تشخیص سریع ویروس لارینگو تراکئیت عفونی (ILTV) با استفاده از روش Real-time PCR مبتنی بر ژن اختصاصی UL27
محورهای موضوعی : ویروس شناسیسمانه ظهیری یگانه 1 , محمد صادق هاشم زاده 2 , احسان ظفری 3 , مهدی تات 4 , محمد نجاراصل 5 , بنت الهدی زهرایی 6 , روح الله درستکار 7
1 - کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران،
2 - دانشجوی دکتری تخصصی، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم(عج)، تهران
3 - دانشجوی دکتری تخصصی، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم(عج)، تهران
4 - کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران
5 - دانشجوی دکتری تخصصی، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران
6 - کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم (عج)، تهران
7 - استادیار، مرکز تحقیقات ویروس شناسی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله الاعظم(عج)، تهران
کلید واژه: Real-time PCR, ویروس لارینگو تراکئیت عفونی (ILTV), ژن UL27,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: ویروس لارینگو تراکئیت عفونی (ILTV)، از مهمترین عوامل بیماری زا از نظر اقتصادی در صنعت طیور است. ماکیان تنها مخزن اصلی این ویروس به شمار می آیند. در حال حاضر برای تشخیص این ویروس روش سریع، حساس و دقیقی وجود ندارد. این مطالعه با هدف ارزیابی و معرفی یک روش دقیق مولکولی با استفاده از تکنیک Real-time PCR و مبتنی بر ژن اختصاصی UL27 ویروس ILT، به منظور تشخیص سریع این ویروس انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، پس از تهیه نمونه ویروسی، DNA مربوطه با استفاده از کیت استخراج اسیدهای نوکلئیک از ویروس استخراج گردید. سپس حضور ژن اختصاصی UL27 ویروس، ابتدا با روش PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و در نهایت با تکنیک Real-time PCR با استفاده از پرایمرها و پروب اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته ها: مشاهده قطعه مورد انتظار 96 جفت بازی در آنالیز ژل الکتروفورز، حضور ژن اختصاصی UL27 را در نمونه های ویروسی تأیید نمود. همچنین نتایج ارزیابی سنجش Real-time PCR نیز بر روی نمونه های یاد شده مثبت بود. نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که روش مولکولی Real-time PCR روش مناسبی برای تشخیص سریع و دقیق ویروس لارینگو تراکئیت عفونی، به واسطه ردیابی ژن اختصاصی UL27 می باشد.
Background & Objectives: Infectious Laryngo tracheitis virus (ILTV) is one of the major pathogens causing economic losses in poultry industry. Poultries are the only reservoir of the virus. By now there is no rapid, sensitive and accurate method for detection of this virus. This study was aimed to evaluate and introduce an accurate molecular method by using real-time PCR technique on UL27 proprietary gene of ILTV in order to fast diagnosis of the virus. Materials & Methods: In this experimental study, after preparation of viral sample, the DNA was extracted from virus by using viral nucleic acids extraction kit. Thereafter, the existence of UL27 proprietary gene of the virus was evaluated at first by traditional PCR technique using specific primers and afterwards by real-time PCR technique using specific probe and primers. Results: Observation of expected 96 bp fragment in electrophoresis gel analysis confirmed the presence of UL27 proprietary gene in this viral samples and the results of real-time PCR assay evaluation were also positive in this samples. Conclusion: This study showed that the molecular method of real-time PCR is a suitable method for rapid and accurate diagnosis of ILTV by detection of UL27 proprietary gene.
