کلونینگ و بیان ژن NP ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ H9N2 در اشریشیاکلی

محورهای موضوعی : باکتری شناسی

امین جایدری ¹ , مسعود رضا صیفی آبادی شاپوری ² , مسعود قربانپور نجف آبادی ³

1 - بخش میکروبیولوژی، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه لرستان، خرم آباد
2 - بخش میکروبیولوژی، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران، اهواز،
3 - بخش میکروبیولوژی، گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران، اهواز،

تاریخ دریافت : 1395/03/29 تاریخ پذیرش : 1396/11/11 تاریخ انتشار : 1397/06/01

کلید واژه:

چکیده مقاله :

آنفلوانزای پرندگان یک بیماری عفونی خطرناک و با اهمیت جهانی است که خسارات مالی قابل توجهی به صنعت طیور تحمیل می کند. تشخیص سرمی بر اساس بررسی آنتی بادی تولید شده بر ضد نوکلئوپروتئین (NP) که در میان همه ویروس های A آنفلوانزا حفاظت شده است، می تواند برای نشان دادن سطح ایمنی ضد همه تحت تیپ های ویروس A آنفلوانزا استفاده گردد. هدف از این مطالعه تولید پروتئین نوترکیب NP بود. بدین منظور ناحیه کدکننده ژن نوکلئوپروتئین جدایه ای از ویروس آنفلوانزای پرندگان A/chicken/Iran/AH-1/06(H9N2) با آزمایش RT-PCR تکثیر وبه درون وکتور بیانی- پروکاریوتی (pMal-C2x) کلون شده و به داخل باکتری اشریشیا کلی سویه BL21(DE3) ترانسفورمه گردید. وکتور نوترکیب تخلیص شده جهت بررسی بیان پروتئین نوترکیب MBP-NP مورد استفاده قرار گرفت. پروتئین هدف با وزن حدود 97 کیلو دالتون از طریق SDS-PAGE و متعاقب آن وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. مشاهده بیان پروتئین با وزن ملکولی قابل انتظار در SDS-PAGE و واکنش مثبت این پروتئین با سرم پرنده آلوده به آنفلوانزا در وسترن بلات نشان دهنده بیان موفق ژن NP در E. coli بود.

منابع و مأخذ:

1- Fouchier, R. A., Schneeberger, P. M., Rozendaal, F. W., Broekman, J. M., and Osterhaun A. D. (2004). Avian influenza A virus (H7N7) associated with human conjunctivitis and a fatal case of acute respiratory distress syndrome. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 101: 1356-1361.

2- Guo, Y. (2002). Influenza activity in China: 1998- 1999. Vaccine, 20: S28-S35.

3- Jin, M., Wang, G., Zhang, R., Zhao, S., Li, H., Tan, Y., Chen, H. (2004). Development of enzyme-linked immunosorbent assay with nucleoprotein as antigen for detection of antibodies to avian influenza virus. Avian Diseases, 48: 870-878.

4- Palese, P. and Shaw, M. Orthomyxoviridae. In: Knipe, D. and Howley, P. (2007). Fields Virology. 5^th ed. Lippin cott Williams Wilkins, pp: 1868-1689.

5- Protela, A., and Digard, P. (2002). The influenza virus nucleoprotein: a multifunctional RNA-binding protein pivotal to virus replication. Journal of General Virology, 83: 723–734.

6- Shu, L. L., Bean, W. J., Webstet, R. G. (1993). Analysis of the evolution and variation of the human influenza A virus nucleoprotein gene from 1933 to 1990. Journal of Virology, 67: 2723-9.

7- Starick, E., Werner, O., Schirrmeier, H., Kollner, B., Riebe, R., Mundt, E. (2006). Establishment of a competitive ELISA (cELISA) system for the detection of influenza A virus nucleoprotein antibodies and its application for field sera from differentr species. Journal of Veterinary Medicine B, 53: 370-375.

8- Watcharatanyatip, K., Boonmoh, S., Chaickhoun, k., Songserm, T., Woratanti, M., Dharakul, T. (2010). Multispecies detection of antibodies to influenza A viruses by a double-antigen sandwich ELISA. Journal of virological Methods, 163: 238-243.

9- Wu, R., Hu, S., Xiao, Y., Li, Z., Shi, D., Bi, D. (2007). Development of indirect enzyme-linked immunosorbent assay with nucleoprotein as antigen for detection and quantification of antibodies against avian influenza virus. Veterinary Research Communications, 31: 631-641.

10-  Ye, Q., Krug, R. M., Tao, Y. J. (2006). The mechanism by which influenza A virus nucleoprotein forms oligomers and binds RNA. Nature, 444: 1078-1082.