ایجاد سازواره های ژنی جدید به منظور بیان ژن هورمون رشد شترمرغ در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی
محورهای موضوعی : زیست فناوری میکروبیحسین فتح پور 1 , عباس دوستی 2 , مریم قاسمی 3 , حمیدرضا کبیری 4
1 - دانشیار، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
2 - استادیار، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهرکرد
3 - کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
4 - کارشناس، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد
کلید واژه: همسانه سازی, شترمرغ, هورمون رشد,
چکیده مقاله :
سابقه و هدف: رشد مناسب شترمرغ به هورمون رشد آن و تغذیه بستگی دارد. هورمون رشد شترمرغ یک پلی پپتید است که موجب تحریک رشد و تکثیر سلول ها می شود. هدف از این مطالعه همسانه سازی و تولید دو سازواره ژنی به منظور بیان هورمون رشد شترمرغ در سیستم های پروکاریوتی و یوکاریوتی می باشد. مواد و روش ها: در این پژوهش، RNA از غده هیپوفیز شترمرغ تخلیص شد و cDNA آن به روش رونوشت برداری معکوس تهیه گردید. cDNA حاصل، به روش همسانه سازی T/A در پلاسمید TOPO کلون شد. سپس ساب کلونینگ cDNA هورمون رشد شترمرغ در وکتورهای pcDNA3.1 و pET32 انجام شد. یافته ها: همسانه سازی cDNA هورمون رشد شترمرغ در پلاسمید TOPO با موفقیت انجام شد و روش های PCR و هضم اندونوکلئازی، صحت کلون سازی را تایید نمود. پس از ساب کلونینگ این cDNA، پلاسمید های نوترکیب، pcDNA3.1-gh و pET32-gh حاصل گردید و سازواره های حاصل توسط هضم آنزیمی تایید گردیدند. نتیجه گیری: با استناد به نتایج به دست آمده در این مطالعه به نظر می رسد که سازه های ژنی تازه ساخته شده در این پژوهش می تواند به عنوان یک راهکار مناسب برای تولید صنعتی هورمون رشد شترمرغ مورد استفاده قرار گیرند.
Background & Objectives: Growth of ostrich depends to employment of growth hormone and proper nutrition. The ostrich growth hormone is a polypeptide that stimulates growth and cell reproduction. The aim of this study was to clone and generation of two new gene constructs for expression of ostrich growth hormone gene in prokaryotic and eukaryotic systems. Materials & Methods: In this study, RNA was extracted from ostrich pituitary gland and cDNAs synthesized using RT-PCR method. These cDNAs were cloned into TOPO vector based on T/A method. Then, cDNA sub-clones of ostrich growth hormone were prepared on pcDNA3.1 and pET32 vectors. Results: Cloning of ostrich growth hormone cDNA in TOPO vector was confirmed by PCR and endonuclease restriction digest. After sub-cloning of this cDNA, pcDNA3.1-gh and pET32-gh recombinant vectors were generated and the presence of genes were confirmed using restriction digestion. Conclusion: According to the results, the new recombinant vectors generated in this study can serve as an effective approach for production of the ostrich growth hormone in commercial levels.