تشخیص سریع و آسان لیستریا منوسیتوژنز در نمونه های ادرار زنان به کمک واکنش زنجیره ای پلی مراز و پروب فلئورسنتی ژن hly A

محورهای موضوعی : میکروب شناسی تشخیصی

محمد سبحانی لاری ¹ (کارشناس ارشد، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، دانشکده علوم پایه، گروه میکروب شناسی)
نادر شاهرخی ² (استادیار، انستیتو پاستور ایران، بخش بیولوژی مولکولی، گروه میکروب شناسی)
محمد کارگر ³ (دانشیار، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، دانشکده علوم پایه، گروه میکروب شناسی)

تاریخ دریافت : 1392/12/23 تاریخ پذیرش : 1393/03/11 تاریخ انتشار : 1393/07/09

کلید واژه: لیستریا, ادرار, پروب فلوئورسنتی,

چکیده مقاله :

سابقه و هدف: لیستریا منوسیتوژنز یکی از عوامل ایجاد کننده عفونت بدون علامت دستگاه ادراری-تناسلی است که می تواند موجب عفونت نوزادان و مرگ جنین شود. با توجه به چالش های ناشی از کشت این باکتری، این پژوهش با هدف تشخیص لیستریا در ادرار به کمک واکنش زنجیره ای پلی مراز با استفاده از پروب فلوئورسنتی انجام شد. مواد و روش ها: این پژوهش به صورت مقطعی-توصیفی بر روی 100 نمونه ادرار بیماران مراجعه کننده به مرکز تخصصی زنان و زایمان در شهرهای لارستان و جهرم انجام شد. ابتدا با استفاده از سویه استاندارد حساسیت تکنیک مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس پروب ژن hly‌A طراحی و با استفاده از واکنش زنجیره ای پلی مراز، میزان فلوئورسنت با دستگاه ردیاب فلوئورسنت تعیین گردید. یافته ها: با استفاده از سنجش FLASH-PCR محدوده ردیابی 5 تا 10 ژن باکتری در هر واکنش تعیین شد. از مجموع 100 نمونه بالینی، در 30 مورد (30%) با استفاده از پروب فلئورسنتی ژن hly‌A لیستریا شناسایی گردید. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که برای شناسایی مولکولی لیستریا، پروب فلورسنتی سرعت، حساسیت و ویژگی بالایی دارد و می تواند جایگزین مناسبی برای الکتروفورز باشد. از این رو با توجه به دقت و غیر تهاجمی بودن این روش، انجام مطالعات گسترده تر به منظور پایش لیستریا در نمونه های بالینی پیشنهاد می گردد.

چکیده انگلیسی:

Background & Objectives: Listeria monocytogenes is one of the etiologic causes of asymptomatic infection that can cause urogenital tract infection in infants and fetal death. Given the challenges posed by growing the bacteria, this study aimed to detect Listeria in urine using polymerase chain reaction and fluorescent probes. Materials & Methods: This cross-sectional study was carried out on 100 urine samples obtained from the patients who were referred to a specialized center for women in Jahrom and Larestan. The sensitivity of the technique was evaluated using a standard strain. Then hlyA gene probes were designed using the polymerase chain reaction, and fluorescence level was determined by fluorescent probes. Results: Based on FLASH-PCR assay between 5 to 10 genes were detected in each reaction. Using fluorescent probes for L. monocytogenes hlyA gene overall, 30 out of 100 clinical samples (30%) were infected to this bacterium. Conclusion: The results showed that fluorescent probe increase speed, sensitivity and specificity of the molecular identification of Listeria and therefore it can be a suitable alternative to electrophoresis. Thus, with respect to the accuracy of this non-invasive method it is possible to monitor larger amounts of samples suspected to L. monocytogenes infections.