNA sequencing in combination with classical culturing methods were applied to identify the bacteria. These were assigned to genus/species Stenotrophomonas maltophilia, Elizabethkingia anopheles, Ochrobactrum anthropic, Serratia marcescens, Lysinibacillus pakistanensis, Actinetobacter pitti, Pseudomonas spp., and Bacillus spp. To specify the amount of ligninolytic activity, family selected bacteria were grown on lignin agar medium. Dye decolorization in culture plate assays with Methylene Blue was evaluated. Clear zones in agar around the isolates were measured.
_||_
