بررسی اثر ضدقارچی اسانس چهار گیاه دارویی، آنالیز و شناسایی ملکولی باکتری آنتاگونیست علیه قارچ عامل پوسیدگی بعد از برداشت پرتقال Penicillium digitatum

محورهای موضوعی : گیاهان دارویی

شروین هادیان ¹ , نادر حسن زاده ² , محمدعلی آقاجانی ³ , حمیدرضا پردلی ⁴ , گابریلا سیرولری ⁵

1 - دانشگاه علمی کاربردی خانه کارگر
2 - دانشگاه علوم تحقیقات تهران
3 - مرکز تحقیقات کشاورزی
4 - عضو هیات علمی دانشگاه آزاد اسلامی واحد گرگان
5 - دانشگاه کاتانیا ایتالیا

تاریخ دریافت : 1397/12/15 تاریخ پذیرش : 1398/09/11 تاریخ انتشار : 1398/09/01

کلید واژه: اسانس, Penicillium digitatum, کارواکرول, کپک سبز مرکبات, Bacillus cereuse, آوریشن, باکتری‌های آنتاگونیست,

چکیده مقاله :

کپک سبز مرکبات Penicillium digitatumازمهم‎ترین بیماری‌های بعد از برداشت می‌باشد. به کارگیری مداوم سموم شیمیایی تاثیر ماندگار روی سلامتی انسان و آلودگی محیط زیست دارد و سبب بروز مقاومت در سویه‌های بیماری‎زا می گردد. در این تحقیق فعالیت ضدقارچی غلظت‌های مختلف (100، 200، 300 و 400 پی‌پی‌ام) اسانس چهار گیاه دارویی آویشن شیرازی (Thymus vulgaris)، آلوورا (Aloe vera)، سیر (Allium sativum) و زیره سبز (Cuminum cyminum) جمع‌آوری شده از منطقه قرق استان گلستان مورد بررسی قرار گرفت. اسانس‌ها با استفاده از روش تقطیر؛ بخار آب و با استفاده از دستگاه کلونجر تهیه و سپس مهمترین مواد موثره اسانسی که بیشترین عملکرد آنتاگونیستی را داشتند توسط دستگاه GC/MS آنالیز گردید. همچنین فعالیت آنتاگونیستی باکتری‌های جداسازی شده از اپی‎فیت پرتقال شامل sp. Bacillus، Pseudomonassp.، Streptomycess sp. علیه قارچ پنی سیلیوم در قالب طرح فاکتوریل مورد بررسی قرار گرفت. بیشترین درصد ممانعت کنندگی (95/99 درصد)، توسط اسانس آویشن علیه پنی سیلیوم در غلظت 400 پی‎پی‎ام مشاهده گردید. آنالیز رگرسیونی تاثیر اسانس‌ها نشان داد با افزایش غلظت اسانس درصد بازدارندگی آن روی قارچ افزایش می‌یابد. بر اساس نتایج به دست آمده، اسانس آویشن با داشتن مهمترین ترکیبات موثره در اسانس‌ها (کارواکرول - 5/45 درصد)، آلفا- ترپینئول (-9/22 درصد) و اندو- بورنئول (3/14 درصد) بیشترین فعالیت ممانعت کنندگی (3/22 میلی‌متر) را علیه پنی سیلیوم از خود نشان داد. در بین 23 جدایه باکتریایی، یک جدایه به نام H7 بیشترین فعالیت ممانعت کنندگی را علیه قارچ داشت. با استفاده از PCR و تعیین توالی DNA ژنوم 16S rRNA، H7 به‌عنوان Bacillus cereus شناسایی گردید. بنابراین اسانس آویشن و جدایه (Bacillus cereus (H7 جایگزین‌های مناسبی برای کنترل شیمیایی پوسیدگی بعد از برداشت پرتقال می باشند.

چکیده انگلیسی:

Citrus green mold, Penicillium digitatum is one of the most important postharvest diseases. Continuous application of chemical pesticides has serious long term effects on human health and environmental pollution that may result in emergence of resistance in pathogenic strains. In this study, antifungal activity of different concentrations (100, 200, 300, 400ppm) of four medicine plants essences including Thymus vulgaris, Cuminum cyminum,Allium sativum and Aloe vera collected from Ghorogh area of Golestan provience was evaluated. Essences were prepared by the steam distillation water using Clevenger apparatus. The main constituents' essences having the most antagonistic activity were analyzed by GC / MS. Antagonistic activity of bacteria isolated from orange epithelium including Bacillus, Pseudomonas sp., and Streptomyces sp. against Penicillium digitatum was also investigated in a completely randomized factorial model. The maximum percent inhibition (99.95%) was observed by the thyme plant essence at 400 ppm concentration. Regression analysis of the effects of essences showed that by increasing the essences concentration, its inhibitory effect on fungi increased. Based on the results, thyme essence with having the important constituents of essences (carvacrol - 45.5%), (alpha-terpineol - 22.9%) and (endo - borneol 14.3%) had the highest inhibitory effect (22.3 mmol) against penicillium. Among 23 bacterial isolates, one of them, H7, had the highest inhibitory effect on penicillium. Using PCR amplification and DNA sequencing of 16S rRNA gene, it was identified as Bacillus cereus. Thus, thyme essence and Bacillus cereus (H7) are an appropriate substitutions to chemical control of orange postharvest diseases caused by Penicillium digitatum.

منابع و مأخذ:

References

1. Abraham, A., Laing, M. and Bower, J. 2010. Isolation and in vivo screening of yeast and Bacillus antagonists for the control of Penicillium digitatum of citrus fruit. Biological Control, 53: 32–38.


2. Alexa, E., Sumalan, R.M., Danciu, C., Obistioiu, D., Negrea, M., Poiana, M.A., Rus, C., Radulov, I., Pop G. and Dehelean C. 2018. Synergistic antifungal, allelopathic and antiproliferative potential of Salvia officinalis L. and Thymus vulgaris L. Essential oils. Molecules, 23(185):1-15.


3. Bakkali, F., Averbeck, S., Averbeck, D. and Idaomar, M. 2008. Biological effects of essential oils-A review. Foodand Chemical Toxicology, 46: 446-475.


4. Bandalan, M.B. and Lauzon, R.D. 2018. Inhibitory effect of Garlic L. against bread mold and its influence on the quality of Yeast-Leavened Bread. Food Engineering, 4(4): 256-262.


5. Boubaker, H., Saadi, B., Boudyach, E.H. and Benaoumar, A.A. 2009. Sensitivity of Penicillium digitatum and P. italicum to Imazalil and Thiabendazole in Morocco. Plant Pathology, 8(4): 152-158.


6. Bouchra C., Achouri M., Idrissi Hassani L.M. and Hmamouchi M. 2003. Chemical composition and antifungal activity of essential oils of seven Moroccan Labiatae against Botrytis cinerea Pers: Fr. Ethnopharmacology, 89: 165–169.


7. Brenner-Don, J., Krieg Noel, R. and Staley James, T. 2005. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Springer US., pp. 1136.


8. Charles, A., Onyeani, S.O., Osunlaja, O.O. and Oworu, A.O. 2012. Evaluation of effect of aqueous plant extract in the control of storage fungi, Sciences & Technology, 1(6): 72-82.


9. Cirvilleri, G., Bonaccorsi, A., Scuderi, G. and Scortichini, M. 2005. Potential biological control activity and genetic diversity of Pseudomonas syringae pv. syringae strains. Phytopathology, 153: 654-666.


10.  Gholchinno, S., Pouzeshimiyab, B. and Nematollahi, S. 2018. Antifungal effects of some herbal extracts on Penicillium mould of citrus in laboratory conditions. Agroecology, 14(2):1-7.


11. Ibtesam Badawy, F.M., Nashwa Sallam, M.A., Ibrahim, A.R. and Asran, M.R. 2011. Efficacy of some essential oils on controlling green mold of orange and their effects on postharvest quality parameters. Plant Pathology, 10: 168-174.


12. John, G.H., Noel, R.K., Peter, H., James, T.S. and Stanley, T.W. 1997. Bergey´s manual of determinative bacteriology, Moscow: Mir Publishers 2, 9th Ed., (In Russian).


13. Joo, M., Hur, S., Han, Y. and Kim, J. 2007. Isolation, identification and characterization of Bacillus subtilis strains from the traditional korean soybean-fermented food, Chungkookjang. Applied Biology & Biotechnology, 50 (4): 202-210


14. Karimi, Z., Rahemi, M., Karimi Z. and Rahemi M. 2008. Comparison of essential oils of clove, thyme and imazalil fungicide on blue mold (Penicillium italicum Wehemer) of citrus fruits in storage. Journal of Water and Soil Science, 12(45): 231-237


15. Kinay, P., Mansour, M.F., Mlikota, F., Margosan, D.A. and Smilanick, J.L. 2007. Cha racterization of fungicide-resistant isolates of Penicillium digitatum collected in California. Crop Protection,26: 647-656.


16. Kutawa, A.B., Danladi, M.D. and Haruna, A. 2018. Antifungal activity of garlic (Allium sativum) extract on some selected fungi. Medicinal Herbs and Ethnomedicine, 4:12-14.


17. Marpudi, S.L., Abirami, L.S.S., Pushkala, R. and Srividya, N. 2011. Enhancement of storage life and quality maintenance of papaya fruits using aloe vera based antimicrobial coating. Indian Journal of Biotechnology, 10: 83-89.


18. Nagorska, K., Bikowski, M. and Obuchowskji, M. 2007. Multicellular behaviour and production of a wide variety of toxic substances support usage of Bacillus subtilis as a powerful biocontrol agent. Acta Biochimica Polonica, 54: 495–508.


19. Obagwu, J. and Korsten, L. 2003. Integrated of citrus green and blue molds using Bacillus subtilis in combination with sodium bicarbonate or hot water. Postharvest Biology and Technology, 28: 187–194.


20. Pazira A. 2017. Antifungal Effect of Thymus Vulgaris Essence on the separated fungal from Koi Fish's Skin (Cyprinus Carpio Var. Koi), in vitro. Aquaculture development journal, 11 (2):13-22.


21. Sharma, R.R., Singh, D. and Singh, R. 2009. Biological control of postharvest diseases of fruits and vegetables by microbial antagonists: A review. Biological Control, 50: 205–221.


22. Swamy, M.K. and Sinniah, U.R. 2015. A comprehensive review on the phytochemical constituents and pharmacological activities of Pogostemon cablin Benth. An Aromatic Medicinal Plant of Industrial Importance. Molecules, 20(5): 8521-8547.


23. Timmer, L.W., Garnsey, S.M. and Graham, J.H. 2000. Compendium of postharvest diseases, American Phytopathological Society, St. Paul Minnesota, pp.92.


24. Udo, S.E., Madunagu, B.E. and Isemin, C.D. 2001. Inhibition of growth and sporulation of fungal pathogens on sweet potato and yam by garlic extract, Nigeria Journal of Botany, 14: 35-39.


25. Valero, D. and Serrano, M. 2010. Postharvest biology and technology for preserving fruit quality, CRC Press, Taylor & Francis Group, Boca Raton, FL, USA, pp. 288.


26. Varga, E., Bardocz, A., Belák, A., Maráz, A., Boros, B., Felinger, A., Böszörményi, A. and Horváth, G. 2015. Antimicrobial activity and chemical composition of thyme essential oils and the polyphenolic content of different thymus extracts. Farmacia, 63(3): 357-361.


27. Zamani, M., Tehrani, A.S., Ahmadzadeh, M., Hosseininaveh, V. and Mostofy, Y. 2009. Control of Penicillium digitatumon orange fruit combing Pantoea agglomerans with hot sodium bicarbonate dipping. Plant Pathology, 91: 437–442.