بررسی مقایسه‌ای تاثیر دوستاکسل بر داربست سلولی تخمک موش سوری پس از انجماد شیشه‌ای با دو ماده انجمادی متفاوت
محورهای موضوعی : مجله پلاسما و نشانگرهای زیستیحامد دانش پژوه 1 , نسیم حیاتی رودباری 2 , مهدی دیانت پور 3 , زهرا خدابنده جهرمی 4 , یاسر تهمتنی 5
1 - گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
2 - گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران
3 - دانشیار، مرکز تحقیقات فناوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران و دانشیار، گروه ژنتیک، دانشکده پزشکی، دانشگاه
4 - استادیار، مرکز تحقیقات فناوری سلول های بنیادی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران
5 - گروه سلول های بنیادی و زیست شناسی تکوینی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، موسسه زیست شناسی و فناوری سلول های بنیادی رویان، ACECR، تهران
کلید واژه: دوستاکسل, کرایوتاپ, محلول انجمادی, انجماد شیشه‌ای, تخمک,
چکیده مقاله :
زمینه و هدف: پژوهش حاضر به منظور بررسی مقایسه‌ای تاثیر ماده دوستاکسل بر روی لقاح آزمایشگاهی، درصد زنده‌مانی و داربست سلولی تخمک‌ها پس از انجماد شیشه‌ای با دو ماده انجمادی متفاوت می‌باشد.روش کار: برای رسیدن به این منظور موش‌های ماده نژاد NMRI با سن 8 تا 10 هفته با تزریق هورمون‌های PMSG و HCG برای تخمک‌گذاری تحریک شدند. توده سلولی کومولوس اطراف تخمک با استفاده از آنزیم هیالورونیداز 1/0% برداشته و سپس تخمک‌ها به 8 گروه آزمایشی شامل گروه‌های کنترل، دوستاکسل، دوستاکسل+ محلول انجمادی1، دوستاکسل+ محلول انجمادی2، دوستاکسل+ انجماد شیشه‌ای 1، دوستاکسل+ انجماد شیشه‌ای2، انجماد شیشه‌ای 1 و انجماد شیشه‌ای 2 تقسیم گردیدند. تخمک‌های بالغ در محلول‌های انجمادی اتیلن گلیکول و دی‌متیل‌سولفوکساید با غلظت 15 درصد و ساکارز 5/0 مولار در گروه انجمادی 1 و محلول‌های انجمادی اتیلن‌گلیکول 5/7 %، گلیسرول 5/7 % و سوکروز 5/0 مولار در گروه انجمادی دوم منجمد شدند. پس از ذوب شدن، درصد زنده مانی و لقاح آن ها تا مرحله دو سلولی بررسی گردید. رنگ‌آمیزی میکروتوبول‌ها در تخمک‌ها با آنتی‌بادی آلفاتوبولین انجام گردید. یافته ها: نتایج نشان می‌دهد تفاوت‌های معنی‌داری بین درصد زنده مانی و درصد لقاح گروه‌های انجمادی در مقایسه با گروه کنترل وجود دارد(P<0.05). درصد زنده مانی و درصد لقاح در گروه انجمادی اول نسبت به گروه انجمادی دوم کاهش یافت اما این دو گروه از نظر آماری تفاوت معنی‌داری بایک دیگر نداشتند. هم چنین درصد زنده مانی و درصد لقاح گروه‌های پیش انکوبه شده با دوستاکسل بیشتر از گروه‌های انکوبه نشده بودنتیجه گیری: با توجه نتایج حاصل دوستاکسل با کاهش آسیب‌های وارده به اسکلت سلولی تخمک می‌تواند در بهبود تکنیک‌های تولید مثلی موثر باشد.
Inroduction & Objective: The aim of the present study was to investigate the effect of docetaxel on the survival rate and in vitro fertilization of oocytes after vitrification by two cryopreservation solution.Materials and Methods: For this NMRI mice (8-10 weeks old) were superovulated by injecting PMSG and HCG. Oocytes are surrounded by cumulus and corona cells and must be denuded by 0.1% hyaluronidase enzyme. The oocytes were then divided into 8 experimental groups including control, docetaxel, docetaxel + vitrification 1 solution; docetaxel + vitrification1; vitrification1; docetaxel + vitrification 2 solution; docetaxel + vitrification2; vitrification2. Mature oocytes were vitrified in ethylene glycol and dimethyl sulfoxide solutions at 15% concentration and 0.5 M sucrose in cryopreservation solution1 and ethylene glycol and glycerol at 7.5 concentration and 0.5 M sucrose in cryopreservation solution2. After thawing, their survival and fertilization rates were assessed up to the two-cell stage. Staining of the microtubules in the oocytes was performed with alpha-tubulin antibody.Results: The results showed a significant difference in survive and fertilization rates compared to the control group (P<0.05). The rate of survival and formation of 2-cell embryos in the first cryopreservation group decreased compared to the second cryopreservation group but the two groups were not statistically significant. The results showed that survival and fertilization rates in pre-incubated groups with docetaxel were higher than non-incubated groups.Conclusion: Docetaxel could improve reproductive techniques by reducing the damage to the oocyte cytoskeleton.
1.Abedpour, N., Rajaei, F. (2015). Vitrification by cryotop and the maturation, fertilization, and developmental rates of mouse oocytes. Iranian Red Crescent Medical Journal, 17(10); e18172.
2.Almasi- turk, S., Roozbehi, A. (2013). Mouse oocytes and embryos cryotop-vitrification using low concentration solutions: Effect of meiotic spindle, genetic material array and developmental ability. Iranian Journal of Basic Medial Science, 16; 599-609.
3.Amidi, F., Khodabandeh, Z/, Mogahi, MHN. (2018). Comparison of the effects of vitrification on gene expression of mature mouse oocytes using cryotop and open pulled straw. International Journal of Fertility & Sterility, 12(1); 61.
4.Bissery, M-C. (1995). Preclinical pharmacology of docetaxel. European Journal of Cancer 31; S1-S6.
5.Boiso, I., Martí, M., Santaló, J., Ponsá, M., Barri, P.N., Veiga, A. (2002). A confocal microscopy analysis of the spindle and chromosome configurations of human oocytes cryopreserved at the germinal vesicle and metaphase II stage. Human Reproduction, 17(7); 1885-1891.
6.Bouquet, M., Selva, J., Auroux, M. (1992). The incidence of chromosomal abnormalities in frozen thawed mouse oocytes after in-vitro fertilization. Human Reproduction, 7(1); 76-80.
7.Chasombat, J., Nagai, T., Parnpai, R., Vongpralub, T. (2015). Pretreatment of in vitro matured bovine oocytes with docetaxel before vitrification: effects on cytoskeleton integrity and developmental ability after warming. Cryobiology, 71(2); 216-223.
8.Ciotti, P. M., Porcu, E., Notarangelo, L., Magrini, O., Bazzocchi, A., Venturoli, S. (2009). Meiotic spindle recovery is faster in vitrification of human oocytes compared to slow freezing. Fertility and Sterility, 91(6); 2399-2407.
9.Cetin, Y., Bastan, A. (2006). Cryopre servation of immature bovine oocytes by vitrification in straws. Anim Reprod Sci, 92 (1); 29-36.
10.Dehghani, N., Dianatpour, M., Hosseini, S. E., Khodabandeh, Z., Daneshpazhouh, H. (2019). Over expression of mitochondrial genes (mitochondrial transcription factor a and cytochrome c oxidase subunit 1) in mouse metaphase ii oocytes following vitrification via cryotop. Iran J Med Sci, 44(5); 406-414.
11.Devillard, L., Vandroux, D., Tissier, C., Dumont, L., Borgeot, J., Rochette, L. (2008). Involvement of microtubules in the tolerance of cardiomyocytes to cold ischemia-reperfusion. Molecular and Cellular Biochemistry, 307(1-2); 149-157.
12.Fuchinoue, K.,Fukunaga, N., Chiba, S., Nakajo, Y., Yagi, A., Kyono, K. (2004). Freezing of human immature oocytes using cryoloops with taxol in the vitrificationsolution. J. Assist.Reprod.Genet, 21; 307-309.
13.Ghetler, Y., Skutelsky, E., Ben Nun, I., Ben Dor, L. (2006). Huma oocyte cryopreservation and the fate of cortical granoles. Fertil and Steril, 86;210-216.
14.Giaretta, E., Spinaci, M., Bucci, D., Tamanini, C., Galeati, G. (2013). Effect of resveratrol on vitrified porcine oocytes. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 1-7.
15.Gook, DA., Edgar, DH. (2007). Human oocyte cryopreservation. Hum Reprod Update, 13(6); 591–605.
16.Gualtieri, R., Iaccarino, M., Mollo, V., Prisco, M. (2009). Slow cooling of human oocytes: ultrastructural injuries and apoptotic status. Fertil Steril, 91(4); 1023-34.
17.Gueritte-Voegelein, F., Guenard, D., Lavelle, F., Le Goff, M.T., Mangatal, L., Potier, P. (1991). Relationships between the structure of taxol analogs and their antimitotic activity. Journal of Medicinal Chemistry, 34(3); 992-998.
18.Huang, J., Li, Q., Zhao, R., Li, W., Han, Z. (2007). Effect of sugars on maturation rate of vitrified-thawed immature porcine oocytes. Anim Reprod Sci, Mar 30.
19.Huang, J. Y., Chen, H, Y., Park, J. Y. S., Tan, S. L., Chian, R-C. (2008). Comparison of spindle and chromosome configuration in in vitro-and in vivo-matured mouse oocytes after vitrification. Fertility and Sterility, 90(4); 1424-1432.
20.Jahromi, Z, K., Amidi, F., Mugehe, S., Sobhani, A., Mehrannia, K., Abbasi, M., et al. (2010). Expression of heat shock protein (HSP A1A) and MnSOD genes following vitrification of mouse MII oocytes with cryotop method. Yakhteh Med J, 12(1); 113-119.
21.Jain, J., Paulson, RJ. (2006). Oocyte cryopreservation. Fertil Steril, 86(3);1038-1046.
22.Jimenez-Trigos, E., Naturil-Alfonso, C., Marco-Jimenez, F. (2013). Post warming competence of in vivo matured rabit oocytes treated with cytoskeletal stabilization (taxol) and cytoskeletal relaxant(cytochalasin B) befor vitrification. Reprod. Domest.Anim,45;15-19.
23.Kuwayama, M. (2007). Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: the Cryotop method. Theriogenology, 67(1); 73-80.
24.Khodabandeh, JZ., Amidi, F., Nouri, MS., Sobhani, A., Mehranian, KM., Abbasi, M. (2010). Expression of heat shock protein(HSP A1A) and MnSOD genes following vitrification of mouse MII oocytes with cryotop method Cell Journal, 12(1); 1-119.
25.Lassalle, B., Testart, J., Renard, JP. (1985). Human embry features that influence the success of cryopre servation with the use of 1, 2 propanediol. Fertil Steril., 44(5); 645-651.
26.Morató, R., Izquierdo, D., Albarracín, J. L., Anguita, B., Palomo, M.J. (2008). Effects of pre‐treating in vitro‐matured bovine oocytes with the cytoskeleton stabilizing agent taxol prior to vitrification. Molecular Reproduction and Development: Incorporating Gamete Research, 75(1); 191-201.
27.Nottola, SA., Coticchio, G., Sciajno, R., Gambardella, A. (2009). Ultrastructural markers of quality in human mature oocytes vitrified using cryoleaf and cryoloop. Reprod BioMed Online, 19;17-27.
28.Park, SE., Chung, H.M., Cha, K.Y., Hwang, W.S. (2001). Cryopreservation of ICR mouse oocytes: improved post-thawed preimplantation development after vitrification using Taxol, a cytoskeleton stabilizer, fertil. Steril, 75; 1177-1184.
29.Rao, GD., Tan, SL. (2005). In vitro maturation of oocytes. Semin Reprod Med, 23(3); 242-247.
30.Ringel, I., Horwitz, S. B. (1991). Studies with RP 56976 (taxotere): a semisynthetic analogue of taxol. JNCI: Journal of the National Cancer Institute, 83(4); 288-291.
31.Roozbehi, A. (2013). Mouse oocytes and embryos cryotop-vitrification using low concentrated solutions: Effects on meiotic spindle, genetic material array and developmental ability. Iranian Journal of Basic Medical Sciences, 16(4); 590.
32.Rienzi, L., Martinez, F., Ubaldi, F., Minasi, MG., Iacobelli, M., Tesarik, J. (2004). Polscope analysis of meiotic spindle changes in living metaphase II human oocytes during the freezing and thawing procedures. Hum Reprod, 19; 655–9.
33.Schmidt, D., Nedambale, T., Kim, C., Maier, D., Yang, X., Tian, X. (2004). Effect of cytoskeleton stabilizing agents on bovine matured oocytes following vitrification. Fertility and Sterility, 82; S26.
34.Shaw, JM., Oranratnachai, A., Trounson, AO. (2000). Cryopreservation of oocytes and embryos, Handbook of in Vitro Fertilization ;chapter sixteen.
35.Shi, W-Q., Zhu, S-E., Zhang, D., Wang, W-H., Tang, G-L., Hou, Y-P. (2006). Improved development by Taxol pretreatment after vitrification of in vitro matured porcine oocytes. Reproduction, 131(4); 795-804.
36.Sparreboom, A., Nooijen, W., Beijnen, J. (1998). Preclinical pharmacokinetics of paclitaxel and docetaxel. Anti-Cancer Drugs, 9(1); 1-17.
37.Vajta, GC., Nagy, ZP. (2006). Are programmable freezers still needed in the embryo laboratory? Review on vitrification. Reprod Biomed Online, 12(6); 779-796.
38.Zhou, C-J., Wang, D-H., Niu, X-X., Kong, X-W., Li, Y-J., Ren, J. (2016). High survival of mouse oocytes using an optimized vitrification protocol. Scientific Reports, 6; 19465..
_||_