شناسایی مولکولی باکتری اشریشیا کلی K99 و ارزیابی تیتر سرمی آن در حیوان آزمایشگاهی
محورهای موضوعی : ایمنی شناسی
فائزه فرحانی
1
,
یحیی تهمتن
2
,
محمد کارگر
3
1 - کارشناس ارشد، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروب شناسی
2 - استادیار، بخش میکروب شناسی، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی-شیراز
3 - دانشیار، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروب شناسی
کلید واژه: الایزا, گوساله, اشریشیاکلی, اسهال, فیمبریه K99,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: اشریشیا کلی مهمترین عامل ایجاد اسهال گوساله ها در روزهای اول زندگی می باشد. از مهمترین راهبردهای کنترل و پیشگیری از این بیماری واکسیناسیون مادران بارداراست که به واسطه خوراندن آغوز به نوزاد انجام می شود. این مطالعه با هدف شناسایی مولکولی باکتری اشریشیا کلی K99 و ارزیابی تیتر سرمی آن در حیوان آزمایشگاهی انجام شد. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت تجربی بر روی حیوان آزمایشگاهی رت انجام گرفت. در ابتدا از روش Multiplex PCR برای شناسایی ژن های عوامل بیماریزایی K99 ، F41 و STa استفاده شد. پس از کشت باکتری در محیط کشت مینکای مایع، با افزودن فرمالین 0.4 درصد غیر فعال گردید. آنتی ژن حاصل پس از شستشو با PBS و سانتریفیوژ آماده سازی گردید. میزان تقریبی آنتی ژن برای تزریق به رت در 2 دوزCUF/ml 710 و 109 تنظیم شد. گروه آزمون، آنتی ژن را در دو نوبت همراه با اجوانت آلوم به صورت زیر پوستی دریافت کردند. گروه کنترل نیز همه موارد به جز آنتی ژن را دریافت نمودند. خون گیری تا هشت هفته صورت گرفت و تیتر آنتی بادی در سرم ها تعیین شد. یافته ها: رت های ایمن شده افزایش تیتر از هفته چهارم تا انتهای هفته هفتم را نشان دادند. میانگین عیارآنتی بادی های سرمی رت های ایمن شده به طور معنی داری بیشتر از گروه شاهد بود. اما در گروهی که دوز بالاتری از آنتی ژن را دریافت کرده بودند، عیارآنتی بادی بیشتر از گروه دیگر بود. اما سرعت کاهش عیار آنتی بادی هر دو گروه هم زمان و در پایان هفته هفتم مشاهده گردید. نتیجه گیری: با توجه به نتایج به دست آمده استفاده از دوز بالاتر آنتی ژن تزریقی باعث افزایش میزان عیارآنتی بادی و ایمنی پایدارتر می شود. بنابراین برای القای پاسخ ایمنی در بدن حیوان کارآمدتر می باشد.
Background & Objectives: Escherichia coli is one of the primary etiologic agents for diarrhoea in neonatal calves, and the maternal immunization is an effective protection for the neonates because of feeding with colostrum. This study was aimed to molecular detection of E. coli K99 and evaluation of the serum antibody titers in laboratory animals. Materials & Methods: This study was experimentally carried out on rat to detect the marker genes. First, a Multiplex PCR was applied to detect the Sta, F41 and K99 pathogenic genes. Following growth of E. coli K99 bacteria into Minca broth, the bacteria were inactivated by 0.4% formaldehyde. The antigen was prepared after washing with PBS and centrifugation. The rats were subcutaneously inoculated with inactivated antigen with 107 and 109 CFU/ml in two groups. The control group was inoculated with a suspension containing all ingredients except for the antigen. Rat was allowed to nurse immediately after injection, and blood samples were taken for serum titration for 8 weeks. Results: An increase in the titer of serum antibody was seen after four weeks, and it continued after seven weeks. The antibody titration of rate was significantly higher in the immunized rat group than in the control group. We found good correlation in two groups. There is a grateful increase in antibody titer in group 2 (received 109 CFU/ml antigen) than in group 1 (received 107 CFU/ml antigen), but decreasing rate in the both groups were the same. Conclusion: These findings indicate that the use of killed antigen with high titer preparation containing sufficient antigen and may provide passive protection in animals. This resulted in by stimulation of immune cell due to high dose antigen.