بررسی خصوصیات فنوتیپی و ژنوتیپی سویه های Pseudomonas syringae pv. syringae ، جداشده ازدرختان میوه هسته دار، با استفاده از روش RFLP در استان کهگیلویه و بویر احمد

الموضوعات : دو فصلنامه تحقیقات بیماریهای گیاهی

گیلدا نجفی پور ¹

1 - گروه گیاهپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم

تاريخ الإرسال : 17 الثلاثاء , شعبان, 1445 تاريخ التأكيد : 06 الأربعاء , ذو الحجة, 1445 تاريخ الإصدار : 13 الثلاثاء , ذو القعدة, 1445

الکلمات المفتاحية: RFLP, Pseudomonas syringae pv. syringae, PCR, درختان میوه هسته دار, SyrB,

ملخص المقالة :

شانکر باکتریایی درختان میوه هسته دار ناشی از Pseudomonas syringae pv. syringae (Pss)، در کلیه مناطق کشت درختان هسته دار وجود دارد و یکی از مهم ترین بیماری های درختان میوه هسته دار در ایران است. این بیماری باعث ایجاد زوال در درختان جوان و کاهش محصول در درختان مسن می شود (Agrios, 2005). طی بازدیدهای انجام شده از مناطق مختلف استان کهگیلویه و بویراحمد، نمونه های آلوده به شانکر باکتریایی درختان میوه هسته دار جمع آوری شد. همه سویه ها به منظور بررسی خصوصیات فنوتیپی، ژنوتیپی، فیزیولوژیکی، بیماریزایی، تغذیه ای و وجود ژن SyrB مورد بررسی قرار گرفتند. علاوه بر این سویه های مورد نظر از لحاظ ژنوتیپی با روش RFLP نیز مورد ارزیابی قرار گرفتند. ویژگی های ریخت شناسی و زیست شناسی بررسی شده نشان داد که تمام سویه ها میله ای شکل،گرم منفی، متحرک، هوازی اجباری، کاتالاز مثبت و از نظر واکنش فوق حساسیت روی توتون نیز مثبت هستند. کل سویه ها روی محیط کشت Kings΄B تولید رنگ سبز فسفری نمودند. در آزمون های گروه LOPAT نتیجه ی واکنش های اکسیداز، لهیدگی سیب زمینی و آرژنین دهیدرولاز برای کلیه سویه ها منفی، اما نتیجه آزمون های لوان و فوق حساسیت مثبت ارزیابی شد. برای آنالیز عددی خصوصیات فنوتیپی از نرم افزار Ntsys-pc استفاده شد. نتابج نشان داد که سویه های مورد بررسی در سطح بالاتر از 90% با هم تشابه دارند. تمام سویه ها در آزمون اثبات بیماریزایی، روی گیاهان هسته دار، در مدتی کمتر از دو هفته علایم بیماری را نشان دادند. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی B1 و B2، یک قطعه DNA به اندازه تقریبی 752 جفت بازی تولید شد، که این نتایج تشخیص پاتوار Pss را قطعی نمود. به منظور ارزیابی اثرانگشت ژنتیکی سویه ها از آزمون RFLP و آنزیم های kpnI ،EcorI ،HaeIII ،AluI و HindIII استفاده شد که در این میان، تنها HaeIII قادر به ایجاد برش در ژن SyrB بود. اثر انگشت ژنتیکی حاصل از این برش در کلیه سویه ها یکسان ارزیابی شد. نتایج حاصل از آزمون های فنوتیپی، بیماریزایی و RFLP نشان دادکه احتمالا سویه های Pss هسته داران در استان کهگیلویه و بویراحمد از یکنواختی زیادی برخوردارند.