کلون کردن و بیان ژن H ویروس PPR در سیستم بیانی باکولو ویروس
الموضوعات :
مهدی طاهری اصل
1
,
مجید مقبلی
2
,
محمد کارگر
3
,
محسن لطفی
4
,
فرشید کفیل زاده
5
1 - گروه میکروبیولوژی واحد جهرم ، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم ایران
2 - گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشکده علوم پایه، دامغان، ایران
3 - گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران
4 - موسسه تحقیقات وسرم سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش وترویج کشاورزی، کرج، ایران.
5 - گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران
الکلمات المفتاحية: طاعون نشخوار کنندگان کوچک, سلول Sf9, نوترکیب,
ملخص المقالة :
سابقه و هدف: بیماری طاعون نشخوار کنندگان کوچک یکی از مهم ترین عوامل بیماری زا از نظر اقتصادی در گوسفند و بز است که بوسیله موربیلی ویروس ها ایجاد می شود. پروتین H یکی از پروتین های اصلی ایجاد ایمنی بر علیه PPRV است. هدف از پژوهش حاضر کلون و بیان ژن H این ویروس بوسیله سیستم بیانی باکولو ویروس می باشد.مواد و روش ها: ژن H با روش RT-PCR و آغازگر های اختصاصی، تکثیر و در پلاسمید pFastBac Dual کلون شد. سپس بکمید نوترکیب واجد ژن فوق در سلول میزبان DH10Bac تولید شد. با ترانسفکت کردن سلول Sf9 با بکمید نوترکیب، میزان بیان و خصوصیات آن با روش های SDS-PAGE، western blotting و بردفورد بررسی گردید.یافته ها: ژن H با استفاده از پرایمر های اختصاصی از روی ژنوم ویروس PPR به درستی تکثیر و باند اختصاصی بدست آمد و بعد از انتقال بر روی وکتور pFastBac Dual و سپس بر روی ژنوم باکولو ویروس، صحت کار با استفاده از PCR و هضم آنزیمی اثبات شد. با ترانسفکت کردن بکمید نوترکیب در سلول های Sf9 و انجام پاساژهای متوالی، با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات نشان داده شد که پروتین نوترکیب حاصل، کاملا خالص و اختصاصی می باشد. میزان بیان این ژن µg/ml 218 بدست آمد.نتیجه گیری: با توجه به تولید میزان مناسبی از پروتین نوترکیب H، این پروتین می تواند گزینه مناسبی برای تولید واکسن نوترکیب بر علیه PPRV باشد.
_||_
Marashi M, Masoudi S, Moghadam MK, Modirrousta H, Marashi M, Parvizifar M, Dargi M, Saljooghian M, Homan F, Hoffmann B, Schulz C. Peste des petits ruminants virus in vulnerable wild small ruminants, Iran, 2014–2016. Emerging infectious diseases. 2017 Apr;23(4):704.
Woma TY, Adombi CM, Yu D, Qasim AM, Sabi AA, Maurice NA, Olaiya OD, Loitsch A, Bailey D, Shamaki D, Dundon WG. Co‐circulation of peste‐des‐petits‐ruminants virus Asian lineage IV with lineage II in Nigeria. Transboundary and emerging diseases. 2016 Jun;63(3):235-42.
Tounkara K, Kwiatek O, Niang M, Abou Kounta Sidibe C, Sery A, Dakouo M, Salami H, Lo MM, Ba A, Diop M, Mamy E. Genetic evidence for transboundary circulation of peste des petits ruminants across West Africa. Frontiers in veterinary science. 2019 Aug 21;6:275.
FAOSTAT Food and Agriculture Data of the Food and Agriculture Organization of the United Nations. (https://www.fao. org/faostat/en/#data/QA) Accessed June 2020
Kumar N, Barua S, Riyesh T, Tripathi BN. Advances in peste des petits ruminants vaccines. Veterinary microbiology. 2017 Jul 1;206:91-101.
Baazizi R, Mahapatra M, Clarke BD, Ait-Oudhia K, Khelef D, Parida S. Peste des petits ruminants (PPR): A neglected tropical disease in Maghreb region of North Africa and its threat to Europe. PloS one. 2017 Apr 20;12(4):e0175461.
Cotmore SF, Agbandje-McKenna M, Canuti M, Chiorini JA, Eis-Hubinger AM, Hughes J, Mietzsch M, Modha S, Ogliastro M, Pénzes JJ, Pintel DJ. ICTV virus taxonomy profile: Parvoviridae. The Journal of general virology. 2019 Mar;100(3):367.
Fakri F, Bamouh Z, Ghzal F, Baha W, Tadlaoui K, Fihri OF, Chen W, Bu Z, Elharrak M. Comparative evaluation of three capripoxvirus-vectored peste des petits ruminants vaccines. Virology. 2018 Jan 15;514:211-5.
Niyokwishimira A, de D Baziki J, Dundon WG, Nwankpa N, Njoroge C, Boussini H, Wamwayi H, Jaw B, Cattoli G, Nkundwanayo C, Ntakirutimana D. Detection and molecular characterization of Peste des Petits Ruminants virus from outbreaks in Burundi, December 2017–January 2018. Transboundary and emerging diseases. 2019 Sep;66(5):2067-73.
Zhou XY, Wang Y, Zhu J, Miao QH, Zhu LQ, Zhan SH, Wang GJ, Liu GQ. First report of peste des petits ruminants virus lineage II in Hydropotes inermis, China. Transboundary and emerging diseases. 2018 Feb;65(1):e205-9.
Schägger H. Tricine–sds-page. Nature protocols. 2006 Jun;1(1):16.
Zhou XY, Wang Y, Zhu J, Miao QH, Zhu LQ, Zhan SH, Wang GJ, Liu GQ. First report of peste des petits ruminants virus lineage II in Hydropotes inermis, China. Transboundary and emerging diseases. 2018 Feb;65(1):e205-9.
Patel JM, Patel DR, Mavadiya SV, Solanki JB, Vihol PD, Sharma KK, Trangadia BJ, Kalyani IH. Clinicopathological investigation of an outbreak of peste des petits ruminants in small ruminants in South Gujarat, India. Indian Journal of Veterinary Pathology. 2015;39(1):20-3.
Truong T, Boshra H, Embury-Hyatt C, Nfon C, Gerdts V, Tikoo S, Babiuk LA, Kara P, Chetty T, Mather A, Wallace DB. Peste des petits ruminants virus tissue tropism and pathogenesis in sheep and goats following experimental infection. PloS one. 2014 Jan 30;9(1):e87145.
Zhou XY, Wang Y, Zhu J, Miao QH, Zhu LQ, Zhan SH, Wang GJ, Liu GQ. First report of peste des petits ruminants virus lineage II in Hydropotes inermis, China. Transboundary and emerging diseases. 2018 Feb;65(1):e205-9.
Herbert, R., et al. (2014). "Recombinant adenovirus expressing the haemagglutinin of peste des petits ruminants virus (PPRV) protects goats against challenge with pathogenic virus; a DIVA vaccine for PPR." Veterinary research 45(1): 24.
Fakri F, Ghzal F, Daouam S, Elarkam A, Douieb L, Zouheir Y, Tadlaoui K, Fassi-Fihri O. Development and field application of a new combined vaccine against Peste des Petits Ruminants and Sheep Pox. Trials in vaccinology. 2015 Jan 1;4:33-7.
Liu F, Wu X, Zhao Y, Li L, Wang Z. Budding of peste des petits ruminants virus-like particles from insect cell membrane based on intracellular co-expression of peste des petits ruminants virus M, H and N proteins by recombinant baculoviruses. Journal of virological methods. 2014 Oct 1;207:78-85.
Apsana R, Balamurugan V, Veeregowda BM, Abraham S, Raju DS, Rathnamma D, Byregowda SM, Rahman H, Shaila MS. Expression and characterization of immunodominant region of fusion protein of Peste des petits ruminants virus in E. coli. Small Ruminant Research. 2016 Nov 1;144:75-82.
