استفاده از Multiplex PCR جهت تشخیص کوکسی های گرم مثبت ایجاد کننده بیماری در مزارع پرورشی قزل آلای رنگین کمان(Oncorhynchus mykiss), ایلام
محورهای موضوعی : بیماریهای دامهای بزرگ
سیده سعیده حیدری نژاد
1
(دانشکده دامپزشکی شهید چمران اهواز)
کلید واژه: Streptococcus iniae, Multiplex PCR, قزل آلای رنگین کمان, Lactococcus garvieae, کوکسی گرم مثبت,
چکیده مقاله :
در پنج سال اخیر بیماری مشکوک به streptococosisدر مزارع پرورشی قزل آلای رنگین کمان شهر ایلام به صورت اپیدمی شایع شد. در مطالعه حاضر، 60 قطعه ماهی با علائم بالینی نظیر بی حالی، شنای نامنظم، تیرگی پوست و اگزوفتالمی، از مزارع پرورش قزل آلای رنگین کمان ایلام(جنوب غربی ایران) جمع آوری شد. جهت تشخیص عامل اصلی بیماری، نمونه‌هایی از کبد، کلیه و طحال برداشته و در محیط کشت آگار خوندار ( blood agar) در دمای 22 درجه سانتی‌گراد به مدت 24 ساعت انکوبه شد. بر اساس تست های بیوشیمیایی نمونه های جدا شده Lactococcus garvieae شناسایی شدند جهت تایید ایزوله‌ها از multiplex PCR و ژن‌های lctO ، 16S rRNA و 16S- 23S rRNA که به ترتیب جهت شناسایی Lactococcus garvieae, Streptococcus iniae و Streptococcus dysgalactiae به کار می رود استفاده شد. در این مطالعه برای غالب ایزوله‌ها باندی به طول bp 1100 تشکیل شد که مربوط به باکتری L. garvieae می باشد. بر این اساس می توان نتیجه گرفت که عامل اصلی بروز سپتی سمی L. garvieaeبوده است. در نتیجه Multiplex PCR روش تشخیصی قطعی جهت شناسایی سریع باکتری به ویژه در عفونت های ترکیبی می باشد.
In the past five years, The disease that suspected streptococosis was epidemic in rainbow trout farms in Ilam, In this study, 60 rainbow trout with Clinical signs such as lethargie, erratic swimming, skin darkness and exophthalmia, were collected from rainbow trout farms in Ilam in southwest of Iran in January 2010, for detection agent of disease samples were collected from spleen, kidney and liver of fish then cultured on blood agar and incubated at 22 ºC for 24 h. Based on biochemical tests, Lactococcus garvieae was detected and isolates were confirmed as L. garvieae by using a m-PCR targeting lctO-gene, 16S rRNA and 16S- 23S rRNA Internal Transcribed Spacer region(ITS) sequencing that detect L .garvieae, Streptococcus iniae and S. dysgalactiae,. In the present study we observed a single band of 1100 bp for L. garvieae for most of isolates and concluded that the main agent of septicemia was L. garvieae. In conclusion, Multiplex PCR was definite method for rapid detection of L. garvieae in mixed infection in rainbow trout.
_||_
