جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما بووی‌جنیتالیوم از شیر گاو‌های مبتلا به ورم پستان بالینی با روش-های کشت و PCR

محورهای موضوعی : باکتری شناسی

زهرا معصومعلی نژاد ¹ (گروه میکروبیولوژی، واحد سیرجان، دانشگاه آزاد اسلامی، سیرجان)
سید علی پوربخش ² (گروه میکروبیولوژی، آزمایشگاه رفرانس مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، کرج)

تاریخ دریافت : 1396/02/28 تاریخ پذیرش : 1396/08/10 تاریخ انتشار : 1397/06/01

کلید واژه:

چکیده مقاله :

هدف: مایکوپلاسما بووی جنیتالیوم یکی از پاتوژن های ایجاد کننده ورم پستان در گاو های شیرده است. عوارض ناشی از این بیماری شامل کاهش شیر دهی، تغییر کیفیت شیر، تورم کارتیه ها، ورم مفاصل، عفونت دستگاه تنفسی، عفونت سیستم ادراری، عفونت گوش داخلی و سپتی سمی می باشد. هدف از این مطالعه، جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما بووی جنیتالیوم از شیر گاو های مبتلا به ورم پستان بالینی با روش های کشت و PCR بود. روش کار: در این مطالعه توصیفی در سال 1395، تعداد 156 نمونه ی شیر از گاوهای مشکوک به اورام پستان بالینی در گاوداری های صنعتی ایران اخذ گردید. نمونه ‌ها در محیط PPLO broth و PPLO agar کشت داده شدند. برای استخراج DNA از روش فنل کلروفرم استفاده گردید. نمونه‌ها از نظرحضور جنس مایکوپلاسما و گونه مایکوپلاسما بووی جنیتالیوم به روش PCR مورد آزمایش قرار گرفتند. به منظور تشخیص این میکروارگانیسم به روش مولکولی از پرایمرهای اختصاصی Mbg F و Mbg R استفاده گردید. نتایج بدست آمده: در روش کشت از تعداد 156 نمونه، 57 (37%) نمونه کلنی‌های تخم مرغ نیمرو شده مایکوپلاسما را از خود نشان دادند؛ در حالیکه در آزمون PCR از این تعداد نمونه، 62 (40%) نمونه از نظر حضور پرایمر جنس مایکوپلاسما مثبت گزارش گردید و در آزمون PCR اختصاصی گونه نیز، یک نمونه (2%) مثبت مایکوپلاسما بووی جنیتالیوم گزارش شد. نتیجه گیری: نتایج حاصل از این تحقیق، PCR را به عنوان یک روش سریع، با حساسیت و ویژگی بالا جهت تشخیص مایکوپلاسماها معرفی نمود.

منابع و مأخذ:

1. Bushnell, RB. (2005). Mycoplasma mastitis: a review of Transmission and Control. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice. 52: 153-160.


2. Cullor, J. S., Tyrer, J. W. (2002). Large animal internal medicine,3^th ed. Mosby Company. 1012-1032.


3. Fox, L. K., Kirk, J. H., Britten, A. (2005). Mycoplasma mastitis. Journal of veterinary medicine. B, Infectious diseases and veterinary public health. 52:153-160.


4. Ghadersohi, A., Hirst, R. G., Frobes, J., Coelen, R. G. (1999). Preliminary studies on the prevalence of Mycoplasma bovis mastitis in dairy cattle in Australia. Veterinary Microbiology 65:185-94.


5. Gonzalez, R. N., Wilson, D. J. (2003). Mycoplasma mastitis in dairy herds. Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice. 19:199-221.


6. Hale, H., Helmboldt, CF., Plastridge, W. N., Stula, E. F. (1962). Bovine mastitis caused by a Mycoplasma species. Cornell University College of Veterinary Medicine: 582-591.


7. Hirose, K., Kawasaki, Y., Kotani, K., Tanaka, A., Abiko, K., Ogawa, H. (2001). Detection of Mycoplasma Milk by PCR Analysis and Culture Method. Journal of Veterinary Medical Science 63: 691-693.


8. Htzel, H., Heller, M., Sachse, K. (1999). Enhancement of Mycoplasma bovis detection in milk samples by antigen capture prior to PCR. Molecular and Cellular Probes 13:175-178.


9. Jasper, D. E. (1981). Bovine mycoplasma mastitis. Veterinary Science and Comparative Medicine 25:121-57.

10.Kirk, J. H., DeGraves, F., Riddell, F., Tyler, J. W. (1992). Mycoplasma mastitis in Alabama. Alabama Veterinary Medical Association 3:29.

11.Kobayashi, H., Hirose, K., Worarach, A. (1998). In vitro amplification of the 16S rRNA genes from Mycoplasma bovirhinis, Mycoplasma alkalescens and Mycoplasma bovigenitalium by PCR. Journal of Veterinary Medical Science 60: 1299-1303.

12.Kojima, A., Takahashi, T., Kijima, M., Ogikubo, Y., Nishimura, M., Nishimura, S., et al. (1997). Detection of Mycoplasma in Avian Live Virus Vaccines by Polymerase Chain Reaction. International Association of Buddhist Studies. 25: 365-371.

13.Kumar, A., Garg, D. N. (1991). Isolation of mycoplasma F-38 from the milk of matitic cows. Veterinary Record. 128: 429 -441.

14.Nadeem, S., Rahman, S. U. (1996). Rapid Detection of Mycoplasma Bovis from Mastitis Milk Samples of Buffalo Using Polymerase Chain Reaction. Journal of Applied Microbiology. 80:505-10.

15.Pinho, L. G., Thompson, M., Carvalheira, J. (2013). Management practices associated with the bulk tank milk prevalence of Mycoplasma spp. in dairy herds in Northwestern Portugal. Preventive Veterinary Medicine 1; 108:21-7.

16.Roy, J. P., Francoz, D., Labrecque, O. (2008). Mastitis in a 7-week old calf caused by Mycoplasma bovigenitalium. The Veterinary Journal. 176:403-404.

17.Sharifzadeh, A., Hassani Tabatbaei, A., pourbakhsh, S. A. (2006). Study on frequency of Mycoplasma in Bulk Tank Milks of Industrial and Semi-Industrial Dairy Farms at Shahrekord by culture and PCR Methods. Iranian Journal of Veterinary Research. 395-402.

18.Thomas, C. B., Willeberg, P., Jasper, D. E. (1981). Case-control study of bovine mycoplasma mastitis in California Am. American journal of veterinary research. 42: 511-515.

19.Tully, J. G., Bove, J. M., Laigret, F., andwhitcomb, Rf. (1993). Revised taxonomy of the class Mollicutes: Proposed elevation of a monophyletic cluster of arthro associated Mollicutes to ordinal rank, with provision for familial rank to separate species with nonhelical morphology. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 43: 378-385.

20.Van den Bush, T. J., Rosenbusch, R. F. (2003). Characterization of the immune responseto Mycoplasma bovislung infection. Veterinary Immunology and Immunopathology. 15; 94:23-33.

21.Zaitoun, A. M. A. (2009). Molecular detection of mycoplasma infection in milk of clinically mastitic buffaloes. Assiut Veterinary Medical Journal 55: 191-205.