جداسازی و شناسایی مولکولی باکتری‌های تجزیه‌کننده ی تیوسیانات از رسوبات دریاچه مهارلو استان فارس

محورهای موضوعی : آلودگی های محیط زیست (آب، خاک و هوا)

فهیمه مطلبی ¹ , فرشید کفیل زاده ²

1 - کارشناس ارشد، گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران.
2 - استاد، گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران*(مسوول مکاتبات)

تاریخ دریافت : 1396/05/25 تاریخ پذیرش : 1396/07/19 تاریخ انتشار : 1398/05/01

کلید واژه: باسیلوس اسفریکوس, میکروکوکوس لوتئوس, مهارلو, تیوسیانات, PCR,

چکیده مقاله :

زمینه و هدف:تیوسیانات ترکیبی یک کربنه معدنی وعضو مهمی از خانواده سیانید می‌باشد. تیوسیاناتاز منابع طبیعی و صنعتی مشتق شده ودر حجم وسیعی توسط صنایع استخراج فلزات و کک تولید می شود. این ترکیب سمی باعث بروز اثرات نامطلوبی در موجودات زنده می شود. با توجه به وجود این ترکیب سمی در دریاچه مهارلو، این پژوهش باهدف جداسازی و شناسایی باکتری های تجزیه کننده تیوسیانات از رسوبات دریاچه مهارلو صورت گرفت. روش بررسی:نمونه برداری از پنج ایستگاه و طی دو فصل، در تابستان 94 و بهار 95 انجام گردید. جداسازی باکتری های تجزیه کننده تیوسیانات در محیط M9 انجام شد.پس از شناسایی فیزیولوژی و بیوشیمیایی باکتری های تجزیه کننده تیوسیانات، از تست های حداقل غلظت بازدارندگی،سینتیک رشد و میزان تجزیه تیوسیانات توسط باکتری های مقاوم استفادهشد. درپایان، باکتری های مقاوم با روش PCRبراساس ژن S rRNA16، شناسایی شدند. یافته ها: نتایج نشان داد که 9 گونه باکتریایی توانایی تجزیه تیوسیانات در دریاچه مهارلو را داشتند. در این میان دو گونه باکتریایی Bacillus sphaericus و Micrococcus luteus دارای بالاترین پتانسیل درحذف و تجزیه تیوسیانات بوده و بالاترین مقاومت (50 گرم در لیتر) را نسبت به سایر باکتری‌ها نشان دادند. بیش ترین قدرت تجزیه کنندگی تیوسیانات، مربوط به B. sphaericus(66/66 درصد) وM. luteus (50 درصد) بود که به ترتیب با ارزش شباهت 97 و 92 درصد با سویه هایPlanococcus citreus strain NBRC 15849وBacillus aerius strain 24Kشباهت داشتند. بحث و نتیجه گیری: یافته های تحقیق حاضر نشان داد که دریاچه مهارلو دارای باکتری های قدرت مند در تجزیه تیوسیانات بوده به طوری که B. sphaericus تا 66/66 درصد قادر به تجزیه این ترکیب می باشد. با فراهم نمودن بستر مناسب جهت رشد این باکتری ها می توان از آن ها جهت سمیت زدایی و حذف تیوسیانات از آب های آلوده استفاده کرد

چکیده انگلیسی:

Background and Objective: Thiocyanate is an inorganic, one compound carbon and an important member of the cyanide family, which is derived from natural and industrial sources. It is largely produced by Metal and coke extraction industries. This toxic compound, causing undesirable effects in living organisms. Due to the presence of this toxic compound in the Maharloo Lake, this study was aimed to isolate and molecular identification of bacteria degrading thiocyanate from sediments of the Maharloo. Method: Sampling was performed during summer and spring of 2015 and 2016 form 5 stations. Isolation of Thiocyanate-degrading bacteria was conducted in the M9 medium. After identifying the physiological and biochemical thiocyanate degrading bacteria, MIC test, kinetics of growth and the rate of decomposition of thiocyanate were conducted. Finally, resistant bacteria were identified by PCR-based gene 16S rRNA. Findings: 9 species had the ability of thiocyanate degradation in Maharloo lake. Bacillus sphaericus and Micrococcus luteus showed the highest potential to remove thiocyanate and the highest resistance (50 grams per liter) than other bacteria. The Most thiocyanate biodegrationrate was related to B. sphaericus (66.66%) and M. luteus (50%) which showed 97% and 92% homology to Planococcus citreus strain NBRC 15849and Bacillus aerius strain 24K respectively. Discussion and Conclusion: The result of this study showed that the Maharloo lake contains powerful bacteria in thiocyanate biodegradation, so that B. sphaericus can break up to 66.66%. By providing a framework for the growth of these bacteria, they can be used to detoxify and remove thiocyanate from contaminated water.                          

منابع و مأخذ:

1. Muthukumaran, V., 2011. Isolation and characterisation of Thiocyanate degrading bacteria from sago effluent contaminated site. Thesis submitted to Bharathidasan University for the award of Doctor of Philosophy.


2. Kavitha, G., King, P., Sheshamma, G., Kalpana, P., Naidu, DA., 2013. Acute toxicity of thiocyanate using Danio rerio and microbial degradation of thiocyanate. International journal of enjineering research and science and technology.Vol. 2, pp.47-61.


3. Mohseni, M., Firuzyar, S., Nazari, O.L., 2014. Isolation and characterization of cyanide degrading Bacillus sp.MF3 under alkaline condition. Journal of  Molecular and Cellular Research (Iranian journal of biology), Vol. 28, pp.384-394. (In Persian)


4. Sorokin, D. Y., Tourova, T. P., Lysenko, A. M., Kuenen J. G., 2001. Microbialthiocyanate utilization under highly alkaline conditions. Applied and Environmental Microbiology, Vol. 67, No. 2, pp. 528-538.


5. Patil, Y, B., 2013. Development of a bioremediation technology for the removal of thiocyanate from aqueous industrial wastes using metabolically active microorganisms. In: Applied Bioremediation-Active and Passive Approaches (Editors Yogesh B Patil and Prakash Rao), Intech Open Science Publisher.


6. Gould, W, D., King, M., Mohapatra, B, R., Cameron, R, A., Kapoor, A., Koren, D, W., 2012. A critical reviewon destruction of thiocyanate in mining effluents. Minerals Engineering, vol. 34, pp. 38-47.


7. Lee, C., Kim, J., Chang, J., Hwang, S., 2003. Isolation and identification of thiocyanate utilizing chemolithotrophs from gold mine soils. Biodegradation, Vol. 14, pp. 183-188.


8. Patil, Y. B., 2011. Utilization ofthiocyanate (SCN) by a metabolically active bacterial consortium as the sole source of nitrogen. International Journal of Chemical, Environmental & Pharmaceutical Research, Vol. 2, No.1, pp. 44-48.


9. Kafilzadeh, F., Khosrobak, A., Jamali, H., 2015. Degrading Bacteria from the Soil around Oil Company of Andimeshk and Investigation of Their Growth Kinetics. Polycyclic Aromatic Compounds, Vol. 36, pp.58-71.


10. Sorokin, D, Y., Kuenen, J, G., Muyzer, G., 2011. The microbial sulfur cycle at extremely haloalkaline conditions of soda lakes. Frontiers in microbiology, Vol. 2, pp. 1-16.


11. Combarros, R, G., Collado, S., Laca, A., Díaz, M., 2016. Understanding the simultaneous biodegradation of thiocyanate and salicylic acid by Paracoccus thiocyanatus and Pseudomonas putida. International Journal of Environmental Science and Technology, Vol. 13, pp. 649-662.


12. Khamar, Z., Makhdoumi-Kakhki, A., Gharaie, M, M., 2015. Remediation of cyanide from the gold mine tailing pond by a novel bacterial co-culture, International Biodeterioration & Biodegradation, Vol. 99, pp. 123-128.


13. Bouari, A,-R., Begum, S, A., Egiebor, N, O., 2013. Bioremediation of Complex Cyanide Contaminated Wastewater using Pseudomonas Fluorescens Pf-5. In International Journal of Engineering Research and Technology. ESRSA Publications. Vol. 2, pp. 1485-1493.


14. 14-Kafilzadeh, F., Aram, M., Sharifi, A., Naghmachi. M.,2012. Isolation and survey growth kinetics of mercury resistant bacteria in Lake Maharloo. Iran J Med Microbiol.Vol. 6, pp. 28-38. (In Persian)


15. El-Sheekh,  M, M.,  Hamouda,  R, A.,  Nizam  A, A., 2013. Biodegradation  of  crude  oil  by  Scenedesmus  obliquus  and  Chlorella  vulgaris  growing  under  heterotrophic  conditions.  International  Biodeterioration & Biodegradation , Vol. 82, pp. 67-72.


16. SouzaFagundes, EM., Rosa, L, H., Gomes, N., Santos, M, H., Pimentel, P,F., 2004. Thiocyanate degradation by pure and mixed cultures of microorganisms, Brazilian Journal of Microbiology; Vol. 35, No. 4, pp. 333-336.


17. Patil, Y. B., 2006.Isolation of thiocyanate degrading chemoheterotrophic bacterial consortium, Nature Environment and Pollution Technology, Vol.5,pp. 135-138.


18. Mekuto, L., Ntwampe, S, K, O., Kena, M., Golela, M, T., Amodu, O, S., 2016. Free cyanide and thiocyanate biodegradation by Pseudomonas aeruginosa STK 03 capableof heterotrophic nitrification under alkaline conditions, 3 Biotech, vol. 6,pp. 1-7.


19. Mekuto, L., Jackson, V, A., Ntwampe, S, K, O., 2014. Biodegradation of free cyanide using Bacillus sp. consortium dominated by Bacillus safensis, Lichenformis and Tequilensis strains: A bioprocess supported solely with whey. Journal of Bioremediation & Biodegradation, http://hdl.handle.net/11189/2038


20. Patil, Y. B., 2008b. Thiocyanate degradation by pure and mixed bacterial cultures, Bioinfolet, Vol. 5, No. 3, pp. 308-309.


21. 21.   Mohseni, M., Firuzyar,  S., 2014. Biodegradation of cyanide using Serratia sp. isolated from contaminated soil of gold mine in Takab. Biological Journal of Microorganism,Vol. 3, No.10, pp.75-86.(In Persian)


22. Akhavan S. A., Ebrahimi, A.F., Minaei, T.D., 2009.Investigation of Toluene Biodegradation by Bacillus Consortium in Toluene Contaminated Soils. Journal of Microbiology, Vol. 1, No. 4, pp. 7-19. (In Persian)


23. Igeno, M, I., Orovengua, E., Guijo, M, I., Merchán, F., Quesada, A., Blasco, R., 2007. Biodegradation of cyanide-containing wastes by Pseudomonas pseudoalcaligenes CECT5344. Communicating Current Research and Educational Topics and Trends in Applied Microbiology,Vol. 1, pp. 100-107.