بررسی تکثیر ژن های vh و vl از منبع RNA تک پلاسماسل انسانی
الموضوعات : مجله پلاسما و نشانگرهای زیستی
لعیا عصمتی
1
(
پژوهشکدة علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران
)
جلیل فلاح مهرآبادی
2
(
پژوهشکدة علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران
)
حمیده روحانی نژاد
3
(
پژوهشکدة علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران
)
معصومه بزاز
4
(
پژوهشکدة علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران
)
الکلمات المفتاحية: پلاسماسل, ScFv, آنتی بادی مونوکلونال انسانی,
ملخص المقالة :
مقدمه وهدف:نخستین نسل آنتیبادیهای درمانی منوکلونال با منشا موشی موجب برانگیختن پاسخ ایمونولوژیکی در بدن انسان میشود. استفاده از آنتیبادی درمانی کاملاً انسانی علاوه بر کاهش ایمونوژنیسیته، بیشترین کارایی را به دنبال خواهد داشت. امروزه جهت تهیه آنتیبادی انسانی تکنیک های نمایش فاژی و روشهای مبتنی بر تک سلولB، مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این پژوهش تکثیر ژنهای VHو VLاز منبع RNAپلاسماسل انسانی می باشد.روش کار:از واکنش RT-PCRبه منظور جداسازی و تکثیر قطعات ژن VHو VLاز تک پلاسماسل غربالگری شده علیه آنتیژن مورد نظر استفاده شد. در ابتدا با استفاده از بافر لیزکنندهی سلول، پلاسماسلها لیز و جهت ساخت cDNAاستفاده گردیدند. ژنهای آنتیبادی انسانی با استفاده از cDNAحاصل از یک پلاسماسل و مجموعه پرایمرهای آنتیبادی تکثیر وشش جفت پرایمر جهت تکثیر نواحی متغیر زنجیره سنگین (VH) و سبک (VL) مورد استفاده قرار گرفتند. در این پرایمرها جایگاه برش آنزیمهای محدودالاثر جهت کلون نمودن در وکتور مربوطه و توالی لینکر جهت اتصال نواحی VHو VLقرار داده شد. یافتهها:الکتروفورزطی واکنشPCRمشخص نموده کهقطعات VHو VLبه طول حدود bp400 به طور جداگانه تکثیر یافتهاند. توالیهای بهدست آمده از ژنهای آنتیبادی با سایر توالیهای موجود در پایگاه NCBIمشابهت 97 درصدی نشان داد.نتیجهگیری:پرایمرهای مورد استفاده در این پژوهش به گونهای طراحی شدند که دارای توالی لینکر جهت تهیه ScFvو جایگاه برش آنزیمهای NcoIو NotIجهت کلونینگ قطعات VHو VLهستند.