استخراج و کلون سازی ژن اینترلوکین-2 جوجه پرورشی ایران
محورهای موضوعی : زیست فناوری میکروبی
حمیده امینی
1
(
دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شمال، گروه میکروبیولوژی
)
سید داود حسینی
2
(
بخش مولکولی و بیوتکنولوژی، موسسه واکسن و سرم سازی رازی اراک
)
جمیله نوروزی
3
(
دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شمال، گروه میکروبیولوژی
)
دلاور شهباززاده
4
(
بخش بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران
)
کلید واژه: IL-2 جوجه, واکسن نوترکیب, سیتوکین, ادجوانت, کلون سازی,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: در سالهای اخیر سیتوکینهای ایمنی مانند اینترلوکین-2 جوجه (chIL-2)، همراه با رژیمهای واکسیناسیونی در صنعت ماکیان مورد استفاده قرار گرفته است. این سیتوکینها می توانند به واسطه تکثیر لمفوسیت های T، توسعه لمفوسیتهای B و فعالسازی سلولهای کشنده ایمنی (NK) موجب افزایش کارایی واکسن ها گردند. این مطالعه با هدف استخراج و کلونینگ ژن اینترلوکین-2 جوجه پرورشی انجام گرفت. مواد و روش ها: در ابتدا برای جداسازی chIL-2، RNA تام به وسیله کشت سلولهای طحال جوجه و با استفاده از فرآیند Trizol جداسازی گردید. با استفاده از تکنیک تک مرحلهای RT-PCR و پرایمرهای طراحی شده، mRNA به DNA تبدیل و تکثیر شد. سپس محصول PCR در وکتور PTZ57R/T از کیت TA-cloning وارد و توسط شوک حرارتی به باکتری اشریشیا کلی Top10، منتقل گردید. یافتهها: نتیجه RT-PCR نشان دهنده حضور یک باند bp 668 بود. درستی انجام فرآیند کلونسازی ژن در باکتری میزبان، از طریق واکنش هضم آنزیمی توسط آنزیمهای برش دهنده HindIII و EcoRI و سپس انجام PCR از کلنیهای مورد نظر و تعیین توالی ژن بدست آمده اثبات گردید. نتیجه گیری: در این پژوهش برای اولین بار در ایران، ژن chIL-2 جداسازی و در باکتری کلون شد و تعیین توالی و بررسی آن در سایت NCBI نیز نشاندهنده شباهت 99% آن با توالی سایر ژنهای chIL-2 جداسازی شده در مطالعات مختلف بود.
Background and Objectives: Nowadays, the immune cytokines, such as the chicken IL-2 (chIL-2) gene are incorporated into vaccination regimens used by the poultry industry. The cytokines can potentially enhance the efficiency of vaccines according to increase T lymphocyte proliferation, B lymphocyte development and natural killer cell (NK) activation. The aim of this study was extraction and cloning of Iranian chicken interleukine-2 (chIL-2). Materials and Methods: First of all, in order to extract chIL-2 gene, total cell RNAs were isolated by culturing the harvested splenocytes and using Trizol reagent. The chIL-2 specific mRNA was converted into cDNA using reverse Transcriptase (RT) and specific designed primers. Then, The PCR product was ligated into the PTZ57R/T plasmid (TA-cloning kit) and was transformed into the competent Top10 E. coli using heat shock method. Results: A unique band of 668-bp was obtained after RT-PCR amplification. The results of restriction enzyme, colony PCR from transformed colonies and also gene sequencing confirmed the existence of desired gene in transformants bacteria. Conclusion: For the first time in Iran we could extract and clone the chIL-2 gene in bacteria and gene alignment. A direct sequencing test showed 99% similarity between this gene and the established data in NCBI.