تشخیص گونه مایکوپلاسما سینوویه در نمونه‌های بالینی با استفاده از روش VlhA-PCR

محورهای موضوعی : آسیب شناسی درمانگاهی دامپزشکی

حسین انصاری ¹ , سید علی پوربخش ² , نریمان شیخی ³ , محمد حسن بزرگمهری فرد ⁴ , عباس اشتری ⁵

1 - دانشجوی دوره دکترای تخصصی بیماریهای طیور، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
2 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران، تهران، ایران
3 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
4 - گروه علوم درمانگاهی، دانشکده علوم تخصصی دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم وتحقیقات تهران، تهران، ایران
5 - آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج، ایران

تاریخ دریافت : 1388/08/21 تاریخ پذیرش : 1389/03/08 تاریخ انتشار : 1388/12/01

کلید واژه: PCR, مایکوپلاسما سینوویه, نمونه‌های بالینی, ژن VlhA,

چکیده مقاله :

مایکوپلاسما سینوویه به عنوان یکی از اصلی ترین پاتوژن های پرندگان، خسارات اقتصادی فراوانی را به صنعت مرغداری وارد می کند. هدف اصلی این مطالعه شناسایی گونه مایکوپلاسما سینوویه در نمونه های بالینی با استفاده از روش VlhA-PCRمی باشد. برای بررسی تیتر سرمی، تعداد 375 نمونه سرمی از 25 گله مادر گوشتی اخذ و بر روی آن تست (Rapid Serum Agglutination) RSA انجام گردید که 143 نمونه، معادل 19 گله در آزمایش RSA مثبت گردید. جهت نمونه‌برداری برای (Polymerase Chain Reaction) PCR از 25گله ای که 19 گله آن در تست RSA مثبت شده بودند، 20 گله انتخاب و سوآپ های استریل از شکاف کامی، نای، کیسه هوایی و ریه از آنها تهیه گردید. سه سوآپ از سه پرنده داخل یک لوله آزمایش حاوی یک میلی لیتر PBS انداخته شد و به آزمایشگاه منتقل گردید تا برای انجام PCR مورد استفاده قرار گیرد. در این مطالعه، از پرایمرهای اختصاصی برای ژن VlhA استفاده شد. محصول PCR تولیدی توسط پرایمرهای اختصاصی، در 8 گله، باند 400-350 جفت بازی را برای همه سویه های فیلدی بر روی ژل الکتروفورز تشکیل داد. VlhA-PCR با حساسیت بسیار بالا می تواند در تشخیص قطعی عفونت با مایکوپلاسما سینوویه در آزمایشگاه به کار برده شود.

چکیده انگلیسی:

As one of the major pathogens of avian species, Mycoplasma Synoviae causes significant economic losses to the poultry industry. The main purpose of this study was to detect Mycoplasma Synoviae in clinical samples using the VlhA-PCR method. For serological screening test, 373 serum samples were collected from 25 breeder farms and rapid serum agglutination test conducted which revealed that 143 samples equivalent to 19 breeder farms were positive. For VlhA-PCR assay, 20 of the previously mentioned breeder farms were selected and sterile swab were collected from the palatine cleft, trachea, air sacs and lungs. Three swabs from 3 birds were placed in a test tube containing 1 ml of PBS and transferred to the laboratory for PCR test. Specific primers for VIhA gene were employed in this study. The PCR product from specific primers showed 350-400 bp for all field isolated on electrophoresis gel in 8 farms. VlhA-PCR with high sensitivity could be employed in definitive diagnosis of Mycoplasma Synoviae infection in the laboratory.

منابع و مأخذ:

1. حسینی، ا. (1386): تعیین هویت مولکولی مایکوپلاسما سینوویه جدا شده از مرغداری­های صنعتی استان مازندران، رساله دکترای تخصصی بیماری­های طیور، دانشکده دامپزشکی دانشگاه علوم تحقیقات تهران، صفحات: 89-1.


2. Ben, B., Abdelmoumen Mardassi, R., Ben Mohamed, I., Gueriri, S. and Boughattasand B. (2005): Duplex PCR  to differentiate between mycoplasma synoviae  and mycoplasma gallisepticum on the basis of conserved species-specific sequence of their hemagglutinin gene,journal of clinical microbiology, pp: 48-958.


3. Bradbury, Y. (2001): Avian Mycoplasma. Work shop of European Mycoplasma specialist. World poultry Sci.J., 61: 355-357.


4. Fiorentin, L., Mores M., Trevison, I.M. and Antunes, S.C. (2003): Test profiles of broiler breeder flocks housed in farms with endemic Mycoplasma synoviae infection. Brazilian journal of poultry science, pp: 38-49.


5. Nathan, J. and Gasser, R. (2007): Classification of mycoplasma synoviae strains using single-strand conformation polymorphism and high-resolution melting-curve andlysis of the VlhA gene single-copy region, Microbiology, 153: 2679-2688.


6. Jordan, F., Mark, P., Denis A. and Trevor, F. (2002): Poultry Disease, fifth Edition, p: 178-193


7. Kiss, I., Matiz, K., Kaszanitsky, E., Chavez, Y. and Johnsson, K.E. (1997): Detection and identification of avian mycoplasma by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism  assay. Vet. Microbial. pp


8. Kleven, S.H. (2008): Mycoplasmosis.In: Saif, Y.M., Barnes, H.J., Gilsson, J.R., Fadly, A.M., Mc Dongald, L.R. and swayne, D.E. Diseases of Poultry. 12th.ed. Iowa state university press (A Blackwell Publishing Company). pp: 719-722.


9. Lockaby, S.B., Hoerr, F.J., Lauerman, L.H., Smith, B.F., Samoylov, A.M., Toivio-Kinnucan, M.A.and et al (1999): Factors associated with virulence of Mycoplasma synoviae. Avian Dis. Apr-Jun, 43(2): 251-256.


10. Lauerman, H., Sharpton, A. (1993): Development and application of a polymerase chain reaction assay for mycoplasma synoviae, avian disease, vol. 37: 829-834.


11. Noormohamadi, A.H., Markham, P.F., Kanci, A., Whither, K.G. and Browing, G.F. (2002): A novel mechanism for control of antigenic variation in the hemagglutining gene family of Mycoplasma synoviae. Mol. Microbial. 35: 911-923.


12. Noormohamadi, A.H., Hemmatzadeh, F. and Whither, K.G. (2007): Safety and Efficacy of the Mycoplasma Synoviae MS-H Vaccine in Turkeys. Avian Disease Preprint; N/A-N/A.


13. OIE terrestrial manual. (2008): Avian mycoplasmosis, chapter 3.5.6. pp: 482-512.


14. Ramirez, A., clive J., Naylor, P., Hammond, j. and Bradbury, M. (2006): Development and evaluation of a diagnostic PCR for Mycoplasma synoviae using primers located in The intergenic spacer region dna 23s rRNA gene. Veterinary Microbiology, 118: 76-82.


15. Ricardo, M. and Silveria, L.F. (1996): polymerase chain reaction  optimization for mycoplasma  synoviae  diagnosis,avian disease , vol 40:218-222.


16. Senties-Cue, G., Shivaprasad, H.L., Chin, R.P. (2005): Systemic Mycoplasma synoviae infection in broiler chickens. Avian Pathol. Apr; 34(2): 137-42.s


17. Yang Hong ,Marcarmen Garcia, (2004): Specific Detection and typing of mycoplasma synoviae strains in poultry with pcr and DNA sequence analysiss targeting the Hemagglutinin encoding Gene VlhA, Avian Disease, vol, 48:606-616.


18. Yogev, D., Levision, S., Kleven, S.H., Halachmi, D. and Razhn, S. (1998): Ribosomal RNA gene probes to detect intraspecies heterogenecity hn Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae. Avian Disease; 32: 220-231.