خالص سازی لاکتوفرین جداشده از شیرگاو بوسیله کرماتوگرافی تمایلی

محورهای موضوعی : میکروبیولوژی

محدثه فرهنگ ¹ , سعید زیبائی ²

1 - دانش آموخته فوق لیسانس ،دانشگاه پیام نور مشهد ،آموزگار 69، مشهد، ایران
2 - دانشیار بخش تحقیق و توسعه.موسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی شعبه شمال شرق

تاریخ دریافت : 1400/08/06 تاریخ پذیرش : 1400/12/01 تاریخ انتشار : 1401/07/01

کلید واژه: کروماتوگرافی تمایلی", لاکتوفرین", ",

چکیده مقاله :

لاکتوفرین یک پروتئین چند عملکردی با خاصیت ضدمیکروبی است که خواص متنوع و شگفت آوری داردو می‌تواند کاندید مناسبی جهت کاربرد‌های بالینی و تجاری باشد.در این بررسی جهت جداسازی لاکتوفرین ابتدا پروتئین‌های قسمت آب پنیری شیر با استفاده از روش کروماتوگرافی تعویض یونی توسط CM sephadex C-50 خالص و جهت تایید خالص سازی ، از آزمایش SDS-PAGE و نیز عدم ایجاد رنگ در حضور تترامتیل بنزدین استفاده شد. در ادامه خرگوش سفید نر نیوزلندی با µg/ml120 لاکتوفرین و با استفاده از ادجوانت کامل و ناقص فروند به مدت 6 هفته ، ایمن شد وپس از جدا سازی سرم با آزمایش های دات بلات و الایزا آنتی بادی اختصاصی تایید گردید. جهت خالص سازی آنتی بادی اختصاصی از روش رسوب دهی با سولفات آمونیوم 40 درصد استفاده گردیدکه پس از تایید به سفارز فعال شده با سیانوژن متصل گردید، قسمت آب پنیری آغوز گاو از ستون کروماتوگرافی تمایلی عبورداده شد.بمنظور خالص نمودن لاکتوفرین، برای تشکیل کمپلکسی از آنتی ژن آنتی بادی واکنش داده و در نهایت سایر ترکیباتی که اتصال نیافته‌اند شسته شده وخارج می گردند.خالص سازی لاکتوفرین تایید و غلظت آن با آزمایش برادفورد محاسبه گردید.نتایج تحقیق نشان داد که روش ایمن نمودن، جهت تولید آنتی بادی اختصاصی بر علیه لاکتوفرین روشی مناسب بوده و خالص سازی لاکتوفرین ازشیرگاو با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی دارای بازده 64 درصد می باشد.

منابع و مأخذ:

1. Aguila La O, A. Herrera Puerta,A C. Velázquez,WT.(2000). Isolation and structure-functional characterization of human colostral lactoferrin. Biotecnología Aplicada, 17: 177-182.
2. Baieli, M. F., Urtasun, N., Miranda, M. V., Cascone, O., & Wolman , F. J. (2014). Bovine lactoferrin purification from whey using Yellow HE-4R as the chromatographic affinity ligand. Journal of Separation Science, 37:484–487.
3. Broxmeyer, H E. Bicknell , D C . Gillis ,S. Harris,EL . Pelus,LM. Sledge Jr,G W.(1986). Lactoferrin: affinity purification from human milk and polymorphonuclear neutrophils using monoclonal antibody (II 2C) to human lactoferrin, development of an immunoradiometric assay using II 2C, and myelopoietic regulation and receptor-binding characteristics. Blood cells, 11: 429-439
4. Gobbetti , M. , Minervini , F. , and Rizzello , C.G.( 2007) . Bioactive peptides in dairy products . In: Handbook of Food Products Manufacturing Y.H. Hui (ed). John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, 2:489 – 517.
5. Hirsch,DB. Martínez Álvarez,LM. Urtasun, N. Baieli,MF. Lázaro- Martínez,JM. Glisoni,RJ. Miranda, MV. Cascone,O . Wolman,FJ.(2020). Lactoferrin purification and whey protein isolate recovery from cheese whey using chitosan mini-spheres . International Dairy Journal, 19:4764-4771
6. Kawi, K,Hagiwara,S.Anri,A.Nagahatg,H. (1999). Lactoferrin concentration in milk of bovine clinical mastitis. Veterinary research communications, 23: 391-398.
7. Mead, P.E.(1992). Cloning and sequencing of the cDNA for bovine lactoferrin: Doctor of Philosophy in Biochemistry Thesis, Massey University,4:59-61
8. Morrison, M. and P.Z. Allen.(1982). Lactoperoxidas: Identification and Isolation from Harderian and Lacrimal Glands. Science, 17:1626-1628
9. Park, Y.W.( 2009).Bioactive Components in Milk and Dairy Products: B lackwell Publishers, 2121 State Avenue, Ames, Iowa, USA .50014-8300
10. Raei, M., Rajabzadeh, G., Zibaei, S., Jafari, S.M., & Sani, A.M. (2015). Nano-encapsulation of isolated lactoferrin from camel milk by calcium alginate and evaluation of its release. International Journal of Biological Macromolecules, 79:669-673.
11. Rascón-Cruz,Q.. Espinoza-Sánchez,EA. Siqueiros-Cendón ,TS . Nakamura-Bencomo,SI. Sigifredo Arévalo-Gallegos,S. Iglesias-Figueroa,BF.(2021). Lactoferrin: A Glycoprotein Involved in Immunomodulation Anticancer, and Antimicrobial Processes. Molecules, 26:205
12. Urtasun, N., Baieli, M. F., Hirsch, D. B., Martínez-Ceron, M. C., Cascone, O., & Wolman, F. J. (2017).Lactoperoxidase purification from whey by using dye affinity chromatography. Food and Bioproducts Processing, 103: 58–65
13. Yoshida, S. (1991). Isolation of lactoperoxidase and lactoferrins from bovine milk acid whey by carboxymethyl cation exchange chromatography. Journal of Dairy Science, 74: 1439-1444.