اثرات آنتاگونیستی لاکتوباسیلهای جدا شده از واژن سگهای سالم در مقایسه با آنتی بیوتیکهای رایج برروی رشد برخی از پاتوژنهای مطرح در عفونتهای رحمی سگ در شرایط آزمایشگاهی
محورهای موضوعی : علوم بالینی دامپزشکیمهرداد جبارزاده 1 , اورنگ عطایی عمارلویی 2 , فرهاد موسی خانی 3
1 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج،ایران
2 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج،ایران
3 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج،ایران
کلید واژه: سگ, لاکتوباسیل, عفونت رحم,
چکیده مقاله :
امروزه عفونتهای رحمی یکی از عارضههای اصلی دستگاه تناسلی سگهای ماده است. بدین منظور استفاده از لاکتوباسیلها به عنوان پروبیوتیک و به منظورجایگزینی در رحم به عنوان یک عامل باز دارنده از عفونتهای رحمی به علت تولید متابولیتهایی همچون پراکسید هیدروژن و اسید لاکتیک امری مفید وسودمند است. ( )8بدین منظور جهت جداسازی لاکتوباسیلها از واژن سگهای سالم اقدام به اخذ نمونه با سواب دابل گارد تحت شرایط استریل از 20قلادهسگ ماده که ابتدا توسط رادیوگراف و تصاویر سونوگرافی و معاینات بالینی سلامت آنها تایید شده بود صورت گرفت. سوابها پس از اخذ نمونه بلافاصلهدر محیط MRS-brothقرار داده شده و پس از انتقال به آزمایشگاه ابتدا 48تا 72ساعت در شرایط بی هوازی در 37درجه سانتی گراد انکوبه شدند. سپس ازنمونههای رشد کرده بر روی MRS-agarاقدام به کشت گردید و به مدت 48تا 72ساعت دیگر در شرایط فوق انکوبه شدند.کلونیهای رشد نموده بر رویسطح با روشهای مشاهده مستقیم و آزمونهای بیو شیمیایی و در نهایت توسط PCRو sequencingتشخیص جنس لاکتو باسیل داده شد. پس از آن اقدام بهخالص سازی و تکثیر لاکتو باسیلها شد. سپس به منظور آزمون تاثیر لاکتوباسیلهای جدا شده بر روی پاتوژنهای مطرح در عفونتهای رحمی اقدام به جداسازیسگهای مبتلا به عفونت رحمی ارجاع داده شده به مطبهای دامپزشکی استان البرز جهت اخذ نمونههای ترشحات رحمی شد.در ادامه میزان ناحیه باز دارنده ایجاد شده حاصل از مجاورت جداگانه لاکتوباسیلها و دیسکهای آنتی بیوگرام با پاتوژنهای اصلی جدا شده که شاملStaphylococcus وPseudomonas aeruginosa وProteus mirabilis وE. coli وStaphylococcus intermedius وStaphylococcus epidermidisaureusو Trueperellaبودند با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج نشان دادند که لاکتو باسیلها بر روی بسیاری از باکتریهای پاتوژن تاثیر معنی داری را در ایجادمنطقه بازدارنده از رشد در شرایط آزمایشگاهی دارد %83/3که در مقایسه با حساسیت کلیه دیسکهای آنتی بیوگرام مورد بررسی که به میزان %34/16بودهاست اختلاف معنی داری را نشان میدهد.با توجه به نتایج به دست آمده در شرایط آزمایشگاهی ( )in vitroبه نظر میرسد که به کارگیری لاکتوباسیلها در واژن سگها به عنوان عامل پیش گیرانه ازعفونتهای رحمی و یا عاملی در جهت کاهش ابتلا به این نوع از عفونتها است و شاید جایگزین مناسبی جهت درمانهای آنتی بیوتیکی باشد البته میبایستدر شرایط بالینی نیز مورد بررسی قرار گیرد
Nowadays the uterine infections are considered as one of the principal disorders of bitch’s reproductive system. Forthis reason, the utilization of lactobacillus spp. as probiotic and aimed at substituting in the uterus as an inhibiting factoragainst the uterine infections due to the production of metabolites such as hydrogen peroxide and lactic acid be usefuland should be investigated (13). For this reason, in order to isolate the lactobacillus spp. from the vaginas of healthybitches beings, an attempt was made to obtain specimens using double guard swab under sterile conditions from twentyhealthy bitches which had been primarily confrmed through radiograph, ultrasonography and clinical examinations.Subsequent to the acquisition of specimens, the swabs were immediately placed in MRS-broth medium and aftertransferring to laboratory they were incubated frstly for 48 to 72 hours in anaerobic condition under 37ºc. Thereafter,from the specimens grown on MRS-agar, cultures were prepared and further incubated under above conditions formore 48 to72 hours. Utilizing direct observation, biochemical tests and ultimately PCR and sequencing the genus oflactobacillus spp. was discerned from the colonies grown on the surface. Following this step, the lactobacillus spp.were subjected to isolation and propagation. On the other hand, in a bid to test the effect of isolated lactobacillus onregular pathogens occurring in uterine infections, a certain number of afflicted bitches beings referred to medical clinicsexisting all over Alborz province were selected for obtaining specimens of uterine secretions. In continuation, the degreeof created inhibition zone resulting from separate proximity of lactobacilli and antibiogram discs with main isolatedpathogens including Staphylococcus intermedius, E. coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcusaureus and Trueperella were compared. The fndings demonstrated that the Lactobacilli had a signifcant effect ona multitude of pathogenic bacteria for the creation of inhibition zone from growth in laboratory conditions. Most ofisolated pathogens (83.3%) in the vicinity of 2.5µl of fresh culture medium of Lactobacillus showed susceptibility whichindicates a signifcant difference in comparison with susceptibility of all antibiogram discs under investigation (34.16%).In the light of acquired results in laboratory conditions (in vitro), it seems that the application of Lactobacillus spp. in bitchvagina as a preventive factor from uterine infections or as a factor for mitigating the disposition to such infections shouldalso be surveyed under clinical conditions which might possibly be a suitable replacement for antibiotic treatments.