ردیابی ویروس پسوروز مرکبات با استفاده از dsRNA و هیبریداسیون
محورهای موضوعی : ویروس شناسی
فایزه فلکی
1
(گروه گیاه پزشکی، دانشکده علوم کشاورزی و صنایع غذایی، واحد علوم و تحقیقات دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران)
فرشاد رخشنده رو
2
(گروه گیاه پزشکی، دانشکده علوم کشاورزی و صنایع غذایی، واحد علوم و تحقیقات دانشگاه آزاد اسلامی، کد پستی: ۱۴۵۱۵-۷۷۵)
وحید علوی
3
(بخش تحقیقات گیاه پزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی مازندران، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، ساری، ایران)
کلید واژه: ردیابی, ویروس پسوروز مرکبات (CPsV), هیبریداسیون, RNA دورشتهای, الگوی الکتروفورزی,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: ویروس پسوروز مرکبات عامل ایجاد یکی از مهمترین بیماری های ویروسی مرکبات در جهان است که در باغات مرکبات واقع در شرق مازندران شناسایی شده است. بهدلیل حضور هم زمان نژادهای مختلف ویروس در نمونه های آلوده، روش های شناسایی مولکولی مانند PCR اغلب از توان ردیابی این ویروس با دقت بالا برخوردار نیستند. در این تحقیق، روشی دقیق برای شناسایی ویروس پسوروز مرکبات معرفی شده است. مواد و روش ها: ردیابی و تشخیص نمونه های آلوده با استفاده از آزمون الایزا به روش ساندویچ غیر مستقیم سه طرفه پـادتن (TAS-ELISA) و آنتی بادی تک همسانه ای از نمونه های پرتقال تامسون و نارنگی انشو با علایم مشکوک به آلودگی به CPsV، در شهرستان های ساری، نکا و قائم شهر از استان مازندارن انجام پذیرفت. آلودگی در نمونه ها با استفاده از RT-PCR تایید و استخراج ds RNA (Double-strand RNA) ویروسCPsV با استفاده از ستون CF-11 انجام شد. برای هیبریداسیون مولکولی از پروب cDNA نشاندار شده با DIG استفاده شد. یافته ها: بررسی الگوی الکتروفورز حاصل از استخراج dsRNA از نمونه هایی که با الایزا و RT-PCR به CPsV آلوده تشخیص داده شده بودند بیانگر حضور ژنوم CPsV با وزن های مولکولی 2500 و 920 جفت باز در نمونه های آلوده بود. همچنین با استفاده از هیبریداسیون مولکولی و پروب طراحی شده، حضور CPsV در نمونه های آلوده مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده از آزمون هیبرید سازی مولکولی ارتباط مستقیم بین dsRNA استخراج شده از نمونه های آلوده و حضور ویروس پسوروز مرکبات را در نمونه های علایم دار مرکبات شهرستان ساری اثبات نمود.
Background & Objectives: Citrus psorosis virus is the causal agent of one of the most important viral citrus diseases in the world and has been detected from the citrus orchards in the east of Mazandaran province, IRAN. Because of the simultenious presence of various strains of this virus in infected citrus samples, molecular detection methods like PCR are not able to detect this virus with high accuaracy. In this research, we introduce a method for the precise detection of Citrus psorosis virus. Materials & Methods: Detection and Identification of infected samples performed by triple antibody sandwich indirect-ELISA (TAS-ELISA) method and monoclonal antibody from symptomatic Thomson orange and Unshiu tangerine samples with suspicious symptoms to CPsV infection in Sari, Neka and Ghaemshahr districts of Mazandaran. Infection in samples tested by ELISA and confirmed by RT-PCR. Extraction of CPsV-dsRNA (Double-strand RNA) from infected samples was done by CF-11 column. Molecular hybridization performed by DIG labeled cDNA probe. Results: Exploring the electrophoretic pattern of dsRNA extracted from the CPsV infected citrus samples by using ELISA and RT-PCR methods, indicating the presence of CPsV genomes with the molecular weights of 920 bp and 2500 bp in infected samples. The presence of CPsV in the samples was also confirmed by using molecular hybridization and designed probe. Conclusion: The major advantages of the hybridization method relating to the dsRNA electrophoretic mobility is the simultenious detection of the all citrus psorosis virus strains within the infected citrus samples. This way can separate virus isolates.
_||_