تشخیص گونه مایکوپلاسما گالی‌سپتیکوم به‌وسیله 16S rRNA PCR با پرایمرهای اختصاصی در نمونه‌های بالینی

الموضوعات :

سید علی پوربخش ¹ , افشین ذاکری ² , نریمان شیخی ³ , سعید چرخکار ⁴ , عباس اشتری ⁵

1 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، ایران، ایران
2 - دانشجوی دوره دکترای تخصصّی بیماریهای طیور، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، ایران، ایران
3 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
4 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده علوم تخصصّی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
5 - آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج، کرج، ایران

تاريخ الإرسال : 13 السبت , جمادى الثانية, 1430 تاريخ التأكيد : 18 الإثنين , محرم, 1431 تاريخ الإصدار : 02 الأحد , رمضان, 1430

الکلمات المفتاحية: PCR, نمونه‌های بالینی, مایکوپلاسما گالی‌سپتیکوم,

ملخص المقالة :

مایکوپلاسما گالی سپتیکوم به عنوان یکی از اصلی ترین پاتوژن های پرندگان، خسارات اقتصادی فراوانی را به صنعت مرغداری وارد می کند. هدف اصلی این مطالعه شناسایی گونه مایکوپلاسما گالی سپتیکوم در نمونه های بالینی با استفاده از روش 16S rRNA PCRمی باشد. برای بررسی تیتر سرمی، 18 فارم تخم گذار تجارتی و 8 فارم مادر گوشتی انتخاب و تست RSAT (Rapid Serum Agglutination Test) انجام گردید. جهت نمونه‌برداری برای PCR (Polymerase Chain Reaction)، از 17 فارمی که در تست RSAT مثبت شده بودند، 10 فارم انتخاب و 109 سوآپ استریل از شکاف کامی، نای، کیسه هوایی و ریه از هر فارم تهیه گردید. سه سوآپ از سه پرنده داخل یک لوله آزمایش حاوی یک میلی لیتر PBS انداخته شد و به آزمایشگاه منتقل گردید تا برای انجام PCR مورد استفاده قرار گیرد. در این مطالعه، پرایمرهای اختصاصی برای ژن 16S rRNA استفاده شد. پرایمرهای مورد استفاده برای ژن16S rRNA کاملاً اختصاصی مایکوپلاسما گالی سپتیکوم می باشد و با تمام مایکوپلاسما ها و دیگر باکتری های موجود در نای طیور قابل تفریق است. از 26 فارم مورد آزمایش، 17 فارم در تست سرمی RSAT مثبت شدند. محصولPCR تولیدی توسط پرایمرهای اختصاصی، در 10 فارم، 46 نمونه معادل 2/42 درصد در PCR ، باند 530 جفت بازی را برای همه سویه های فیلدی بر روی ژل الکتروفورز تشکیل داد.16S rRNA PCR با حساسیت بالا می تواند در تشخیص قطعی عفونت با مایکوپلاسما گالی سپتیکوم در آزمایشگاه به کار برده شود.

المصادر:

1. حسینی، ح. (1385): مطالعات مولکولی جدایه­های مایکوپلاسما گالی­سپتیکوم از طیور، رساله دکترای تخصصّی بیماری­های طیور، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، صفحات: 120-1.


2. Biomune. (2006):VECTORMUNE®FP-MG.http://www.biomune.company.com/chickens/vectormunefpmg.html.


3. Biro, J., Erdei, N., Szekely, I. and Stipkovits, L. (2006): Differentiation of mycoplasma gallisepticum strains using molecular methods. Acta Veterinaria Hungarica, 54: 437-448.


4. Bradbury, J.M. and Levisohn, S. Experimantal infections in poultry. In: Tully, J.G. (1996):  Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology. Volume II-Diagnostic Procedures, San Diego, CA: Academic Press. pp: 361-370.


5. Charlton, B.R., Bickford, A.A., Chin, R.P. and Walker, R.L. (1999): Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of Mycoplasma gallisepticum isolates from turkeys from the central valley of California. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 11:408-415.


6. Charlton, B.R., Bickford, A.A., Walker, R.L. and Yamamoto, R. (1999): Complementary randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis patterns and primer sets to differentiate Mycoplasma gallisepticum strains. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 11: 158-161.


7. Collett, S.R. (2005): Monitoring broiler breeder flocks for mycoplasma gallisepticum infection after vaccination with ts- 11. Department of production animal studies, faculty of veterinary science, University of Pretoria, pp: 1-79.


8. Dennis, Y.M., Chiu, W.K. and Allen Chan, K.C. (2006): Clinical applications of PCR. Humana Press, pp: 4- 22.


9. Fan, H.H., Kleven, S.H. and Jackwood, M.W. (1995): Application of polymerase chain reaction with arbitrary primers to strain identification of Mycoplasma gallisepticum. Avian Dis., 39: 729-735.


10. Feberwee, A., Mekkes, D.R., de Wit, J.J., Hartman, E.G. and Pijpers, A. (2005): Comparison of culture, PCR, and different serologic tests for detection of mycoplasma gallisepticum and mycoplasma synoviae infections. Avian Dis., 49: 260-268.


11. Garcia, M., Ikuta, N., Levisohn, S. and Kleven, S.H. (2005): Evaluation and comparison of various PCR methods for detection of Mycoplasma gallisepticum infection in chickens. Avian Dis., 49: 125-32.


12. Gharaibeh, S. and Al Roussan, D. (2008): The use of molecular techniques in isolation and characterization of mycoplasma gallisepticum from commercial chicken in Jordan. Int. J. Poult. Sci., 7(1): 28-35.


13. Kempf, I., Blanchard, A. Gesbert, F. Guittet, M. and Bennejean, G. (1993): The polymerase chain reaction for Mycoplasma gallisepticum infection. Avian Pathol., 22: 739-750.


14. Khan, M.I. (2002): Multiplex PCR of Avian Pathogenic Mycoplasmas, in PCR Detection of Microbial Pathogens, by Joachim, Frey, Konard, Sachse Humana Press, pp: 223.


15. Kleven, S.H. (2008): Control of avian mycoplama infections in commercial poultry. Avian Dis., 52: 367-374.


16. Kleven, S.H. Mycoplasmosis. In: Saif, Y.M., Barnes, H.J., Gilsson, J.R., Fadly, A.M., Mc Dongald, L.R. and swayne, D.E. (2008): Diseases of Poultry. 12^th ed., Iowa state university press, USA, pp: 805-808.


17. OIE terrestrial manual. (2008): Avian mycoplasmosis, chapter 2.3.5. pp: 482-496.