بررسی فراوانی ژن های lepA وralF در لژیونلا نموفیلاهای جدا شده از افراد مبتلا به عفونت های تنفسی

محورهای موضوعی : میکروب شناسی پزشکی

عباس دوستی ¹ (دانشیار، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهرکرد)
فاطمه علایی ² (کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد)
فروزان خدری ³ (کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد)

تاریخ دریافت : 1393/01/24 تاریخ پذیرش : 1393/05/04 تاریخ انتشار : 1394/06/10

کلید واژه: برونکوآلوئولار, لژیونلا نموفیلا, ژن ralF, ژن lepA,

چکیده مقاله :

سابقه و هدف: لژیونلا نموفیلا باکتری گرم منفی، هوازی و ایجاد کننده بیماری لژیونر می باشد. ژن های ralF و lepA از اجزای سیستم ترشحی تیپ IV هستند و برای تکثیر درون سلولی و بقا ضروری می باشند. هدف از این مطالعه جداسازی لژیونلا نموفیلا از نمونه های برونکوآلوئولار و بررسی فراوانی ژن های ralF و lepA می باشد. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی بر روی 100 نمونه برونکوآلوئولار از بیماران مبتلا به عفونت تنفسی در چهارمحال و بختیاری انجام شد. در ابتدا جداسازی لژیونلا نموفیلا با استفاده از محیط کشت اختصاصی BCYE صورت گرفت. سپس تمامی نمونه‌ها با روش PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن 16S rRNA لژیونلا نموفیلا مورد بررسی قرار گرفتند. همچنین فراوانی ژن های ralF و lepA در نمونه ها، با روش PCR ارزیابی گردید. یافته ها: از بین 100 نمونه کشت داده شده، 9% از نظر لژیونلا نموفیلا مثبت تشخیص داده شدند. همچنین از بین 100 نمونه، 12 مورد آلوده به این باکتری با استفاده از روش مولکولی شناسایی گردید. فراوانی ژن های ralF و lepA در نمونه ها به ترتیب 41.66 و 25 درصد تعیین شد. 8.33 درصد از نمونه ها نیز به طور هم زمان هر دو ژن را دارا بودند. نتیجه‌گیری: دو ژن ralF و lepA در لژیونلا نموفیلا های جدا شده از فراوانی نسبتاً بالایی برخوردارند. با استفاده از تکنیک PCR می توان عفونت ایجاد شده توسط لژیونلا نموفیلا را در نمونه های تازه بدون نیاز به کشت تعیین نمود. همچنین روشPCR نسبت به کشت از دقت و سرعت بیشتری برای تشخیص لژیونلا نموفیلا در نمونه‌های برونکوآلوئولار برخوردار می باشد.

چکیده انگلیسی:

Background & Objectives: Legionella pneumophila is an aerobic gram-negative bacterium and etiology of legionnaires disease. The ralF and lepA genes belong to the members of type IV secretion system are essential for intracellular growth and survival of bacteria. The aim of this study was to isolate L. pneumophila from bronchoalveolar lavage (BAL) fluid samples and the frequency of lepA and ralF genes. Materials & Methods: This cross-sectional study was carried out on100 BAL fluid samples collected from the patients suffering of respiratory infections who visited Charmahal-O-Bakhtiri health centers. Isolation of L. pneumophila was performed using a specific medium (BCYE). Then, all the samples were evaluated using PCR and specific primers designed for 16S rRNA gene. Furthermore, the frequency of lepA and ralF genes was determined using PCR method. Results: Overall, 9% of the total 100 samples were infected to L. pneumophila. Furthermore, molecular tests showed that 12 cases out of these samples were positive for this bacterium. The frequency of the ralF and lepA genes in these samples were measured 41.66 and 25%, respectively. In addition, 8.33% of the samples carried both genes. Conclusion: Our studies indicated high frequency of the ralF and lepA genes in L. pneumophila isolated from this area. It is possible to determine L. pneumophila in fresh samples based on PCR technique without using in media. Furthermore, PCR technique is faster and more accurate for detection of L. pneumophila in bronchoalveolar samples in comparison to culture method.