شناسایی مولکولی وارزیابی دز کشنده جدایه های سم زایی کلستریدیوم پرفرینجنز تیپ C موجود در گنجینه میکروبی موسسه رازی

محورهای موضوعی : پاتوبیولوژی مقایسه ای

لیدا عبدالمحمدی خیاو ¹ (بخش تحقیق و تولید واکسن های باکتریایی بی هوازی، آزمایشگاه تحقیقاتی کلستریدیا، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان ترویج آموزش توسعه کشاورزی، تهران، ایران)
علیرضا پردیس ² (بخش تحقیق و تولید واکسن های باکتریایی بی هوازی، آزمایشگاه تحقیقاتی کلستریدیا، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان ترویج آموزش توسعه کشاورزی، تهران، ایران)
علی حق روستا ³ (بخش تحقیق و تولید واکسن های باکتریایی بی هوازی، آزمایشگاه تحقیقاتی کلستریدیا، موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، سازمان ترویج آموزش توسعه کشاورزی، تهران، ایران)

تاریخ دریافت : 1399/04/27 تاریخ پذیرش : 1399/04/27 تاریخ انتشار : 1398/09/01

کلید واژه: کلستریدیوم پرفرینجنز, PCR, MLD, potency, واکسن آناکالچر تتراوالان,

چکیده مقاله :

کلستریدیوم پرفرینجنز عامل بیماری های متعدد از جمله انتروتوکسمی یا پرخوری یا قلوه نرمی می باشد . این بیماری با تغییر رژیم غذایی، تکثیر باکتری و تولید مقادیر زیاد توکسین بروز می نماید. بنابراین تشخیص توکسین در محتویات روده جهت تشخیص این بیماری استفاده می شود. به منظور پیشگیری از انتروتوکسمی واکسیناسیون به موقع ضروری می باشد. هدف از این مطالعه انتخاب توکسیژنیک ترین جدایه توکسیژنیک کلستریدیوم پرفرینجنزتیپ C به منظور استفاده در تولید واکسن می باشد. در این تحقیق، ۲۱ جدایه تیپ C مورد آزمایشات میکروبیولوژی و بیوشیمیایی قرار گرفته، سپس نمونه هایی که به روش روتین باکتریولوژیک تعیین هویت گردیدند، توسط آزمون PCR تأیید شدند. نهایتا توکسیژنیک ترین جدایه به وسیله MLD انتخاب گشته و واکسن آناکالچر تتراوالان انتروتوکسمی از نمونه سویه واکسینال و این جدایه تهیه گردید . واکسن آزمایشی برای ۴۵ روز سردخانه گذاری شده سپس آزمون پتنسی بر روی نمونه ها انجام پذیرفت . نتایج این بررسی نشان داد که میزان آنتی توکسین بتا جدایه موسسه رازی چهار برابر ضعیف تر از نمونه واکسن تهیه شده از سوش واکسینال می باشد.

چکیده انگلیسی:

کلستریدیوم پرفرینجنز عامل بیماری های متعدد از جمله انتروتوکسمی یا پرخوری یا قلوه نرمی می باشد . این بیماری با تغییر رژیم غذایی، تکثیر باکتری و تولید مقادیر زیاد توکسین بروز می نماید. بنابراین تشخیص توکسین در محتویات روده  جهت تشخیص این بیماری استفاده می شود. به منظور پیشگیری از انتروتوکسمی واکسیناسیون به موقع ضروری می باشد. هدف از این مطالعه انتخاب توکسیژنیک ترین جدایه توکسیژنیک کلستریدیوم پرفرینجنزتیپ C به منظور استفاده در تولید واکسن می باشد. در این تحقیق، ۲۱ جدایه تیپ C مورد آزمایشات میکروبیولوژی و بیوشیمیایی قرار گرفته، سپس نمونه هایی که به روش روتین باکتریولوژیک تعیین هویت گردیدند، توسط آزمون PCR تأیید شدند. نهایتا توکسیژنیک ترین جدایه به وسیله MLD  انتخاب گشته و واکسن آناکالچر تتراوالان انتروتوکسمی از نمونه سویه واکسینال و این جدایه تهیه گردید . واکسن آزمایشی برای ۴۵ روز سردخانه گذاری شده سپس آزمون پتنسی بر روی نمونه ها انجام پذیرفت . نتایج این بررسی نشان داد که میزان آنتی توکسین  بتا جدایه موسسه رازی چهار برابر ضعیف تر از نمونه واکسن تهیه شده از سوش واکسینال می باشد.

منابع و مأخذ:

1. Albini, S., Brodard, I., Jaussi, A., Wollschlaeger, N., Frey, J., Miserez, R., Abril, C. (2008): Real-time multiplex PCR assays for reliable detection of Clostridium perfringens toxin genes in animal isolates. Vet microbiol, 127: 179-185.

2- Ardehali, M., Moosawi, M., Avazpoor, J. (1988): Isolation, typing and rapid diagnosis of pathogenic clostridia from infected animals in Iran. Arch. Inst. Razi. 38, 39: 35-42.

3- Ardehali, M., Moosawi, M.,  Pilehchian, R. (1994): Isolation of toxigenic strains of Clostridium perfringens from the soil of farms in Iran. Arch.Inst.Razi. 44,45: 95-100.

4- Aschfalk, A., Younan, M., Drochner, W., Müller, W. (2002): The distribution and frequency of Clostridium perfringens toxinotypes in healthy sheep in Benin, West Africa. Tropical animal health and production. 34: 289-293.

5- Baharsefat, M., Ardehali, M., Amjadi, AR., Ahourai, P., Darakhshan, H., Dowran, H. (1974): First report on infectious necrotic enteritis in piglets in Iran. Arch Inst Razi. 26:31–8.

6- Baums, C.G., Schotte, U., Amtsberg, G., Goethe R. (2004): Diagnostic multiplex PCR for toxin genotyping of Clostridium perfringens isolates. Vet Microbiol. 100: 11-16.

7- Deprez, P. (2015): Clostridium perfringens infections–a diagnostic challenge. Veterinary Record, 177: 388-389.

8- Elsify, A., Tarabess, R., Nayel, M., Salama, A., Allaam, M.,  Hassan, H. , Zaghawa, A., Elballal, S. (2016): Bacteriological and molecular studies on Clostridium perfringens isolated from sheep in three Egyptian provinces. African Journal of Microbiology Research, 10: 725-732.

9- European Pharmacopoeia. Clostridium perfringens Vaccines for Veterinary use. (2017). 363. 7. Huang, X., Wang, Y., Xing, Z., Du, K. (2016): Emission factors of air pollutants from CNG-gasoline bi-fuel vehicles: Part II. CO, HC and NOx. Sci. Total Environ. 565:698-705.

10- Ghazi, F., Younan, M., Ardehalli, M., Muller, W. (1997): Differentiation of proteinase (minor toxin lambda) in Clostridium perfringens strains from sheep and goats in Iran. Dtsch Tierarztl Wochenschr. 104(10):443–5. [PubMed: 9394541].

 

11- Gokce, H.I., Genc, O., Sozmen, M., Gokce, G. (2007): Determination of Clostridium perfringens toxin-types in sheep with suspected enterotoxemia in Kars province, Turkey. Turk. J. Vet. Anim. 31(5): 355-360.

12- Hadimli, H.H., Erganis, O., Sayin, Z., Aras. Z. (2012): Toxinotyping of Clostridium perfringens isolates by ELISA and PCR from lambs suspected of enterotoxemia. Turk. J. Vet. Anim Sci. 36(4): 409-415.

13- Jansen, B.C. (1961): The beta toxin of Clostridium welchii type B, Wilsdon , in relation to the production of a vaccine against lamb dysentery. Onderstepoort. J.Vet.Res.28: 495-549.

14- Mac Faddin, J.F. (2000): Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria, Lippincott Williams& Wilkins, Baltimore.

15- Mainil, J. (2006): Genus Clostridium-Clostridia in medical, veterinary and food microbiology: Diagnosis and typing. Control of infectious diseases, European Communities, Printed in Luxembourg.

16- Nillo. L. (1963): Bovine enterotoxemia II. Experimental reproduction of the disease. The Canadian Veterinary Journal. 4: 288-298.

17- Sakurai, J., Nagahama, M. (2006): Clostridium perfringens beta-toxin: characterization and action. Toxin Rev. 25: 89–108.

18- Sayeed, S., Li, J., McClane B.A. (2010): Characterization of virulence plasmid diversity among Clostridium perfringens type B isolates. Infect immune. 78(1): 495-504.

19- Songer, J.G., Meer, R. R. (1996): Genotyping of Clostridium perfringens by polymerase chain reaction is a useful adjunct to diagnosis of Clostridial enteric disease in animals. Anaerobe. 2: 197-203

20- Vidal, J.E., McClane, B.A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. (2008): Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon. Infect. Immun. 76: 4396–4404.