شناسایی باکتریهای همزیست غالب دستگاه گوارش بید غلات (Sitotroga cerealella)

محورهای موضوعی : حشره شناسی و سایر بندپایان

راحله مرادی ¹ , مجید کزازی ² , غلام خداکرمیان ³ , عزت ا.... صداقت فر ⁴

1 - کارشناس ارشد رشته حشره شناسی دانشگاه بوعلی سینا همدان
2 - عضو هیات علمی گروه حشره شناسی دانشگاه بوعلی سینا همدان
3 - عضو هیات علمی گروه بیماری شناسی گیاهی دانشگاه بوعلی سینا همدان
4 - عضو هیات علمی گروه بیماری شناسی گیاهی دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک

تاریخ دریافت : 1400/10/13 تاریخ پذیرش : 1400/12/02 تاریخ انتشار : 1400/12/01

کلید واژه: بید غلات, باکتری های همزیست, Enterobacter hormaechei, Enterococcus mundtii, Sitotorga cerealella,

چکیده مقاله :

در این پژوهش، باکتریهای همزیست دستگاه گوارش بید غلات شناسایی شد.برای پرورش بید غلات از جو با درصد پروتئین بالا استفاده شد ظرف حاوی جو بعد از آلوده سازی در اطاقک رشد در شرایط دمایی 24 درجه سلسیوس ورطوبت نسبی 65 درصـد نگهـداری شـدند. جهت جدا نمودن باکتری دستگاه گوارش بید غلات از بین جمعیت پرورش داده شده 10 لارو سالم انتخاب شد. دستگاه گوارش لاروها پس از ضد عفونی در اتانول 70 درصد، هیپوکلریت سدیم 5درصد و آب مقطر خارج شد سپس جهت همگن نمودن دستگاه گوارش از یک میلی‌لیتر بافر فسفات 0.1مولار با 7pH= استفاده شد.محتویات همگن‌ شده در محیط کشت نوترینت آگار کشت داده شدبرای انجام واکنش های زنجیره‌ای پلیمراز از5 میکرو لیتر Master Mix ، 2 میکرولیتر DNA استخراج شده ، 1.5 میکرولیتر پرایمر RP2 و 1.5 میکرو لیتر پرایمر FD1 و 15 میکرولیتر Distilled Water که حجم کلی این مواد باید به 25 میکرو لیتر برسد. فرآیند PCR با استفاده از پرایمر‌های عمومی FD1 و RP2 و توالی ژن 16srRNA در دستگاه ترموسایکلرانجام شد. توالی یابی با همکاری شرکت Bioneer انجام شد.ویژگیهای فنوتیپی باکتریهای جدا شده با روشهای استاندارد باکتری‌شناسی مشخص شد. بعد از بررسی تمام کلونی های تهیه شده و مقایسه نتایج بدست آمده بیشترین فراوانی از نظر تعداد کلنی مختص به باکتری mundtii Enterococcus بود و باکتری Enterobacter hormaechei از فراوانی کمتری در دستگاه گوارش بید برخوردار بود. همچنین با توجه به الکتروفورز انجام شده بالاترین باندهای مشاهده شده مربوط به باکتری hormaechei Enterobacter و کوتاهترین باند متعلق به mundtii Enterococcus میباشد.

چکیده انگلیسی:

In this study,symbiotic bacteria of Sitotorga cerealella were identified. Containers containing barley were stored in a growth chamber at a temperature of 24 ° C and a relative humidity of 65% after contamination. To separate the bacteria of Sitotorga cerealella gastrointestinal tract,10 healthy larvae were selected from the reared population. After disinfection, the larvae gastrointestinal tract was removed with ethanol 70%, sodium hypochlorite and distilled water5%. Then, one milliliter of 0.1 M phosphate buffer with pH 7 was used to homogenize the gastrointestinal tract. The homogeneous and diluted contents were cultured in nutrient agar medium. To perform polymerase chain reactions from 5 μl of Master Mix ,2 μl of extracted DNA, 1.5 μl of RP2 primer and 1.5 μl of FD1 primer and 15 μl Distilled Water that the total volume of these materials should reach 25 microliters. The PCR process was performed using general primers FD1 and RP2 and 16srRNA gene sequence in a thermocycle.The PCR product sequencing was performed in collaboration with South Korea&amps Bioneer and the results were reviewed at the NCBI site. The phenotypic characteristics of the isolated bacteria were determined by standard bacteriological methods. After reviewing all the prepared colonies and comparing the obtained results, the highest frequency in terms of number of colonies was specific to Enterococcus mundtii and Enterobacter hormaechei was less abundant in the gastrointestinal tract of Sitotorga cerealella. Also, according to electrophoresis, the highest bands observed belong to Enterobacter hormaechei and the shortest band belongs to Enterococcus mundtii.