مقایسه دو روش ICC-RT-PCR و کشت سلولی به منظور تشخیص انتروویروس‌ها در نمونه‌های فاضلاب
محورهای موضوعی : میکروب شناسی تشخیصی
محمد کارگر
1
,
سارا صادقی پور
2
,
حمیده طباطبایی
3
,
رخشنده ناطق
4
1 - گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم
2 - گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم
3 - گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران
4 - گروه ویروس شناسی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران
کلید واژه: انتروویروس‌ها, فاضلاب, ICC-RT-PCR, کشت سلولی,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: انتروویروس‌ها یکی از مهم‌ترین ویروس‌های روده‌ای هستند که طیف وسیعی از بیماری‌ها را در انسان ایجاد می کند. اخیرا با توجه به زمان‌بر بودن و همچنین نیاز به انجام تست‌های تاییدی، استفاده از روش‌های مولکولی جهت تشخیص انتروویروس‌ها مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این پژوهش ارزیابی روش‌های ICC-RT-PCR و کشت سلولی برای تشخیص انتروویروس‌های موجود در سیستم فاضلاب است. مواد و روش‌ها: در این پژوهش 63 نمونه فاضلاب با روش Grab sample تهیه و با روش‌های Pellet و Two-Phase تغلیظ و در رده‌های سلولی RD و HEp-2 کشت داده شد. در مرحله بعد، تمامی نمونه‌ها به کشت‌های سلولی حساس RD و HEp-2 تلقیح و پس از 24 ساعت گرمخانه گذاری در حرارت 36 درجه سانتی‌گراد، با استفاده از پرایمرهای Pan E.V، Pan P.V و پرایمرهای اختصاصی Sabin بر روی نمونه‌های کشت سلولی تست RT-PCR انجام شد. یافته‌ها: از مجموع نمونه‌های مورد بررسی، با استفاده از روش کشت سلولی از 33 نمونه انتروویروس (38/52 درصد) و توسط روش ICC-RT-PCR از 41 نمونه انتروویروس (07/65درصد) و از 6 نمونه ویروس پولیو (52/9 درصد) جداسازی گردید. نتیجه‌گیری: با آنالیز آماری مشخص شد که بین روش‌های کشت سلولی و ICC-RT-PCR ارتباط معنی داری در سطح 05/0 برای جداسازی انتروویروس‌ها وجود دارد. همچنین حساسیت روش ICC-RT-PCR برای تشخیص انتروویروس‌ها کمتر از 01/0، TCID50 ارزیابی شد که می‌تواند نشان دهنده قابل قبول بودن و حساسیت این روش برای تشخیص انتروویروس‌های موجود در فاضلاب باشد.
Background and objectives: Enteroviruses are one of the most important enteric viruses which produce a broad range of human diseases. But being time consuming and also the necessity to perform confirmed tests for Enteroviruses detection, using molecular direct methods have been recently considered. The aim of this research is evaluation of ICC-RT-PCR and cell culture methods for detection of enteroviruses in sewage system. Materials and methods: In this research 63 specimens were provided through Grab sample method which concentrated by pellet & Two-phase method and cultured in RD and HEp-2 cells respectively. All specimens, then, were inoculated using sensitive cell cultures of RD and HEp-2. After 24 hours incubation at 360C by means of Pan E.V primers and afterwards Pan P.V Primers along with specific sabin primers, test of RT-PCR was carried out on the cell culture specimens. Results: Out of all collected specimens, enteroviruses were isolated from 33 specimens (52.38%) and 41(65.01%) specimens which utilized cell-culture & ICC-RT-PCR methods respectively. Polioviruses were also isolated from 6 specimens. Conclusion: Statistical analysis indicated that there is a significant relationship (p= 0.05) between cell culture and ICC-RT-PCR methods for isolating enteroviruses. Further the sensitivity of ICC-RTPCR method to detect enteroviruses less than 0.01 TCID50 was evaluated, which can indicated the acceptability and sensitivity of this method for detection of enteroviruses in sewages.