کلون سازی و بیان ژن هیرودین نوترکیب در رده سلولی CHO

الموضوعات : پاتوبیولوژی مقایسه ای

علی شریف زاده ¹ , میلاد حیدری ² , فرانک عالی ³

1 - .دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد ایران
2 - رکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
3 - مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران

تاريخ الإرسال : 21 السبت , ربيع الأول, 1442 تاريخ التأكيد : 21 السبت , ربيع الأول, 1442 تاريخ الإصدار : 28 الخميس , رمضان, 1441

الکلمات المفتاحية: بیان ژن, هیرودین, کلونینگ,

ملخص المقالة :

هیرودین پروتئینی به طول 66-65 اسیدآمینه می باشد که از غدد بزاقی زالو ترشح و به عنوان یک داروی ضدانعقاد مطرح است. این دارو مهارکننده بسیار قوی ترومبین بوده و در ممانعت از ترومبوسهای عروقی موثر است. هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن هیرودین در سلول های CHO به عنوان یک سلول یوکاریوتی بود. در مطالعه حاضر، قطعه 221 بازی ژن هیرودین در وکتور pcDNA3.1(+) کلون گردید. وکتور نوترکیب هیرودین در سلول CHO با استفاده از لیپوفکتامین ترانسفکت گردید. بیان ژن هیرودین به وسیله RT-PCR سنجش گردید. در نهایت بیان ژن هیرودین با PCR و هضم آنزیمی تایید گردید. وکتور نوترکیب در این تحقیق با موفقیت آزمون گردید. یافته های تحقیق نشان داد که بیان ژن هیرودین با موفقیت صورت گرفته است. پلاسمید نوترکیب، mRNA مربوط به هیرودین را در سلول CHO بیان کرد. بنابراین پروتئین نوترکیب تولیدی در این مطالعه می تواند در تحقیقات بعدی به عنوان یکی از روش های مکمل در امر درمان و اختلالات قلبی عروقی و انعقادی مورد توجه قرار گیرد و به کار گرفته شود.

المصادر:

1. Barzegar A. Azizi A. Faridi P. Mohagheghzadeh A. Leech therapy in Iranian traditional medicine. Forsch. Komplementmed.2015. 22(1):50-53


2. Kalender M.E. Comez G. Sevinc A. Dirier A. Camci C. Leech therapy for symptomatic relief of cancer pain. Pain. Med.2010. 11(3):443-445.


3. Brzezinski P. Solovan  C.  Chiriac  A. Foia  L. Positive outcome of medical leeches (hirudotherapy) for venous congestion. Malawi. Med. J.2015. 27(1):38-39.


4. Sobczak N. Kantyka M. Hirudotherapy in veterinary medicine. Ann. Parasitol.2014. 60(2):89-92.


5. Abdualkader A.M. Ghawi A.M. Alaama M. Awang M. Merzouk A. Leech therapeutic applications. Indian J. Pharm. Sci.2013. 75(2):127-137.


6. Singh A.P. Medicinal leech therapy (hirudotherapy): a brief overview. Complement. Ther. Clin. Pract.2010. 16(4):213-215.


7. O'Dempsey T. Leeches--the good, the bad and the wiggly. Paediatr. Int. Child. Health.2012. 32(2):16-20.


8. Sawhney R. Juneja R. Rawat  R.S.  Mehta Y. Trehan N. Off-pump cardiac surgery (OPCAB) in a patient with recent leech therapy. Ann. Card. Anaesth.2012.  15(1):83-85.


9. Heydari M.R. Valipoor S. Leech Therapy and Cardio Vascular system . j. Cardiovas. Nurs.2016. 5(2):27-34.


10. Kumura T.Hino M.Yamane T.Tatsumi N. Hirudin as anticoagulant for both haematology and chemistry yest. J . Automated method manage in chem.2000.22(4).109-112.


11. Mergulhão F.J. Summers D.K. Monteiro G.A. Recombinant protein secretion in Escherichia coli. Biotechnol. Adv.2005. 23(3):177-202.


12. Corral-Rodriguez M.A. Macedo-Ribeiro S. Pereira P.J. Fuentes-Prior P. Leech-derived thrombin inhibitors: from structures to mechanisms to clinical applications. J. Med. Chem.2010. 53(10):3847-3861.


13. Cherniack E.P. Bugs as drugs, part two: worms, leeches, scorpions, snails, ticks, centipedes, and spiders. Altern. Med. Rev.2011. 16(1):50-58.


14. Sohn J.H. Kang H.A. Rao K.J. Kim C.H. Choi E.S. Chung B.H. Rhee S.K. Current status of the anticoagulant hirudin: it

biotechnological production and clinical practice. Appl. Microbiol. Biotechnol.2001. 57(5-6):606-613.

15. Halabian R. Shagerdi Esmaili N. Oodi A. Masroori N. Amirizadeh N .Mousavi Hosseini Gharehbaghian A. Rezvan H. Jalili M Habibi Rudkenar M.Isolation,cloning and expression of recombinant human factor VII in CHO cell line.Blood .2009. 6(1): 1-11.


16. Elliott J M. Kutschera U. Medicinal leeches: historical use, ecology, genetics and conservation.2011.Fresh water Review. 4: 21-41.


17. Rinas U. Hoffmann F. Betiku E. Estape D. Marten S. Inclusion body anatomy and functioning of chaperone-mediated in vivo inclusion body disassembly during high-level recombinant protein production in Escherichia coli. J. Biotechnol.2007. 127(2): 244-257.


18. Jagannadha rao K.Chul-hao K.sang-Ki R.Stastical 0ptimization of the medium for the production of recombinant hirudin from saccharomyces cervisiae using response surface methodology . process bio.200.35:639-647.


19. Sabaghzadeh S. Mirzahoseini H. Shahbazzadeh D. Naji T.Designing and Constructing Clone for Extracellular Expression of the Desirudin Anticoagulant Drug in E.coli. J Mazandaran Univ Med Sci 2014. 24(119): 72-82.


20. Baneyx F. Recombinant protein expression in Escherichia coli. Curr. Opin. Biotechnol. 1999.10(5):411-421.


21. Sig A.Guney M. Guclu A.Ozmen E.Medical leech therapy-an overall perspective.int med res.2017.7:1-6.


22. Haina Q.Zhilong X.Daijia Z.Yongming B.Xiaohai L.Guozhuu H.PEYGylation of hirudin and analysis of its antithrombin activity in vitro.Chin.J.Chem.Eng. 2007. 15(4):586-590.