کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری

محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی

مهدی دیانی نیا ¹ , مرتضی کریمی پور ² , وهاب باباپور ³ , لهراسب شاهقلیان ⁴ , عباس دوستی ⁵

1 - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران
2 - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران
3 - دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
4 - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران
5 - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران

تاریخ دریافت : 1388/07/04 تاریخ پذیرش : 1389/07/10 تاریخ انتشار : 1389/03/01

کلید واژه: هورمون رشد, گوسفند نژاد لری بختیاری, کلون سازی,

چکیده مقاله :

هورمون رشد باعث تحریک رشد و تکثیر سلول ها در انسان و حیوانات می شود. این هورمون یک پلی پپتید تک زنجیره ای با 191 اسید آمینه است که در سلول های سوماتوتروف واقع در بال جانبی غده هیپوفیز پیشین ساخته شده و ذخیره و ترشح می گردد. هدف از این تحقیق کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری برای اولین بار در ایران می باشد. به منظور کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری، RNA از غده هیپوفیز گوسفند تازه کشتار شده، استخراج و cDNA هورمون رشد ساخته شد. با استفاده از روش کلون سازی T/A، قطعه cDNA هورمون رشد کلون شد و سپس به باکتری E. coli به عنوان میزبان منتقل گردید. تأیید صحت کلون های به دست آمده با روش های PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی انجام گرفت. کلون سازی cDNA ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری با موفقیت انجام شد و توالی ژن کد کننده هورمون رشد گوسفند با طول690 جفت باز مشخص گردید. مقایسه توالی ژن هورمون رشد موجود در پلاسمید نوترکیب ساخته شده با رکوردهای ثبت شده در بانک ژن جهانی، نشان دهنده شباهت بسیار زیادی بین توالی هورمون رشد گوسفند بومی ایران با سایر نژادهای دنیا می باشد.

چکیده انگلیسی:

Growth hormone (GH) is a peptide hormone that stimulates growth and cell reproduction in humans and animals. It is a 191-amino acid, single chain polypeptide hormone which is synthesized, stored, and secreted by the somatotroph cells within the lateral wings of the anterior pituitary gland. The goal of this research was to clone and sequence sheep growth hormone of Lori Bakhtiary breed in Iran. For this purpose, RNA was extracted from the pituitary gland of freshly slaughtered sheep and cDNA of growth hormone produced. The T/A cloning technique was used to clone the cDNA of growth hormone and then the synthesized construct was transferred into E. coli as the host. Once the correct recombinants were further confirmed by colony PCR or restriction enzyme digestion, sequencing was done. The sequencing results showed that, the length of sheep growth hormone cDNA was 690 bp fragments. Comparison of sequence of growth hormone inside the synthesized construct with those recorded in Genebank (NCBI, Blast) indicated high degrees of similarity between Iranian native sheep and other sheep breeds of the world.

منابع و مأخذ:

1. بیگدلی، م.ر. 1381. مروری بر فیزیولوژی پزشکی گانونگ. چاپ اول، انتشارات تیمورزاده، صفحات: 251 و 295-286.
   
   
   1. Agellon, E., Sise, J.A., Penty, J.M. and Montgomery, G.W. 1993. The duplicated gene copy of ovine growth hormone gene contains a P. vull polymorphism in the second intron. Animal generics. 24:319-321.
   
   
   2. Brenner, C.A., Tam, A.W., Nelson, P.A., Engeman, E.G., Suzuki, N., Fry, K.E. et al. 1989. Novel method for studying mRNA phenotypes in single or small numbers of cells. Biotechniques. 7(10):1096-1103.
   
   
   3. Dellacha, J.M., Enero, M.A., Sentome, J.A. and Palodini, A.C. 1970. Isolation, characterization and C-Terminal sequence of ovine growth hormone. European Journal of Biochemistry. 12:289-295.
   
   
   4. Guron, C., Roa, K.B., Jain, S.K., Totey, S.M. and Talwar, G.P. 1992. Cloning and nucleotide sequencing of sheep growth hormone cDNA. Indian Journal of Experimental Biology. 30(8):659-63.
   
   
   5. Fleming, J.S., Suttee, J.M., Montgonery, G.W., Gwnn, J., Stuart, S.K., Little john, R.P. et al. 1997. The effects of duplication in the ovine growth hormone (GH) gene on GH expression in the pituitaries of ram lambs from lean and fat-selected sheep line. Domestic Animal Endocrinology. 14:17-24.
   
   

 

1. Lacroix, M.C., Devinoy, E., Servely, L., Pulssant, C. and Kann, T. 1996. Expression of the growth hormone gene in ovine placents: detection and cellular localization of the protein. Journal of Endocrinology. 137:4886-4892.


2. Orian, J.M., O’Mahoneg, J.V. and Brandon, M.R. 1988. Cloning and sequencing of ovine growth hormone gene. Nucleic Acids Reserch. 16:9046.


3. Sch-lee, P., Grami, R., Schallenberger, E. and Scham, S.D. 1994. Growth hormone and Insulin-like growth Factor I concentrations in bulls of various growth hormone genotypes. Theoretical and Applied Genetics. 88:497-500.


4. Tashjian, A.H., Bancroft, F.C. and Levince, L. 1970. Hormone production cell culture model. Journal of Cell Biology. 47:61-70.


5. Valinsky, A., Shani, M. and Gootwine, E. 1990. Restriction fragment length polymorphism in sheep at the growth hormone locus is the result of variation in gene number. Animal Biotechnology. 1:135-144.


6. Wallis, M. 1994. Variable evolutionary rates in the molecular evolution of mammalian growth hormone. Journal of Molecular Evolution. 38:619-627.


7. Warwick, J.M. and Wallis, M. 1984. Characterization of mRNA sequences encoding sheep somatotropin (growth hormone) by cloning of pituitary complementary DNA. Biochemical society Transactions. 12:247-250.


8. Warwick, J.M., Wallis, O.C. and Wallis, M. 1989. Cloning, sequence and expression in Escherichia coli of cDNA. Biochimica et Biophysica Acta. 1008:247-250.