Examining the serum pattern of Coxiella burnetii in the clinical samples of employees Slaughterhouses in the cities of Isfahan

Subject Areas : microbiology

Fahimeh Nourbakhsh ¹ , Hossein Chahardahmasoumi ² , Mohammad Reza Saebi ³

1 - Doctor of toxicology, expert of vice president of food and drug, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan-Iran.
2 - Doctor of veterinary medicine, expert of deputy of food and drug, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan-Iran.
3 - PhD student of food hygiene, Faculty of veterinary medicine, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord, Iran

Received: 2024-08-29 Accepted : 2024-11-16 Published : 2024-11-16

Keywords: Coxiella burnetii, Q fever, Isfahan slaughterhouses,

Abstract :

Background: Q fever is a newly emerging disease in many countries including Iran. Determining the prevalence of contamination and risk factors makes the importance of infection visible to health officials and the necessary facilities and equipment for control and prevention, as well as research priorities.

 

Material methods: In this study, which was conducted for one year during 1403 in the slaughterhouses of Isfahan city, 100 serum samples were isolated from the employees of the slaughterhouses in Isfahan, and their information was prepared and adjusted. The results of this study have been presented after analysis.

 

Results: 100 samples isolated from the workers of the studied slaughterhouses, 33% of the cases were reported as positive. In order to finally confirm the presence of bacteria in these 33% positive samples, a molecular method was used. Among the isolated positive cases, 12 cases were employees of the live livestock department, 20 cases were employees of the slaughterhouse department and 1 case were employees of the administrative department. In the molecular method, the genes of the OMP group were isolated. Among these, the genes of 10 of the analyzed samples had the COM₁ gene.

 

Conclusion: The results of the studies show that the one-step polymerase chain reaction method is not sensitive enough to detect Coxiella burnetii and it is suggested to use the nested polymerase chain reaction method. This method has high speed, accuracy, specificity and sensitivity compared to classical methods.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

References:


1. Doosti A, Arshi A, Sadeghi M, et al. (2012). Investigation of Coxiella burnetii in Iranian Camels. Journal of Medical Microbiology. 6: 56-62.

2. Dupuis G, Petite J, Peter O, et al. An important outbreak of human Q fever in a Swiss Alpine Valley. International Journal of Epidemiology, 1987; 16: 282-287.

3. Fretz R, Schaeren W, Tanner M, et al. Screening of various foodstuffs for occurrence of
Coxiella burnetii in Switzerland. International Journal of Food Microbiology, 2007; 116: 414–418.

4. Guatteo R, Beaudeau F, Shedding routs of Coxiella burnetii in dairy Cows: implications for detection and control. Journal of Veterinary Research, 2006; 37: 827-833.

5. Gyuranecz M, Hornok S, Viktor J, et al. Prevalence of Coxiella burnetii in Hungary: Screening of Dairy Cows, Sheep, Commercial Milk Samples, and Ticks. Vector-borne and Zoonotic Diseases, 2012; 12: 650-653.

6. Hirai A, Nakama A, Chiba T, et al. Development of a method for detecting Coxiella burnetii in Cheese samples. Journal of Veterinary Medical Science, 2011; 74: 175-180.
Hendrik J R, Coxiella burnetii in pregnant goats. GVO drukkers&vormgevers. 2013; 1: 10-21.

7. Howe GB, Loveless BM, Nonwood D, Craw P, et al. Real-time PCR for the early detection and Quantification of Coxiella burnetii as an alternative to the murine bioassay. Journals Molecular and Cellular probes 2009; 23: 127-31.

8. James H. Steele (Edit.) CRC Handbook Series in Zoonoses, Bacterial, Rickettsial and Mycotic Diseases, 2nd edition, volume 2, pp. 507-528.

9. Khalili M, Sakhaee E. An update on a serologic survey of Q fever in domestic animals in Iran. American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 2009; 80(6): 1031-2.

10. Khalili M, Sakhaee E, Golchin M, Q fever serology in febrile patients in Southeast Iran.
Transactions of the Royal society of Tropical Medicine & Hygiene. 2010; 104(9): 623-4.

11. Kim S, Kim E, Lafferty C, et al. Coxiella burnetii in bulk tank milk samples, United States. Emerging Infectious Diseases, 2005; 11: 619-621.

12. Madariaga MG, Rezai K, Trenholme GM, et al. Q fever: a biological weapon in your backyard. 2003; 3(11): 709-21.

13. Maurin M, Q fever. Clinical Microbiology Revoiution, 1999; 12: 518-553.18-2/2.

14. Motohiko O, Agus S, Kozue S, et al. Evaluation of PCR and Nested PCR assays currently used for detection of Coxiella burnetii in Japan. National Institute of Infectious Diseases, 2004; 35: 852-855.

15. Niemczuk K, Szymańska M. Epidemiology, Zoonotic Aspect and Current Epidemiological Situation of Q fever in Poland. National Veterinary Research Institute, 2012; 51: 380-392.

16. Rodolakis A. Q fever, state of: Epidemiology, diagnosis and prophylaxis.Journal Small ruminant Research, 2006; 62(1): 121-4.

17. Rudolf R, Rebecca M, Description of a Coxiella burnetii abortion outbreak in a Dairy Goat herd, and associated serology, PCR and genotyping results. Research in Veterinary Science, 2012; 93:1217–1224.

18. Trinidad A, Dookeran S, Stewart-Johnson A. Frequency of seropositivity for Coxiella burnetii immunoglobulins in livestock and abattoir workers in Trinidad. J New Microbiol 2011; 34(2): 219-24.

19. Abebe A. Prevalence of Q fever infection in the Addis Ababa abattoir. Ethiop Med J 1990; 28(3): 119-22.

20. Cetinkaya B, Kalender H, Ertas HB, Muz A, Arslan N, Ongor H, Gurçay M. Seroprevalence of coxiellosis in cattle, sheep and people in the east of Turkey. Vet Rec 2000; 146(5): 131-6.

21. Asadi J, Khalili M, Kafi M, Ansari-Lari M, Hosseini SM. Risk factors of Q fever in sheep and goat flocks with history of abortion. Comp Clin Pathol 2012; DOI 10.1007/s 00580-012-1661-9.

22. Khalili M, Sakhaee E. An update on a serologic survey of Q fever in domestic animals in Iran. Am J Trop Med Hyg 2009; 80(6): 1031–2.

23. Khalili M, Shahabi-Nejad N, Golchin M. Q fever serology in febrile patients in southeast Iran. Trans R Soc Trop Med Hyg 2010; 104(9): 623-4.

24. Esmaieli S, Gooya MM, Shirzadi MR, Esfandiari B, Amini FB, Behzadi MY, et al. Seroepidemiological Survey of tularemia among different groups in wetern Iran. Int J Infect Dis 2014; 18: 27-31.

25. Kirkan S, Kaya O, Tekbiyik S, Parin U. Detection of Coxiella burnetii in cattle by PCR. Turk J Vet Anim Sci 2008; 32(3): 215-20.

Full-Text:



رهیاف های نوین در علوم سلولی و مولکولی JNACMS  دوره 2 شماره 2 تابستان 1403 Journal homepage: https://sanad.iau.ir/journal/nacms

 

بررسی الگوی سرمی کوکسیلا بورنتی در نمونه های بالینی کارکنان کشتارگاه­های شهرستان­های اصفهان

فهیمه نوربخش*1، حسین چهارده معصومی2، محمدرضا صائبی3

1.دکتری تخصصی سم شناسی، کارشناس معاونت غذا و دارو، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان-ایران.

2.دکتری دامپزشکی، کارشناس معاونت غذا و دارو، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان-ایران.

3.دانشجوی دکتری تخصصی بهداشت مواد غذایی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهرکرد، شهرکرد-ایران.

 

 

اطلاعات مقاله		چکیده
تاریخچه مقاله: دریافت: 08/06/1403 پذیرش: 22/08/1403 چاپ:  تابستان 1403 DOI:		تب کیو به عنوان یک بیماری نو پدید در بسیاري از کشورها از جمله ایران مطرح است. تعیین میزان شیوع آلودگی و فاکتورهاي خطر باعث می شود که اهمیت عفونت براي مسئولین بهداشتی نمایان گردد. و امکانات و تجهیزات لازم جهت کنترل و پیش گیري و نیز، اولویت­هاي پژوهشی مشخص شود. در این بررسی که به مدت یک سال از شهریور ماه سال 1402تا شهریور ماه 1403 در کشتارگاه­های شهرستان اصفهان انجام شد، 100 نمونه سرمی از کارکنان کشتارگاه­های سطح اصفهان جداسازی و اطلاعات آن تهیه و تنظیم گردید. نتایج حاصل از این بررسی پس از آنالیز ارئه گردیده است. 100 نمونه جداسازی شده از کارکنان کشتارگاه های مورد مطالعه، 33 درصد از موارد بعنوان مثبت گزارش شدند. جهت تایید نهایی از حضور باکتری در این 33 درصد نمونه مورد مطالعه مثبت، از روش مولکولی استفاده گردید. از بین موارد مثبت جداسازی شده، 12 مورد کارکنان بخش دام­های زنده، 20 مورد کارکنان بخش کشتارگاه و 1 مورد کارکنان بخش اداری بودند. در روش مولکولی ژن های گروه OMP جداسازی گردیدند. در این میان ژن­های گروه 10 مورد از نمونه های مورد بررسی واجد ژن COM1 بودند. نتایج مطالعات نشان می دهد که روش واکنش زنجیره ي پلی مراز تک مرحله اي جهت تشخیص کوکسیلا بورنتی داراي حساسیت کافی نمی­باشد و پیشنهاد می شود که از روش واکنش زنجیره ي پلی مراز آشیانه اي استفاده گردد. این روش نسبت به روش­هاي کلاسیک از سرعت، دقت، اختصاصیت و حساسیت بالایی برخوردار است.
کلمات کلیدی: کوکسیلا بورنتی، تب کیو، کشتارگاه های اصفهان
* نویسنده مسئول: Email    [e-mail]

 

مقدمه

کوکسیلا بورنتی¹ انگل اجباری درون یاخته می‌باشد. بنابر این در محیط کشت غیر زنده رشد نمی‌کند. کشت آن در رویان جوجه و در زرده تخم مرغ و در حرارت ۳۵ درجه بهتر است. و حداکثر رشد و نمو هنگامی است که مرگ رویان نزدیک می‌شود. این باکتری ارگانیسم مقاومی است، به ‌طوری­که به‌ مدت ۷ تا ۱۰ روز در دمای ۱۵ تا ۲۰ درجه سانتی­گراد در پشم گوسفندان و به‌ مدت بیش از یک ماه در گوشت تازه و به ‌مدت ۴۰ ماه در سر شیر، زنده می­ ماند (1). احتمالا شايع­ترين چهره باليني تب Q را تشكيل مي­دهد. به طوري­كه در سرم 12ـ11 درصد ساكنين مناطق بومي بيماري، آنتي بادي ضد كوكسيلا بورنتي يافت شده است. در حالي­كه اغلب آن­ها سابقه واضحي از ابتلاء به اين بيماري را ذكر نمي كنند. به نظر مي­رسد عواملي نظير سن ابتلاء و تعداد ميكروارگانيسمي كه وارد بدن مي­شود در ميزان بروز اين چهره بيماري دخيل باشد. ضمنا ممكن است عفونت مزبور، كاملا بدون علامت باشد (4-2).  

 حساسيت به اين بيماري عموميت دارد. احتمالا مصونيتي كه بعد از بهبودي حاصل مي­شود تا پايان عمر، ادامه خواهد يافت و در اين حالت دوام ايمني سلولي بيشتر از ايمني هومورال است. به طوري­كه 
آنتي بادي­هاي فيكساسيون كمپلمان به مدت 5ـ3 سال و آنتي بادي­هاي قابل كشف با تست فلورسنت غير مستقيم به مدت 15ـ10 سال دوام خواهد يافت. تست الیزا به عنوان یک روش مناسب و عمومی در بیوشیمی غربالگری است. که در این مطالعه با بهره گیری از این روش به مطالعه سرم­های مشکوک از نظر حضور آنتی بادی­های ضد کوکسیلا بورنتی پرداختیم.

 مطالعات در زمینه­ی آزمایش­های ایمنی‌شناسی نشان می­دهد که کوکسیلا بورنتی تنها جرمی است در بین ریکتزیا ها که تغییرات فاز نشان می ‌دهد. به عبارت دیگر از نظر ساختمانی دو فاز موجود است: فاز یک: که در حقیقت نخستین مرحله‌ای است که آن را در روی حیوان بیمار و یا در اثر گذراندن در روی حیوان آزمایشگاهی می­‌یابند و شکل توکسیک و خطرناک برای انسان نیز محسوب می‌شود و کپسول پلی ساکارید دارد. فاز دو: خاصیت توکسیک کمتری دارد و سویه‌ هایی در این فاز هستند که در تخم مرغ کشت داده و از این رو پادگن پوششی را از دست داده‌اند. در آزمایشگاه کار کردن با این سویه‌ها برای کارکنان خطر کمتری دارد. در این بررسی که به مدت یک سال در کشتارگاه­های اصفهان انجام شد، 100 نمونه سرمی از کارکنان کشتارگاه­های سطح اصفهان جداسازی و اطلاعات هر یک طی پرسش نامه ای مجزا تهیه و تنظیم گردید.

کلیه مراحل جداسازی و تشخیص آنتی بادی IgM با استفاده از کیت Virion/Serion مورد تایید قرار گرفت. مراحل انجام آزمایش مطابق با دستورالعمل کیت مربوطه انجام شد. جهت تایید نهایی از حضور باکتری در نمونه های واجد آنتی بادی ضد کوکسیلا بورنتی, از آزمون Nested-PCR استفاده شد (5).

گر چه تشخیص با روش­های سرولوژی راحت انجام می شود, حضور آنتی بادی­های غالب بعد از دو یا سه هفته از شروع بیماری در انسان قابل پیگیری هستند. تست الایزا² نسبت به سایر تست­های مورد بررسی مثل تثبیت کمپلمان و بررسی آنتی بادی­های کمپلمان از دقت و سهولت بیشتری برخوردار است. از این جهت این مطالعه با هدف بررسی حضور آنتی بادی­های تولید شده علیه کوکسیلا بورنتی با روش الایزا در سرم­های مشکوک جداسازی شده از کارکنان کشتارگاه­ها انجام شد.

روش کار

در این بررسی که به مدت یک سال در کشتارگاه­های اصفهان انجام شد، 100 نمونه سرمی از کارکنان
کشتارگاه های سطح اصفهان جداسازی و اطلاعات هر یک طی پرسش نامه ای مجزا تهیه و تنظیم گردید. پرسشنامه شامل اطلاعات سن, جنس, سابقه ارتباط با احشام و هم­چنین رسیدگی­های بهداشتی از جمله واکسیناسیون می­باشد. از هر کدام از کارکنان 5 سی سی نمونه خون وریدی اخذ و پس سانتریفیوژ در دور 1500 به مدت 15 دقیقه, سرم بیمار جداسازی شد (6). نمونه های جداسازی شده در فریزر 20- درجه تا انجام مراحل بعدی نگهداری شد. جهت بررسی حضور آنتی بادی­های ضد کوکسیلا بورنتی, نمونه های سرمی با استفاده از آزمایش الایزا مورد بررسی قرار گرفت (9-7).

کلیه مراحل جداسازی و تشخیص آنتی بادی IgM با استفاده از کیت Virion/Serion مورد تایید قرار گرفت. مراحل انجام آزمایش مطابق با دستورالعمل کیت Serion-Rhumatoin Factor انجام شد (10). با توجه به این­که
آنتی بادی­­های IgM غیر اختصاصی (فاکتور روماتوئید)³ در روال آزمایش مثبت کاذب ایجاد می­کنند, باید قبل از تشخیص IgM، این فاکتور حذف شود. محلول جاذب روماتوئید به­صورت 1±4 رقیق شدند. در مرحله بعد هر کدام از این نمونه ها به صورت 1±100 رقیق شدند. سپس به میزان 100 میکرولیتر به هر یک از چاهک­­های میکروپلیت افزوده شد و پلیت­ها به مدت 60 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی­گراد انکوبه گردید. بعد از شستشو با محلول شستشوی داخل کیت, به مدت 30 دقیقه محلول کنژوگه کیت اضافه شد. در مرحله بعد محلول سوبسترا اضافه گردید و در مرحله آخر محلول متوقف کننده اضافه گردید. جهت قرائت چاهک­های میکروپلیت از دستگاه قرائت کننده الایزا در طول موج 405 نانومتر استفاده شد (11).

در نهایت اطلاعات جمع آوری شده با استفاده از آمار توصیفی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. جهت تایید نهایی از حضور باکتری در نمونه های واجد آنتی بادی ضد کوکسیلا بورنتی, از آزمون Nested-PCR⁴ استفاده شد. جهت استخراج DNA  از کیت استخراج سیناژن⁵ ساخت ایران استفاده شد و تمام مراحل کار مطابق با کیت مربوطه انجام گرفت. پرایمرهای مورد استفاده جهت تشخیص نهایی کوکسیلا بورنتی در جدول زیر ارائه شده است (12).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

جدول (1): توالی پرایمرهای مورد استفاده

---

[1] - Coxiella burnetii

[2]  -ELIZA

[3] - RF

[4] -  Polymerase Chain Reaction 

[5] - Cinnagen

پرایمر ها	توالی پرایمرها	اندازه قطعه(bp)
مرحله اول OMP1 OMP2 مرحله دوم OMP3 OMP4	AGTAGAAGCATCCCAAGCATTG TGCCTGCTAGCTGTAACGATTG   GAAGCGCAACAAGAAGAACAC TTGGAAGTTATCACGCAGTTG	501   438

 

نتایج بررسی الکتروفورز محصولات مرحله ی دوم PCR در ژل آگارز ارائه گردید. نتایج نهایی در نهایت با نرم افزار های آماری مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

یافته ها

در این بررسی که به مدت یک سال از شهریور ماه سال 1402تا شهریور ماه 1403 در کشتارگاه­های شهرستان اصفهان انجام شد، 100 نمونه سرمی از کارکنان کشتارگاه­های سطح اصفهان جداسازی و اطلاعات هر یک طی پرسش نامه ای مجزا تهیه و تنظیم گردید. از هر کدام از کارکنان 5 سی سی نمونه خون  وریدی اخذ و پس از سانتریفیوژ در دور 1500 به مدت 15 دقیقه، سرم بیمار جداسازی شد.

در این مطالعه مقطعی- توصیفی همه شرکت کنندگان مورد مطالعه در کشتارگاه­های اصفهان و مرد بودند. بر اساس نتایج به دست آمده بیشترین کارکنان مورد مطالعه در بازه سنی 30-20 سال بودند. از این میزان بیشترین میزان آلودگی در کارکنان با همین میزان سن گزارش گردید. جدول (2) مربوط به فراوانی سن کارکنان کشتارگاه­های مورد مطالعه ارائه شده است.

 

 

 

 

 

 

 

 

جدول (2): فراوانی عفونت کوکسیلا بر اساس سن کارکنان کشتارگاه های مورد مطالعه

سن (سال)	تعداد کل	تعداد موارد مثبت	درصد موارد مثبت
20-30	50	23	46 %
31-40	35	27	77 %
41-50	15	9	60 %
جمع	100	59	59 %

 

پرسش نامه شامل اطلاعات سن, جنس, سابقه ارتباط با احشام و هم­چنین رسیدگی­های بهداشتی از جمله واکسیناسیون می­باشد. بر ارسال پرسشنامه های مورد بررسی تنها 23 درصد از کارکنان مورد واکسیناسیون قرار گرفته بودند. براین اساس اقدامات لازم جهت پیشگیری از ابتلا کارکنان و هم­چنین در نظر گرفتن واکسیناسیون اقدامی اساسی به نظر می­رسد. طبق بررسی­های انجام شده در این پژوهش، بیشترین ابتلا در کارکنان با میزان سابقه کار بین 10-6 سال سابقه کار بوده است. جدول مربوط به فراوانی عفونت کوکسیلا بورنتی در کارکنان کشتارگاه های مورد مطالعه بر اساس سابقه کار نیز مورد ارزیابی قرار گرفت. از بین نمونه ها­ی سرم مورد مطالعه، 59 نمونه سرم (59 درصد) از نظر حضور  آنتی بادی IgM مثبت بودند. با توجه به این که آنتی بادی­های IgM غیر اختصاصی (فاکتور روماتوئید) در روال آزمایش مثبت کاذب ایجاد می­کنند، قبل از تشخیص IgM، این فاکتور حذف گردید.

محلول جاذب روماتوئید به صورت 1±4 رقیق شد. در مرحله بعد هر کدام از این نمونه ها به صورت 1±100 رقیق شدند. سپس به میزان 100 میکرولیتر به هر یک از چاهک­های میکروپلیت افزوده شد و پلیت­ها به مدت 60 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی­گراد انکوبه گردید. بعد از شستشو با محلول شستشوی داخل کیت، به مدت 30 دقیقه محلول کنژوگه کیت اضافه شد. در مرحله بعد محلول سوبسترا اضافه گردید و در مرحله آخر محلول متوقف کننده اضافه شد. در این مطالعه جهت قرائت چاهک­های میکروپلیت از دستگاه قرائت کننده الایزا در طول موج 405 نانومتر استفاده شد.

از 100 نمونه جداسازی شده از کارکنان کشتارگاه­های مورد مطالعه، 59 درصد از موارد به عنوان مثبت گزارش شدند. جهت تایید نهایی از حضور باکتری در این 59 درصد نمونه مورد مطالعه مثبت، از روش مولکولی استفاده گردید. از بین موارد مثبت جداسازی شده، 12 مورد کارکنان بخش دام­های زنده، 20 مورد کارکنان بخش کشتارگاه و 1 مورد کارکنان بخش اداری بودند. در روش مولکولی ژن­های گروه OMP جداسازی گردیدند. در این میان ژن­های گروه 10 مورد از نمونه های مورد بررسی واجد ژن COM1 بودند. تصویر حاصل از الکتروفورز در نمونه های واجد ژن OMP در زیر ارائه شده است.

 

تصویر (1): تصویر حاصل از الکتروفورز در نمونه های واجد ژن OMP

بحث

تب کیو به عنوان یک بیماری نو پدید و باز پدید در بسیاري از کشورها از جمله ایران مطرح است. تعیین میزان شیوع آلودگی و فاکتورهاي خطر باعث می­شود که اهمیت عفونت براي مسئولین بهداشتی نمایان گردد و امکانات و تجهیزات لازم جهت کنترل و پیش گیري و نیز، اولویت هاي پژوهشی مشخص شود (13).

مطالعه حاضر نخستین مطالعه در شهرستان اصفهان می باشد. تعیین میزان شیوع بیماري و فاکتورهاي خطر باعث می­شود که اهمیت این بیماري در جمعیت، براي مسئولین بهداشتی نمایان گردیده و امکانات و تجهیزات لازم کنترل و پیش گیري و نیز اولویت­­هاي پژوهشی مشخص شود. مطالعه حاضر، نشان داد که عفونت کوکسیلوزیس در سرم کارکنان شهرستان اصفهان وجود دارد و شیوع آن در100 نمونه جداسازی شده از کارکنان کشتارگاه های مورد مطالعه،  59 درصد گزارش مثبت است (14). در این مطالعه جهت تایید نهایی از از روش مولکولی استفاده گردید. در روش مولکولی ژن­های گروه OMP جداسازی گردید. در این میان 10 مورد از نمونه های مورد بررسی واجد ژن گروه OMP بودند. نتایج مطالعات نشان می­دهد که روش واکنش زنجیره ي پلی مراز تک مرحله اي جهت تشخیص کوکسیلا بورنتی داراي حساسیت کافی نمی­باشد و پیشنهاد می­شود که از روش واکنش زنجیره ي پلی مراز آشیانه اي استفاده گردد. این روش نسبت به روش­هاي کلاسیک از سرعت، دقت، اختصاصیت و حساسیت بالایی برخوردار است (15).

تب کیو یک بیماری شغلی در افرادی هم­چون دامپزشکان، کارگران کشتارگاه­ها، دامداران و کارکنان آزمایشگاهی است. گسترش تب کیو به­علت تماس افراد مستعد با دام آلوده اتفاق می افتد. در مطالعه حاضر از بین 100 نمونه جداسازی شده از کارکنان کشتارگاه­های اصفهان 33 ایزوله کوکسیلا بورنتی جداسازی گردید (16). گرچه هیچ­گونه ارتباط معنی داری بین سابقه کاری کارکنان و آنتی بادی جداسازی شده پیدا نشد، اما بیشترین میزان نمونه جداسازی شده در بین کارکنان کمتر از 30 سال با سابقه کاری بالا مشاهده گردید. این مساله نشان دهنده فراوانی ایزوله در کارکنانی است که با عدم واکسیناسیون در معرض نمونه های دامی آلوده قرار گرفته اند. از بین نمونه های سرم مورد مطالعه، تنها 59 نمونه سرم (59 درصد) از نظر حضور
آنتی بادی­های IgM مثبت بودند. با توجه به این که آنتی بادی­های IgM غیر اختصاصی (فاکتور روماتوئید) در روال آزمایش مثبت کاذب ایجاد می­کنند، قبل از تشخیص IgM، این فاکتور حذف گردید. با توجه به این که حضور آنتی بادی­های IgM نشان دهنده ی فاز حاد بیماری است، می­توان نتیجه گرفت که بیشتر کارکنان با سابقه کاری و سن بالای 35 سال زمان لازم برای مقاومت در برابر
محیط های آلوده به کوکسیلا داشته اند. از این جهت بیشترین میزان کوکسیلا بورنتی جداسازی شده از کارکنان کشتارگاه ها با سن کمتر می­باشد (17).

در سال 2011 ترینیداد و همکاران مطالعه ای در بین کارکنان کشتارگاه های مورد مطالعه خود انجام دادند که از 455 مورد کارگر مورد مطالعه 20 مورد (4/4  درصد) واجد IgM در سرم خون خود بودند. که با توجه به جامعه آماری مورد مطالعه ما نسبت متناسبی را نشان می­دهد (18). از بین موارد مثبت جداسازی شده، 13 مورد کارکنان بخش دام های زنده، 4 مورد کارکنان بخش کشتارگاه و 3 مورد کارکنان بخش اداری بودند که مشابه به نتایج مطالعه حاضر می باشد. در مطالعه حاضر از بین موارد مثبت جداسازی شده، 12 مورد کارکنان بخش دام­های زنده، 20 مورد کارکنان بخش کشتارگاه و 1 مورد کارکنان بخش اداری بودند. در مطالعه ای که در سال 1988 در آدیس آبابا انجام شد، شیوع تب کیو در 465 کارگر بررسی شد که از این میان 5/6 % شیوع کوکسیلا بورنتی سرمی گزارش شد (19).

در مطالعه ای مشابه در ترکیه در سال 2000 نشان دهنده ی شیوع 12 درصد کوکسیلا بورنتی از سرم کارکنان بخش کشتارگاه های مورد مطالعه بود (20). نتایج مطالعه حاضر با مطالعات انجام شده اخیر مطابقت دارد. و نشان دهنده شیوع کوکسیلا بورنتی در سرم کارکنان کشتارگاه ها می باشد. با توجه به این که ایران در مرزهای شرقی با کشور افغانستان و پاکستان قرار دارد، و کنترل ورود دام های آلوده از این مرزها با عدم رعایت موازین بهداشتی انجام می شود، کنترل شیوع کوکسیلا بورنتی مساله ای دشوار به نظر می رسد. در مناطق مختلف ایران نیز مطالعات سرولوژیک انجام شده و نتایج مختلفی از شیوع کوکسیلا بورنتی گزارش می دهد. در مطالعه ای که توسط اسدی و همکاران انجام شد 100 درصد شیوع سرمی کوکسیلا بورنتی گزارش گردید (21). در این مطالعه 1137 نمونه سرمی از 43 گله دامی جداسازی گردید. در شرق ایران خلیلی و سخایی شیوع کوکسیلا بورنتی را 78/65  درصد و 75/10 درصد گزارش کردند (22).

هم­چنین در مطالعه دیگری که توسط خلیلی و همکاران در سال 2010، شیوع سرمی کوکسیلا بورنتی 42/29 درصد برآورد شد. متاسفانه کشتارگاه­ها اطلاعات کافی راجع به کوکسیلا بورنتی و راه­های انتقال آن ندارند و هیچ­گونه اقدام پیشگیری از طرف مسئولین انجام نشده است (23). تب كيو که به واسطه ی كوكسيلا بورنتي است، يك بيماري مشترك بين انسان و دام با انتشار جهاني است كه در نواحي جغرافيايي با آب و هواي متفاوت گزارش شده است. عامل بيماري يك ميكروارگانيسم ريكتزيا مانند و داراي زندگي داخل سلولي اجباري به نام مي­باشد كه طيف وسيعي از حيوانات از قبيل گاو، گوسفند، بز، سگ، گربه، و ماهی­ها را آلوده می­کند. از بين حيوانات اهلي، گاو هاي شيري، گوسفند و بز بزرگ­ترين مخازن اين باكتري هستند. رحم و غدد پستاني حيوان اولين محل جايگزيني عامل بيماري در فاز مزمن آلودگي با كوكسيلا بورنتي هستند. حيوانات آلوده اين ميكروارگانيسم را از طريق ترشحات دفعي، ترشحات رحمي و قطعاتي از جفت در طي زايمان، به ميزان زياد به محيط دفع می كنند. يكي ديگر از مهم­ترين را ه­هاي دفع كوكسيلا بورنتي به محيط شير دام­هاي آلوده می باشد. شواهد سرولوژیکی در شرق ایران در مطالعه اسماعیلی و همکاران در سال 2014 نشان دهنده ی آنتی بادی­های فاز 1 و 2 در سرم کارکنان کشتارگاه­های مورد مطالعه است. بیشترین میزان آنتی بادی گزارش شده در این کارکنان با مقادیر 1/ درصد گزارش شده است (25-24). در نهایت به نظر می­رسد استفاده از روش­های مولکولی هم­چون PCR از دقت بالاتری برای بررسی حضور کوکسیلا بورنتی برخوردار باشد.

نتیجه گیری

در نهایت به نظر می­رسد استفاده از روش­های مولکولی هم­چون PCR از دقت بالاتری برای بررسی حضور کوکسیلا بورنتی برخوردار باشد. سازمان بهداشت جهاني تخمين زده است كه اگر كوكسيلا بورنتي در يك شهر كه داراي حدود 5 ميليون نفر جمعيت است به صورت اسپري پخش كنند. 125،000 نفر بيمار و 150 مورد مرگ و مير رخ مي­دهد. هم­چنين اين سازمان تخمين زده است كه عامل مي­تواند تا شعاع 20 كيلومتر در مسير باد منتقل شود. عوامل ميكروبي اين گروه پاتوژن­هايي مي­باشند كه بيماري­هاي آشكار ايجاد كرده و با استفاده از روش­هاي مهندسي ژنتيك مي توانند سرايت پذيري بسيار بالا و خطرناكي به علت در دسترس بودن، سهوليت در امر توليد و انتشار داشته باشند، اين در حالي است كه اين ميكروارگانيسم­ها داراي آمار مرگ و مير بسيار بالا و هم­چنين تاثيرات چشمگيري بر روي سلامت هستند. از این رو بررسی حضور کوکسیلا در سرم کارکنان و کنترل ورود و خروج دام­های آلوده ضروری به نظر
می­رسد.

 

.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

منابع

 

1. Doosti A, Arshi A, Sadeghi M. Investigation of Coxiella burnetii in Iranian Camels. J Med Microbiol. 2012; 6: 56-62.

 

2. Dupuis G, Petite J, Peter O. An important outbreak of human Q fever in a Swiss Alpine Valley. Int J of Epidemiol. 1987; 16: 282-287.

 

3. Fretz R, Schaeren W, Tanner M. Screening of various foodstuffs for occurrence of

Coxiella burnetii in Switzerland. Int J Food Microbiol. 2007; 116: 414–418.

 

4. Guatteo R, Beaudeau F. Shedding routs of Coxiella burnetii in dairy Cows: implications for detection and control. J Vet Res. 2006; 37: 827-833.

 

5. Gyuranecz M, Hornok S, Viktor J. Prevalence of Coxiella burnetii in Hungary: Screening of Dairy Cows, Sheep, Commercial Milk Samples, and Ticks. Vector-borne and Zoonotic Dis, 2012; 12: 650-653.

 

6. Hirai A, Nakama A, Chiba T. Development of a method for detecting Coxiella burnetii in Cheese samples. J Vet Med Sci. 2011; 74: 175-180.

Hendrik JR. Coxiella burnetii in pregnant goats. GVO Drukkers Vormgevers. 2013; 1: 10-21.

 

7. Howe GB, Loveless BM, Nonwood D, Craw P. Real-time PCR for the early detection and Quantification of Coxiella burnetii as an alternative to the murine bioassay. J Mol Cell Probes. 2009; 23: 127-31.

 

8. James H. Steele (Edit.) CRC Handbook Series in Zoonoses, Bacterial, Rickettsial and Mycotic Diseases, 2nd edition. 2000; Volume 2, pp. 507-528.

 

9. Khalili M, Sakhaee E. An update on a serologic survey of Q fever in domestic animals in Iran. Am J Trop Med Hyg. 2009; 80(6): 1031-1032.

 

10. Khalili M, Sakhaee E, Golchin M, Q fever serology in febrile patients in Southeast Iran. Trans Royal Society Trop Med Hygiene. 2010; 104(9): 623-4.

 

11. Kim S, Kim E, Lafferty C. Coxiella burnetii in bulk tank milk samples, United States. Em Infect Dis. 2005; 11: 619-621.

 

12. Madariaga MG, Rezai K, Trenholme GM, et al. Q fever: a biological weapon in your backyard. 2003; 3(11): 709-21.

 

13. Maurin M, Q fever. Clin Microbiol Rev. 1999; 12: 518-553.18-22.

 

14. Motohiko O, Agus S, Kozue S. Evaluation of PCR and Nested PCR assays currently used for detection of Coxiella burnetii in Japan. National Institute Infect Dis. 2004; 35: 852-855.

 

15. Niemczuk K, Szymańska M. Epidemiology, Zoonotic Aspect and Current Epidemiological Situation of Q fever in Poland. National Vet Res Institute. 2012; 51: 380-392.

 

16. Rodolakis A. Q fever, state of: Epidemiology, diagnosis and prophylaxis. J Small Rum Res. 2006; 62(1): 121-124.

 

17. Rudolf R, Rebecca M, Description of a Coxiella burnetii abortion outbreak in a Dairy Goat herd, and associated serology, PCR and genotyping results. Res Vet Sci. 2012; 93:1217–1224.

 

18. Trinidad A, Dookeran S, Stewart-Johnson A. Frequency of Seropositivity for Coxiella burnetii immunoglobulins in livestock and abattoir workers in Trinidad. J New Microbiol. 2011; 34 (2): 219-24.

 

19. Abebe A. Prevalence of Q fever infection in the Addis Ababa abattoir. Ethiop Med J. 1990; 28(3): 119-122.

 

20. Cetinkaya B, Kalender H, Ertas HB, Muz A, Arslan N, Ongor H, Gurçay M. Seroprevalence of coxiellosis in cattle, sheep and people in the east of Turkey. Vet Rec. 2000; 146 (5): 131-136.

 

21. Asadi J, Khalili M, Kafi M, Ansari-Lari M, Hosseini SM. Risk factors of Q fever in sheep and goat flocks with history of abortion. Comp Clin Pathol. 2012; 1 (12)-1661-1669.

 

22.  Khalili M, Sakhaee E. An update on a serologic survey of Q fever in domestic animals in Iran. Am J Trop Med Hyg. 2009; 80(6): 1031–1039.

23. Khalili M, Shahabi-Nejad N, Golchin M. Q fever serology in febrile patients in southeast Iran. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2010; 104(9): 623-624.

 

24. Esmaieli S, Gooya MM, Shirzadi MR, Esfandiari B, Amini FB, Behzadi MY. Seroepidemiological Survey of tularemia among different groups in wetern Iran. Int J Infect Dis 2014; 18: 27-31.

 

25. Kirkan S, Kaya O, Tekbiyik S, Parin U. Detection of Coxiella burnetii in cattle by PCR. Turk J Vet Anim Sci. 2008; 32(3): 215-20.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Study of Coxiella burnetii serotype in clinical samples of slaughterhouse workers in Isfahan cities

 

Fahimeh Nourbakhsh*1, Hossein Chahardeh Masoumi2, Mohammadreza Saebi3

1. PhD in Toxicology, Expert in the Deputy of Food and Drug Administration, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan-Iran.

2. PhD in Veterinary Medicine, Expert in the Deputy of Food and Drug Administration, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan-Iran.

3. PhD student in Food Hygiene, Islamic Azad University, Shahrekord Branch, Shahrekord-Iran.

 

 

Abstract

Q fever is a newly emerging disease in many countries including Iran. Determining the prevalence of contamination and risk factors makes the importance of infection visible to health officials and the necessary facilities and equipment for control and prevention, as well as research priorities.

In this study, which was conducted for one year September 1402 to September 1403 in the slaughterhouses of Isfahan city, 100 serum samples were isolated from the employees of the slaughterhouses in Isfahan, and their information was prepared and adjusted. The results of this study have been presented after analysis.

100 samples isolated from the workers of the studied slaughterhouses, 33% of the cases were reported as positive. In order to finally confirm the presence of bacteria in these 33% positive samples, a molecular method was used. Among the isolated positive cases, 12 cases were employees of the live livestock department, 20 cases were employees of the slaughterhouse department and 1 case were employees of the administrative department. In the molecular method, the genes of the OMP group were isolated. Among these, the genes of 10 of the analyzed samples had the COM1 gene.

Conclusion: The results of the studies show that the one-step polymerase chain reaction method is not sensitive enough to detect Coxiella burnetii and it is suggested to use the nested polymerase chain reaction method. This method has high speed, accuracy, specificity and sensitivity compared to classical methods.

Key words: Coxiella burnetii, Q fever, Isfahan Slaughterhouses

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

29

 

---