فهرس المقالات Molecular methods

• حرية الوصول المقاله
  • صفحة الملخص
  • نص كامل
  
  1 - PCR-DGGE : روشی نوین در دنیای میکروبیولوژی
  آروین توکلی
  PCR-DGGE یکی از روشهای مولکولی نوین میباشد که در ابتدا برای کشف پلی مورفیسم DNA ابداع شد. این تکنیک قطعات هم اندازهDNA را بر اساس اختلاف توالی جدا میکند. در حال حاضر این تکنیک در حوزه های مختلف علم میکروبیولوژی مانند میکروبیولوژی پزشکی، میکروبیولوژی غذایی و میکروبیولوژی أکثر

  PCR-DGGE یکی از روشهای مولکولی نوین میباشد که در ابتدا برای کشف پلی مورفیسم DNA ابداع شد. این تکنیک قطعات هم اندازهDNA را بر اساس اختلاف توالی جدا میکند. در حال حاضر این تکنیک در حوزه های مختلف علم میکروبیولوژی مانند میکروبیولوژی پزشکی، میکروبیولوژی غذایی و میکروبیولوژی صنعتی به کار میرود. در این روش پس از استخراج DNA از نمونه مورد نظر، DNA به کمک پرایمرهای یونیورسال از طریقPCR تکثیر میشود. سپس محصولPCR که حاوی قطعات هم اندازه ی DNA میباشد، بر روی ژل DGGE که حاوی شیبی از مواد دناتوره کننده (اوره و فرم آمید) است، قرار میگیرد و الکتروفورز انجام میشود DGGE . DNA ی باکتریهای مختلف را تفکیک میکند که میتوانند برای آنالیز های بعدی مورد استفاده قرار گیرند. علی رغم وجود برخی محدودیت ها مانند محدودیت در سایز توالی مورد استفاده، PCR-DGGE میتواند به عنوان یک تکنیک سریع و کارآمد برای اهداف بسیاری در میکروبیولوژی مورد استفاده قرار گیرد. در این مطالعه ضمن معرفی اجمالی این تکنیک، مزایا و محدودیت های آنرا در تحقیقات میکروبیولوژی مورد بررسی قرار میدهیم. تفاصيل المقالة
• حرية الوصول المقاله
  • صفحة الملخص
  • نص كامل
  
  2 - تشخیص مولکولی لیشمانیوز در سگ با استفاده از نمونه‌های سواب چشمی و بافی کوت خون
  محمدرضا آریان‌نژاد غلامرضا رزمی جواد خوش‌نگاه
  روش‌های مولکولی زیادی جهت تشخیص لیشمانیوز در سگ‌ها مورد استفاده قرار گرفته است. در این موارد بیشتر با روش‌های تهاجمی از بافت‌ها نمونه‌برداری می‌شود. هدف از این مطالعه ارزیابی استفاده از دو روش نمونه‌برداری غیرتهاجمی برای تشخیص لیشمانیوز در آزمایش PCRمی‌باشد. بدین منظور، أکثر

  روش‌های مولکولی زیادی جهت تشخیص لیشمانیوز در سگ‌ها مورد استفاده قرار گرفته است. در این موارد بیشتر با روش‌های تهاجمی از بافت‌ها نمونه‌برداری می‌شود. هدف از این مطالعه ارزیابی استفاده از دو روش نمونه‌برداری غیرتهاجمی برای تشخیص لیشمانیوز در آزمایش PCRمی‌باشد. بدین منظور، تعداد60 قلاده سگ انتخاب شده و به‌طور مساوی به سه گروه: سگ‌های خانگی واجد جراحات جلدی (گروه اول)، سگ‌های خانگی فاقد جراحات جلدی (گروه دوم) و سگ‌های ‌ولگرد (گروه سوم) تقسیم شدند. پس از معاینه بالینی نمونه‌های سواب چشمی و بافی کوت خون از هر سگ تهیه گردید. علاوه بر این در گروه اول گسترش نسجی نیز از ضایعات جلدی تهیه شد. ابتدا DNAنمونه‌های سواب چشمی و بافی کوت استخراج شده و جهت تعیین گونه‌های لیشمانیا با روش‌هایPCR وSeminested-PCR مورد آزمایش قرار گرفتند. سه نمونه مثبت جهت تأیید تشخیص نیز تعیین توالی گردیدند. گسترش‌های خونی نیز با گیمسا رنگ‌آمیزی شده و به‌صورت میکروسکوپی مورد آزمایش قرار گرفتند. از مجموع 60 سگ مورد آزمایش، در چهار نمونه DNAسواب چشمی مربوط به گروه 3 و یک نمونهDNA سواب چشمی و بافی کوت مربوط به گروه اول آلودگی به لیشمانیا اینفانتوم تعیین گردید. همچنین در نمونه اخیر، اجسام لیشمن در گسترش رنگ‌آمیزی شده مشاهده گردید. بر اساس نتایج مولکولی و تعیین توالی به‌دست آمده نتیجه‌گیری شد که لیشمانیا اینفانتوم در بین سگ‌های مشهد شایع بوده و هم‌چنین نمونه‌های سواب چشمی می‌تواند به عنوان یک روش نمونه‌برداری غیرتهاجمی مناسب برای آزمایش ملکولی تشخیص لیشمانیا در سگ مورد استفاده قرار گیرد. تفاصيل المقالة
• حرية الوصول المقاله
  • صفحة الملخص
  • نص كامل
  
  3 - Association between Yearling Weight and Calpastatin and Calpain Loci Polymorphism in Iranian Zel Sheep
  E. Dehnavi M. Ahani Azari S. Hasani M.R. Nassiry M. Mohajer A.R. Khan Ahmadi L. Shahmohamadi S. Yousefi
  Genotypes of Iranian Zel sheep for Calpastatin(CAST) locus were determined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) methods and for Calpain(CAPN) loc أکثر

  Genotypes of Iranian Zel sheep for Calpastatin(CAST) locus were determined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) and polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) methods and for Calpain(CAPN) locus by PCR-SSCP. Blood samples were collected from 200 purebred Zel sheep of Zel Breeding Station located in Golestan province in northeast of Iran. Extraction of genomic DNA was based on modified salting out method. The digestion of PCR products of CAST gene by MspI and NcoI restriction enzymes revealed two alleles M and N, with frequencies 85.5 and 14.5%, respectively. Frequencies were 75, 21 and 4% for MM, MN and NN genotypes, respectively. Alternatively, using PCR-SSCP method, four genotypes including AA, AB, BB and AC with frequencies of 71, 21, 4 and 4%, respectively, were observed in this population. Analyzing CAPN gene by the PCR-SSCP method, revealed two different conformational patterns (AA and AB) with frequencies of 69 and 31% for AA and AB, respectively. Average heterozygosity for both loci was low (0.28 and 0.25% for CAST using PCR-SSCP and PCR-RFLP, and 0.26% for CAPN).Yearling weights (YW) were analyzed by a statistical model comprising PCR-SSCP and as a result CAPN genotypes had significant effect (P<0.01) on YW. A Chi-square test confirmed Hardy-Weinberg (H-W) equilibrium for the CAST locus using PCR-SSCP method but not for PRC-RFLP method and CAPN locus. Totally, the investigated herd had little genetic diversity and different factors disturb H-W equilibrium and PCR-RFLPand PCR-SSCP might be used successfully in these studies. تفاصيل المقالة