تعیین مکان بیان کننده گیرنده HCA2 در لوله گوارش موش صحرایی با استفاده از روش ایمونوهیستوشیمی
محورهای موضوعی : پاتوبیولوژی مقایسه ای
پوریا شعبانی
1
(گروه علوم پایه، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران)
سمیه حامدی
2
(1- گروه علوم پایه، واحد کرج، دانشگاه آزاد اسلامی، کرج، ایران)
کلید واژه: لوله گوارش, موش صحرایی, گیرنده HCA2, ایمونوهیستوشیمی,
چکیده مقاله :
گیرنده هیدروکسی کربوکسیلیک اسید2 ( HCA2 ) هدف داروی نیاسین است. در این مطالعه الگوی بیان این گیرنده ها در سلول های بخش های مختلف لوله گوارش (از دهان تا مری) موش صحرایی با روش ایمونوهیستوشیمی توصیف شده است. 6 موش صحرایی نر بالغ از نژاد ویستار تحت بیهوشی آسان کشی شدند. مقاطع بارافینی عرضی 5 میکرونی از مری، معده، دئودنوم، ژژونوم، ایلئوم، سکوم، کولون ها و رکتوم تهیه شد. آنتی بادی اولیه جهت رنگ آمیزی ایمونوهیستو شیمی، آنتی بادی چند دودمانی خرگوشی ضد HCA2 موش صحرایی (غلظت 1:300 و انکوباسیون به مدت یک شب در 4 درجه سانتی گراد) بود. آنتی بادی ثانویه با HRP کونژوگه شده بود. واکنش ایمنی ضعیف در سلول های ابی تلیال مری و معده غیر غده ای، واکنش ایمنی قوی مربوط به گیرنده های HCA2 در سلول های ابی تلیال دئودنوم، ژژونوم، ایلئوم و لایه عضلانی ژژونوم دیده شد. بعلاوه واکنش بذیری در کولون اندک بوده و در رکتوم هیچگونه واکنش بذیری دیده نشد. در قاعده سکوم رنگ پذیری سلول های پوششی شدید بود. در کل، بروتئین گیرنده های HCA2 به فراوانی در ابی تلیوم روده باریک و قاعده سکوم موش صحرایی حضور دارد، این امر موش صحرایی را به یک حیوان آزمایشگاهی مناسب جهت مطالعه بر روی این گیرنده ها در دستگاه گوارش تبدیل می کند.
گیرنده هیدروکسی کربوکسیلیک اسید2 ( HCA2 ) هدف داروی نیاسین است. در این مطالعه الگوی بیان این گیرنده ها در سلول های بخش های مختلف لوله گوارش (از دهان تا مری) موش صحرایی با روش ایمونوهیستوشیمی توصیف شده است. 6 موش صحرایی نر بالغ از نژاد ویستار تحت بیهوشی آسان کشی شدند. مقاطع بارافینی عرضی 5 میکرونی از مری، معده، دئودنوم، ژژونوم، ایلئوم، سکوم، کولون ها و رکتوم تهیه شد. آنتی بادی اولیه جهت رنگ آمیزی ایمونوهیستو شیمی، آنتی بادی چند دودمانی خرگوشی ضد HCA2 موش صحرایی (غلظت 1:300 و انکوباسیون به مدت یک شب در 4 درجه سانتی گراد) بود. آنتی بادی ثانویه با HRP کونژوگه شده بود. واکنش ایمنی ضعیف در سلول های ابی تلیال مری و معده غیر غده ای، واکنش ایمنی قوی مربوط به گیرنده های HCA2 در سلول های ابی تلیال دئودنوم، ژژونوم، ایلئوم و لایه عضلانی ژژونوم دیده شد. بعلاوه واکنش بذیری در کولون اندک بوده و در رکتوم هیچگونه واکنش بذیری دیده نشد. در قاعده سکوم رنگ پذیری سلول های پوششی شدید بود. در کل، بروتئین گیرنده های HCA2 به فراوانی در ابی تلیوم روده باریک و قاعده سکوم موش صحرایی حضور دارد، این امر موش صحرایی را به یک حیوان آزمایشگاهی مناسب جهت مطالعه بر روی این گیرنده ها در دستگاه گوارش تبدیل می کند.
2- Tunaru S, Kero J, Schaub A, Wufka C, Blaukat A, Pfeffer K, et al. PUMA-G and HM74 are receptors for nicotinic acid and mediate its anti-lipolytic effect. Nature Medicine. 2003; 9(3): 352-5.
3- Wise A, Foord SM, Fraser NJ, Barnes AA, Elshourbagy N, Eilert M, et al. Molecular identification of high and low affinity receptors for nicotinic acidJournal of Biological Chemistry. 2003; 278(11): 9869-74.
4- Yu AL, Birke K, Lorenz RL, Welge-Lussen U. Constitutive expression of HCA(2) in human retina and primary human retinal pigment epithelial cells. Current Eye Research. 2014; 39(5): 487-92.
5- Kostylina G, Simon D, Fey MF, Yousefi S, Simon HU. Neutrophil apoptosis mediated by nicotinic acid receptors (GPR109A). Cell Death Differ. 2008; 15(1):134-42.
6- Schaub A, Fütterer A, Pfeffer K. PUMA-G, an IFN-gamma-inducible gene in macrophages is a novel member of the seven transmembrane spanning receptor superfamily. European Journal of Immunology. 2001; 31(12):3714-25.
7- Parodi B, Rossi S, Morando S, et al. Fumarates modulate microglia activation through a novel HCAR2 signaling pathway and rescue synaptic dysregulation in inflamed CNS. Acta Neuropathologica. 2015; 130(2):279–295.
8- Hanson J, Gille A, Zwykiel S, Lukasova M, Clausen BE, Ahmed K, Tunaru S, Wirth A, Offermanns S. Nicotinic acid- and monomethyl fumarate-induced flushing involves GPR109A expressed by keratinocytes and COX-2-dependent prostanoid formation in mice. Journal of Clinical Investigation. 2010; 120(8):2910-9.
9- Titgemeyer EC, Mamedova LK, Spivey KS, et al. An unusual distribution of the niacin receptor in cattle. Journal of Dairy Science 2011; 94:4962–7.
10- Torhan AS, Cheewatrakoolpong B, Kwee L, Greenfeder S. Cloning and characterization of the hamster and guinea pig nicotinic acid receptors. Journal of Lipid Research. 2007; 48(9):2065-71.
11- Offermanns S. Hydroxy-Carboxylic Acid Receptor Actions in Metabolism. Trends in Endocrinology & Metabolism. 2017; 28(3):227-236.
12- Cresci GA, Thangaraju M, Mellinger JD, Liu K, Ganapathy V. Colonic gene expression in conventional and germ-free mice with a focus on the butyrate receptor GPR109A and the butyrate transporter SLC5A8. Journal of Gastrointestinal Surgery. 2010; 14(3):449-61.
13- Thangaraju M, Cresci GA, Liu K, Ananth S, Gnanaprakasam JP, Browning DD et al. GPR109A is a G-protein-coupled receptor for the bacterial fermentation product butyrate and functions as a tumor suppressor in colon. Cancer Research. 2009; 69(7):2826-32.
14- Shomali T, Mosleh N, Kamalpour M. Screening of Different Organs of Rats for HCA2 Receptor mRNA. International Journal of Molecular and Cellular Medicine. 2014; 3(2):126-9.
15- Reimann F, Tolhurst G, Gribble FM. G-protein-coupled receptors in intestinal chemosensation. Cell Metabolis. 2012; 4:15(4):421-31.
_||_