بررسی نقش TNF-αدر تغییر الگوی بیان ژن CXCR4 در سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغز استخوان انسان
محورهای موضوعی : مجله پلاسما و نشانگرهای زیستیرزیتا ضیایی 1 , مریم آیت اللهی 2 , رامین یعقوبی 3 , زینب صحرائیان 4 , نصرت الله ضرغامی 5
1 - دانشگاه علوم پزشکی تبریز، شعبه بین الملل ارس. جلفا. ایران.
2 - دانشیار، دانشگاه علوم و پزشکی شیراز، مرکز تحقیقات پیوند و ترمیم اعضاء بیمارستان نمازی، شیراز. ایران
3 - دانشیار، دانشگاه علوم و پزشکی شیراز، مرکز تحقیقات پیوند و ترمیم اعضاء بیمارستان نمازی، شیراز. ایران.
4 - دانشگاه آزاد اسلامی، ,واحدزنجان. گروه میکروبیولوژی ، زنجان .ایران.
5 - ستاد، دانشگاه علوم پزشکی تبریز ، دانشکده علوم نوین، تبریز، ایران.
کلید واژه: سلول های بنیادی مزانشیمی, فاکتور نکروز دهنده تومورα, گیرنده کموکاینی CXCR4, الگوی بیان ژن,
چکیده مقاله :
مقدمه و هدف:مهاجرت و جایگزینی سلول در پیوند سلول مهم است و گیرنده CXCR4نقش کلیدی در این فرآیند دارد. سلول های بنیادی مزانشیمی (MSCs) قادر به بیان CXCR4نیستند اما تحریک آن ها با سایتوکاین های التهابی نظیر TNF-αمیزان بیان CXCR4را افزایش می دهد. در این مطالعه میزان تغییر بیان CXCR4در MSCsمغز استخوان انسان تحت تاثیر سایتوکاین التهابیTNF-α مورد بررسی قرار گرفت.روش کار:MSCsمورد مطالعه به دو گروه مورد و شاهد تقسیم شدند. گروه شاهد سلول هایتیمار نشده و گروه های مورد،سلول های تیمار شده با TNF-αبا غلظت های ng/ml1و10 در زمان های 2، 10، 24 و 48 ساعت بود. سپس mRNAی سلول ها استخراجو cDNAآن ساخته و میزان بیان ژن CXCR4با روش Real Time PCRبررسی گردید. ژن کنترل خانگی، بتا اکتین بود. نهایتاً تغییر بیان در سلول های تیمار شده و تیمار نشده با استفاده از روش لیواک ( -∆∆Ct2) تجزیه و تحلیل شد. یافته ها:در MSCsتیمار شده با ng/ml1 TNF-αدر زمانهای 2، 10، 24 و 48 ساعت میزان بیان به ترتیب:32، 64، 256 و 32 برابر و در تیمار با ng/ml10 در زمان های مشابه، به ترتیب: 16، 32، 512 و 32 برابر شد. بیشترین میزان بیان ژن CXCR4در مجاورت با TNF-αدر مدت زمان 24 ساعت و در غلظت ng/ml10مشاهده گردید.نتیجه گیری:به نظر می رسد هم عامل زمان و هم غلظت TNF-αدر بیان ژن CXCR4در MSCsمشتق از مغز استخوان انسان موثر است ولی زمان عامل مهمتری در تغییر بیان ژن CXCR4در این سلول هاست.
Inroduction and ObjectiveMigration and engraftment have a vital role in tissue regeneration and transplantation and CXCR4 is a known chemokin receptor in making and increasing homing and engraftment of cells into damaged tissue or wounds. CXCR4 expresses in low level on human MSCs, but we show here that CXCR4 expression by hBM MSCs up-regulates through exposure to TNF-α in a dose and time dependent manner.Materials and Methods:Cultured hBM MSCs were divided into 9 groups. One group was un treated and the others treated with 1 ng/ml and 10 ng/ml TNF- α in 2, 10, 24 and48 hours. Total mRNA was extracted and cDNA synthesized. Then rate of CXCR4 expression compared with housekeeping gene (β-actin) by Real Time PCR.Results: In untreated hMSCs CXCR4 expressed in low level. In treated hMSCs with 1ng/ml TNF-α in 2, 10, 24 and 48 hours CXCR4 expression was increased respectively 32, 64, 256,32 fold and with 10ng/ml increased 16, 32, 512, 32 fold. The highest level of CXCR4 gene expression found after treatment with 10ng/ml TNF-a in 24h was highly increased(2-∆∆Ct = 512 ).Conclusion:These finding indicate that in vitro control of both dose and time factors may be important in future-stem cell transplantation therapies
