توانایی Foxp3- IgG(Fc) در القای پاسخهای همورال علیه سلولهای Tتنظیمی
محورهای موضوعی : بیوتکنولوژی
مریم ناصرالاسلامی
1
,
ندا موسوی نیری
2
1 - گروه سلولی مولکولی, واحد علوم پزشکی تهران, دانشگاه آزاد اسلامی، تهران, ایران
2 - گروه بیوتکنولوژی پزشکی, واحد علوم پزشکی تهران, دانشگاه آزاد اسلامی، تهران, ایران
کلید واژه: سلول T تنظیمی, ایمونوتراپی, پاسخ های هومورال, FoxP3, Fc,
چکیده مقاله :
بنظر می رسد که موفقیت روش های واکسیناسیون به منظور ایمونوتراپی به واسطه شبکه قدرتمندی از اجزای سرکوبگر سیستم ایمنی که سلولهای T تنظیمی نیز یکی از آنها می باشد مختل می شود. در مطالعات پیشین روی ایجاد پاسخ ایمنی علیه سلولهای T تنظیمی بیانگر foxp3 و حذف آنها کار شده است. از آنجاییکه این مطالعات نتوانستند به طور کارآمد با حذف نسبی این سلولها بر اثرات مهاری آنها غلبه کنند؛ در مطالعه حاضر سعی شده است که با ساخت واکسنی کارآتر بر علیه سلولهای T تنظیمی نتایج روش های ایمونوتراپی ترکیبی در سرطان بهبود یابد. سازه DNA دارای بخش C از ایمونوگلوبولین G در الحاق به ژن Foxp3 ساخته شد. بیان سازه FOXP3-Fc بعد از ترانسفکت کردن آن به سلولهای HEK با تکنیکهای میکروسکوپ فلوئورسنت، فلوسایتومتری و وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت. این فیوژن پروتئین در سلولهای E. coli BL21 به عنوان میزبان بیان شدند. سازه و پروتئین نوترکیب مطابق آن به موشهای C57BL/6 تزریق شدند و دو هفته پس از آخرین تزریق سطح سرمی آنتی بادی ایمونوگلوبین G و زیر کلاسهای آن با روش سنجش الیزا مورد بررسی قرار گرفتند. آنالیز بیان سازه DNA با روشهای متعدد، بیان موفق این پروتئین الحاقی را در سلولهای یوکاریوت نشان داد. بعلاوه بیان پروکاریوتیک Foxp3-Fc نیز با انجام آنالیزهای الکتروفورز ژل پلی اکریلامید – سدیم دودسیل سولفات و متعاقبا وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت.
It seems that the success of vaccination in order to cancer immunotherapy is abrogating through a powerful network of immune system suppressive elements which one of them is regulatory T cell. In different studies inducing an immune response against regulatory cells expressing foxp3 and their removal have been assessed. As these previous studies could not efficiently conquer the suppressive effect of regulatory cells by their partial elimination, we were searching for constructing more effective vaccines against regulatory T cells by which we hope to improve the effect of combined means of immunotherapy in cancer. DNA construct containing fragment C (Fc) portion of IgG fused to Foxp3 was designed. Expression of DNA construct was investigated following its transfection into HEK cells through fluorescent microscopy, flow cytometry and western blot. FOXP3-Fc fusion protein was expressed in E. coli strain BL21 as host cells. DNA construct and respective protein were injected into C57BL/6 mice. After 2 weeks, serum level of IgG antibody and its sub classes was investigated by ELISA test. The expression analysis of DNA construct showed that this construct successfully expressed in eukaryotic cells. Moreover, the Foxp3-Fc expression was confirmed by SDS-PAGE followed by western blot analysis.
_||_