آنالیز مولکولی ویروس هپاتیت دلتا
محورهای موضوعی : ژنتیک مولکولی میکروارگانیسم هاالهه تاج بخش 1 * , فاطمه خداوردی پور 2
1 - گروه زیست شناسی دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
2 - گروه زیست شناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران.
کلید واژه: ژنوتیپ II ویروس, قرابت فیلوژنتیک, ویروس هپاتیت دلتا,
چکیده مقاله :
ویروس هپاتیت دلتا، ويروس RNA دار ناقصي است که براي عملكرد آن حضور ویروس هپاتیت B ضروري است. این ویروس می تواند منجر به بیماری کبدی حاد و مزمن شود. سویههای HDV به 7 ژنوتیپ و 8 شاخه طبقه بندی شدهاند. میزان شیوع عفونت HDV در اهداکنندگان خون ایران از 4/2 تا 10 درصد متفاوت است. هدف از این مطالعه مقایسه فیلوژنتیک ویروس هپاتیت دلتای جدا شده از بیماران HBsAg مثبت شهرستان شهرکرد با سایر نقاط دنیا میباشد. در این مطالعه 350 نمونه سرمی از افراد مبتلا به هپاتیت B، از سازمان انتقال خون شهرستان شهرکرد تهیه شد. در این تحقیق RNA ویروس هپاتیت دلتا با استفاده از کیتRNX Plus ساخت شرکت سیناژن، ایران استخراج گردید. پس از ساخت cDNA با استفاده از کیت RT PreMix ساخت شرکت بایونر[1]، آلمان نمونه های مثبت با استفاده از کیت تخلیص PCR ساخت شرکت راچ[2] آلمان تخلیص شدند و جهت تعیین توالی قطعه 421 جفت بازی به شرکت ماکروژن[3] کره ارسال گردیدند. سپس 2 نمونه مثبت مورد نظر با استفاده از نرم افزارکلستال ایکس[4] با توالی های ثبت شده این ژن در بانک ژنی NCBI مقایسه و بعد از تعیین میزان مشابهت، درخت فیلوژنی حاصله به کمک نرم افزار ان جی پلات[5] ترسیم گردید. توالی HDVAg ایزوله های ایرانی در این مطالعه با 15 توالی از ایزوله های HDV از کشورهای مختلف مقایسه شد. نمونه های مورد مطالعه دارای 7/99-1/99 درصد قرابت با توالی‌های این ویروس از کشورهای جنوب شرقی آسیا ( چین و تایوان ) بودند. بر پایه مطالعات قبلی می‌توان این ویروس‌ها را در شاخهی ژنوتیپ II ویروس HDV قرار داد.
Hepatitis delta virus (HDV) is an RNA virus that can lead to severe acute, and chronic forms of liver disease using the helper function of the hepatitis B virus. HDV strains are categorized into three genotypes and eight clades, which distribute geographically. The prevalence rate of HDV infection varies from 2.4 to 10 percent in blood donors for chronic liver disease in Iran. The aim was to find out the phylogenetic background of samples isolated in Shahrekord, Iran.
A total of 300 HBsAg positive sera samples that were found blood donors and HBsAg positive patients’ refer to blood transfusion center and clinical laboratory in Shahrekord, Iran. HDV RNA was extracted using RNXPlus (CinnaGen, Iran). 421 bp corresponding to HD Ag have been isolated from Hepataitis Delta Virus in Shahrekord, then were amplified in PCR system And 412 bp fragments for sequencing PCR products were sent to participate macro genes Korea.
Total of 350 serum samples studied in two cases (0/57%) HDV infection was observed in the RT-PCR method. HDVAg Iranian isolates sequenced in this study were compared with 15 sequences from isolates HDV from different countries. 2 positive samples under study were compared by clustral X software with registered sequences of this gene in NCBI gene bank. After specifying the amount of similarity, obtained phylogenic tree was drawn by Njplot software. Sequence of HDV isolates from different countries. Samples under study had 99/1-99/7 percent similarity to sequences of this virus from southeastern Asian countries (china and Taiwan) and based on previous studies, we can put these viruses in genotype II branch of HDV virus.
1- Tassopoulos NC, Papaevangelous GJ, Sjogern MH. Roumeliotou- Karayannis A. natural history of acute hepatitis B surface antigen-positive hepatitis in Greek adults. Gastroenterol. 1987; 92(6): 1844-1850.
2- Pastore G, Santantonio T, Milella M. Anti-HBe-positive chronic hepatitis B with HBV-DNA in the serum; response to a 6. Month course of lymphoblastoid interferon. J Hepatol. 1992; 14(2): 221-225.
3- Taghvaei T, Khanlor Pour M, Mahdavi M, Tirgar Fakheri H, Maleki E, Khalilian A. Prevalence of Hepatitis Delta Virus in HBsAg-positive patients and to investigate the factors associated with it in the years 2007-8. J Mazandaran Uni of Med Sci. 2008; 67(10):102-106.
4- Gerin JL, Casey JL, Purcell RH. Filds – virology Hepatitis. Delta Virus; 2001; 4(2): 2458-2469.
5- Mohebbi SR, Zali N, Derakhshan F, Tahami A, Mashayekhi R, Amini-Bavil-Olyaee S, et al. Molecular Epidemiology of Hepatitis Delta Virus (HDV) in Iran: A Preliminary Report. J Med Virol. 2008; 80(12):2092–2099.
6- Kasper DL, Fauei AS, Longo DL, Braunwald EB. Harisson’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. 2005: 1050-1100.
7- Panahi, M. Hepatitis delta Virus. Med J Mashhad Univ Med Sci. 2010; 53(2):117-122.
8- Rezvan H, Forouzandeh B, Taroyan S. A study on delta virus infection and its clinical Impact in Iran. Infect. 1990; 18(1): 26-28.
9- Alavian SM and Alavian SH. Hepatitis D Virus Infection; Iran, Middle East and Central Asia. Hepaitest Montaly. 2005; 5(4):137-143.
10- Amini Kafi-abad S. Viral hepatits diagnosis by laboratory methods. Iranian Blood Transfus Organs; 2007; 4(5): 23-112.
11- Behzadian F, Sabahi F, Karimi M, Sadeghizadeh M, Maghsoudi N, Forooshani RS, et al.. Molecular phylogenetic analysis of Iranian HDV completes genome. Virus Genes. 2005; 30(3):383-393.
12- Esmaeili R., Alavian SM, Hajibeigi B, Sabouri E, Edalat R,. Adeli A. Phylogenetic Analysis of Twenty-Six Cases of Hepatitis Delta Virus Isolates in Tehran, Iran. Hepat Mon. 2009; 9(3):196-200.
13- Attaran MS, SharifiZ, Hosseini SM, Samei S, Ataee Z. Prevalence of hepatitis B and hepatitis D coinfection in asymptomatic blood donors in Iran. APMIS; 2014. 122 (3):243-247.
14- Mansour W, Bollahi MA, Hamed CT, Brichler S, Le Gal F, Ducancelle A, et al.. Virological and epidemiological features of hepatitis delta infection among blood donors in Nouakchott, Mauritania. J Clin Virol. 2012; 55(1):12-16.
15- Le Gal F, Badur S, Hawajri NA, Akyüz F, Kaymakoglu S, Brichler S, et al. Current hepatitis delta virus type 1 (HDV1) infections in central and eastern Turkey indicate a wide genetic diversity that is probably linked to different HDV1 origins. Arch Virol. 2012; 157(4):647-659.
16- Kim HS, Kim SJ, Park HW, Shin WG, Kim KH, Lee JH, et al. Prevalence and clinical significance of hepatitis D virus co-infection in patients with chronic hepatitis B in Korea. J Med Virol. 2011; 83(7):1172-1177.
17- Foupouapouognigni Y, Noah Noah D, Sartre MT, Njouom R. High Prevalence and Predominance of Hepatitis Delta Virus Genotype 1 Infection in Cameroon. J Clin Microbiol. 2011; 49(3):1162-1164.
18- Celik I, Karatayli E, Cevik E, Kabakçi SG, Karatayli SC, Dinç B, et al. Complete genome sequences and phylogenetic analysis of hepatitis delta viruses isolated from nine Turkish patients. Arch Virol. 2011; 156 (12):2215-2220.
19- Barros LM, Gomes-Gouvêa MS, Pinho JR, Alvarado-Mora MV, Dos Santos A, Mendes-Corrêa MC, et al. Hepatitis Delta virus genotype 8 infection in Northeast Brazil: inheritance from African slaves? Virus Research; 2011; 160(1-2):333-339.
20- Gomes-Gouvêa MS, Soares MC, Bensabath G, de Carvalho-Mello IM, BritoEM, SouzaOS, et al. Hepatitis B virus and hepatitis delta virus genotypes in outbreaks of fulminant hepatitis (Labrea black fever) in the western Brazilian Amazon region. J Virol. 2009; 90(11):2638-2643.
21- Moriyama M, Taira M, Matsumura H, Aoki H, Arakawa Y, Kaneko M, et al. Full genomic analysis of hepatitis delta virus prevalent on Miyako Island, Japan. Intervirol. 2005; 48(4):246-254.
22- Saudy N, Sugauchi F, Tanaka Y, Suzuki S, Abdel Aal A, Zaid M, et al. Genotypes and Phylogenetic Characterization of Hepatitis B and Delta Viruses in Egypt. J Med Virol. 2003; 70(4):529-536.
23- Ivaniushina V, Radjef N, Alexeeva M, Gault E, Semenov S, Salhi M, et al. Hepatitis delta virus genotypes I and II cocirculate in an endemic area of Yakutia, Russia. J Gen Virol. 2001;82(11):2709-18.
24- Sakugawa H, Nakasone H, Nakayoshi T, Kawakami Y, Miyazato S, Kinjo F, et al. Hepatitis delta virus genotype IIb predominates in an endemic area, Okinawa, Japan. J Med Virol. 1999; 58(4):366-372.