غربال گری آنتی بادی انسانی بر علیه توکسین کزاز با روش نمایش فاژی
محورهای موضوعی : مجله پلاسما و نشانگرهای زیستیحمیده روحانی نژاد 1 , جلیل فلاح مهرآبادی 2 , معصومه بزاز 3
1 - پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران. ایران.
2 - گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه قم، قم. ایران
3 - پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران. ایران
کلید واژه: غنی سازی, نمایش فاژی, کزاز,
چکیده مقاله :
مقدمه و هدف:توکسین کزاز یکی از سمیترین موادی است که بر روی سیستم اعصاب مرکزی تاثیر دارد و باعث انقباض شدید عضلات میشود. بنابراین، تشخیص سریع و درمان نوروتوکسینهای تتانوس ضروری به نظر میرسد. امروزه آنتیبادیها در حوزه‌های تشخیص و درمان جایگاه ویژه‌ای را به خود اختصاص داده‌اند. در این‌میان، آنتی‌بادی‌های منوکلونال کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن و کارایی بالا در درمان بیماری‌ها مورد توجه قرار‌گرفته شده است. بلوغ تمایلی آنتیبادیها کاربرد آنها را در پزشکی و پروژههای تحقیقاتی تسهیل نموده است.در این مطالعه، هدف ما غربالگری آنتی بادی کزاز با استفاده از روش نمایش فاژی و یافتن کاربرد قطعات آنتی بادی جدا شده از کتابخانه ایمن در ابزار تشخیصی و درمانی میباشد.روش کار:در تحقیق پیش‌رو، به وسیله ی روش نمایش فاژی غنی سازی و غربال گری آنتی‌بادی منوکلونال نوترکیب انسانی از یک فرد واکسینه با توکسوئید کزاز انجام گرفته شد.کتابخانه با وکتور بیانیpSEX81 ساخته و برای غربالگری در این کتابخانه، غنی سازی با استفاده از روش نمایش فاژی انجام شد.یافته ها:فاژ کمکیM13K07 با تیتر pfu/ml1013آماده و توکسین تتانوس در میکروپلیتپوشش داده شد. روندغنی سازی با استفاده از ذرات فاژ انجام و دقت فرآیند غنی سازی توسط فاژELISA تایید گردید. تنها کلون با جذب نوری بالا از چرخه غنی سازی جدا شد. برای جداسازی آنتی بادی های کزاز، ابتدا استخراج وکتور از کتابخانه انجام شد.پس از آن، پنج مرحله غنی سازی صورت گرفت.قویترین غنی سازی در چرخه چهارم رخ داد و وجود آنتی بادی کزاز را تایید نمود. در مجموع50 تک کلنی به صورت تصادفی از این چرخه انتخاب و 20 کلون با اتصال قوی انتخاب و توالی یابی شدند.نتیجه گیری:در این مطالعه، هدف ما غربال گری آنتی بادی کزاز با استفاده از روش نمایش فاژی و یافتن کاربرد قطعات آنتی بادی جدا شده از کتابخانه ایمن در ابزار تشخیصی و درمانی میباشد.
Inroduction and Objective: Tetanus toxin is one of the most toxic substrate acting on the central nerve system causing severe muscle contraction. Rapid diagnosis and treatment of tetanus neurotoxins are crucial. Antibodies are important tools in research, diagnosis and treatment of diseases. Fully human mAbs because of minimum immunogenic reaction and high performance are important for treatment.Antibodies affinity maturation has facilitated their application in medicine and research projects.Methods: The principle of this study was to screening in immune antibody library for isolation high specificity antibody against tetanus toxin. Library was to construct with pSEX81 expression vector, and then pSEX81 was extracted from library.For screening in this library, biopanning was performed by phage display method.Results: Helper phage M13K07 was prepared at the titer of 1013pfu/ml. The tetanus toxin was coated in microtiter plate and biopanning process was done using phage particles. The exactness of enrichment process was confirmed by phage ELISA. Single clones wereisolated from biopanning cycle with highest optical density. To isolate the tetanus specificantibodies, first vector extraction was done from library. After that, five rounds of biopanning were done. The strongest enrichment occurred at the third cycle of panning and confirmed the existence of high affinity tetanus antibodies. A total 50 single colonies randomly selected from third cycle of biopanning and 20 clones with strong binding were selected and sequenced.Conclusion: In this study, our aim was the screening of tetanus antibodies by phage display selection method. The antibody fragments isolated from immune libraries applications finds in the diagnostic and treatment tools.
