بررسی میزان آلودگی به بروسلوزیس در نمونه خون های افراد سرولوژی مثبت بروسلا در شهرستان های شهرکرد و اصفهان به روش Real Time PCR
محورهای موضوعی : میکروبیولوژیحسین خدابنده شهرکی 1 , نازیلا ارباب سلیمانی 2
1 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
2 - گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دامغان، ایران
کلید واژه: بروسلا آبورتوس, بروسلا ملی تنسیس, سرولوژی, Real Time PCR,
چکیده مقاله :
چکیده بیماري بروسلوز جزء شایع ترین بیماري هاي باکتریایی مشترك انسان و دام است که در انسان ایجاد تب مالت نموده و خسارات اقتصادي بالایی را در حیوانات اهلی به بار می آورد. در این تحقیق با استفاده از روش Real Time PCR به بررسی فراوانی گونه های بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس در سرم افراد سرولوژی مثبت پرداختیم. نمونه های سرمی 30 نفر از افرادی که تست رایت آن ها مثبت شده بود (بالای 160/1)، از آزمایشگاهای تشخیص طبی شهرستان های شهرکرد و اصفهان جمع آوری و DNA ِنمونه ها با استفاده از کیت استخراج DNA سیناژن استخراج شد. به منظور تشخیص جنس و گونه های بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس واکنش Real Time PCR بر روی نمونه ها انجام شد. در این بررسی تمام 30 نمونه مورد بررسی با روش Real time PCR تأیید شدند. در جنس مونث پس از انجام آزمون Real Time PCR فقط باکتری بروسلا آبورتوس تشخیص داده شد در حالی که در جنس مذکر 22 مورد (33/73درصد) بروسلا آبورتوس و 3 مورد (10درصد) بروسلا ملی تنسیس شناسایی گردید. از 7 مورد آلودگی به بروسلوز در گروه سنی زیر 30 سال، 6 مورد (7/85درصد) بروسلا آبورتوس و 1 مورد (3/14درصد) بروسلا ملی تنسیس تشخیص داده شدند. در صورتی که از 23 مورد آلودگی به بروسلوز در گروه سنی بالای 30 سال، 21 مورد (3/91درصد) بروسلا آبورتوس و 2 مورد (7/8درصد) بروسلا ملی تنسیس تشخیص داده شدند. در سال هاي اخير روش هاي مولكولي زيادي براي تشخيص اين باكتري مورد استفاده قرار گرفته اند. روش Real Time PCR از اين نظر كه نيازمند صرف زمان كم و داراي حساسيت و اختصاصيت بالايي مي باشد، در تشخيص اين بيماري بسيار مفيد مي باشد.
Brucellosis is one of the most common bacterial diseases in both humans and animals.It causes human to suffer from Malta fever and has highly economic losses in livestock. Bacteriological culture and serological tests for the diagnosis of chronic cases are insensitive. Therefore, the use of Real Time PCR is a great help to evaluate the frequency of types of brucella abortus and brucella melitensis in serum of people with positive serology. Serum samples of 30 cases with right positive test (over 1/160) were collected from DNA clinical laboratories in the cities of Shahrekord and Esfahan and they were extracted with the use of signagen DNA extraction kit. In order to identify the genus and the types of brucella abortus and brucella melitensis Real Time PCR reaction was carried out on the samples. In this study, all 30 samples were confirmed with the use of Real Time PCR. Brucella abortus was detected in all samples in the cities of Esfahan and Shahrekord. After Real Time PCR test was run on females, brucella abortus was just detected, While in males, 22 (%73/33) cases suffered from brucella abortus and 3 (%10) suffered from brucella melitensis. From the total of 7 cases with brucellosis infection in the age group below 30 years old, 6 (%85/7) cases suffered from brucella abortus and 1 (%14/3) suffered from brucella melitensis, While from the 23 cases with brucellosis in the age group over 30 years old, 21 (% 91/3) had brucella abortus and 2 (%8/7) had brucella melitensis. In recent years many molecular methods have been used for the detection of this bacteria. Real Time PCR method in the sense that it requires less time and has high sensitivity and specificity is very useful in the diagnosis of the disease
1. Franco MP, Mulder M, Gilman RH, Smits HL. (2007). Human brucellosis. Lancet infect dis. 7(12): 775-786.
2. جاوتز ا، ملنیک ج، آدلبرگ ا. (1378)، هموفیلوس، بوردتلا، بروسلا، میکروبیولوژی جاوتز، نوروزی ج، چاپ اول، مؤسسه فرهنگی انتشاراتی حیان، تهران، 300-303.
3. Ko J, Splitter GA. (2003). Molecular host-pathogen interaction in brucellosis: current understanding and future approaches to vaccine development for mice and humans.Clin Microbiol Rev. 16(1): 65-78.
4. Pakzad I, Rezaee A, Emaneini M, Hosseini AZ, Tabbaraee B, Taherikalani M. (2009). Expression of Human Serum Albumin - L 7/L 12 (Brucella abortus Ribosomal Protein) Fusion Protein in Saccharomyces cerevisiae. Pol J Microbiol. 58(2): 99-104.
5. Probert WS, Schrader KN, Khuong NY, Bystrom SL, Grave MH. (2003).
Real-Time Multiplex PCR Assay for Detection of Brucella spp, B. abortus, and B. melitensiss. J Cn Microbiol. 42(3): 1290-1293.
6. ناصري ز، یوسف علیخانی م، هاشمی ح، عربستانی م. (1393). تعیین گونه هاي بروسلا ایزوله شده از نمونه هاي خون بیماران مشکوك به بروسلوزیس با روش .PCR مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك. 17(5): 52-59.
7. جعفرپور م، کترا ابراهیمی ن، ناظمی ع، آسمار م، خاتمی نژاد م. (1389). مقایسه آزمایش های سرولوژیک (رزبنگال، رایت لوله های و کومبس رایت) و مولکولی (PCR) در تشخیص بروسلوز گوسفند و بز. پاتوبیولوژی مقایسه ای، علمی پژوهشی. 7(4):337-342.
8. Sohrabi M, Mohabati Mobarez A, Behmanesh M, Khoramabadi N,
Hosseini Dous R. (2011). Evaluation of a new set of Real-Time PCR for Brucella detection within human and animal samples. J Pharma Health Sci. 1(2): 14-17.
9. دوستی ع، کارگر م، قربانی دالینی ص، سرشار م. (1391). مبانی Real Time PCR و تکنیک FRET در تشخیص بیماری های عفونی. دنیای میکروب ها. 4 (14): 41-45.
10. Hinic V, Brodard I, Thomann A, Cvetnic Z, Makaya PV, Frey J, Abril C. (2008). Novel identification and differentiation of Brucella melitensis, B. abortus, B. suis,
B. ovis, B. canis, and B. neotomae suitable for both conventional and Real-time PCR systems. J Microbiol Methods. 75(2): 375–378.
11. زینلی م، شیرزادی م ر. (1387). عوامل مؤثر در افزایش و کاهش بروز بروسلوز (تب مالت) در انسان در کشور از سال 65 لغایت 85، پانزدهمین کنگره دامپزشکی ایران، تهران، جامعه دامپزشکان ایران. سال1387، 200-201
12. Ghasemi B, Mohammadian B, Majidpour M. (2004). Epidemiology of human and animal brucellosis in Kurdistan province in 1997-2001. Kurdistan Uni Med Sci. 8 (30)): 23-32.
13. زهرايي صالحي ت، آقايي پور خ ، عالميان س، اكبري الف ، اسماعيل زاد م، نيري فسايي ب، صفويه ص ، اعتمادي الف. (1392). پنجمین کنگره ی بروسلوزیز بین المللی ایرانیان. سال1392، 31-29.
14. محمد زاده ر، یوسف زاده ر. (1390). تشخیص بروسلا ملی تنسیس به روش Real Time PCR. اولین کنگره بین المللی باکتریولوژی. دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی تبریز. سال1390، 2459.
15. دل بیشه م، ناظمی ع، جعفر پور م. (1391). راه اندازی روش حساس و اختصاصیReal-Time PCR به منظور تشخیص گونه های بروسلا. مجله تحقیقات آزمایشگاهی دامپزشکی. 4 (1): 110.
16. Newby DT, Hadfield TL, Roberto FF. (2003). Real-Time PCR Detection of Brucella abortus: a Comparative Study of SYBR Green I, Exonuclease, and Hybridization Probe Assays. Appl Environ Microbiol. 69(8): 4753-4759.
17. Jolie CS, Mark SK, Michael RS, Adrian MW. (2007). Multiplex assay based on single-nucleotide polymorphisms for rapid identification of brucella isolates at the species level. Appl Environ Microbiol. 73(22): 7331–7337.
18. مالک نژاد پ، پیری دوگاهه ه، امیر زرگر ع، جعفری س، فتح اله زاده ب. (1387). تشخیص بروسلوز با استفاده از محیط کشت خون BACTEC و تائید آن با PCR. مجله تحقیقات دامپزشکی. 62(4): 83-86.
19. Hinić V, Brodard I, Thomann A, Holub M, Miserez R, Abril C. (2009). IS711-based real-time PCR assay as a tool for detection of Brucella spp. in wild boars and comparison with bacterial isolation and serology. Bio Med Central. 5(22): 1-8.
20. Bertu WJ, Dapar M, Gusi AM, Ngulukun SS, Leo S, Jwander LD. (2010). Prevalence of brucella antibodies in marketed milk in Jos and environs. Afr J Food Sci. 4(2): 62-64