بررسی میزان آلودگی به بروسلوزیس در شیر و پنیر به روش Real Time PCR
الموضوعات :فاطمه خداوردی پور 1 , نازیلا ارباب سلیمانی 2 , یاسمن برون 3
1 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم،واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی،شهرکرد، ایران
2 - گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دامغان، ایران
3 - گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهرکرد، شهرکرد، ایران
الکلمات المفتاحية: بروسلا, تب مالت, شیر, پنیر, Real Time PCR,
ملخص المقالة :
بروسلاها باکتری های کوچک غیر متحرک، گرم منفی، بدون کپسول و به فرم کوکوباسیل می¬باشند. بروسلوز یک بیماری مشترک بین انسان و دام است و باعث سقط جنین، اختلالات باروری، عفونت های تناسلی، کاهش شیر، اورتریت و اپیدیمیت در میزبان اصلی می¬شود و از این جهت باعث عوارض مزمن و تحمیل هزینه های درمانی فراوان به بیماران و ضررهای اقتصادی زیاد به دامداران می¬گردد. با وجود پیشرفت هایی که در تکنیک های کشت خون و تست های سرولوژیکی که برای کشف آنتی بادی های اختصاصی به دست آمد، هنوز مشکلات مهمی در تشخیص بروسلوزیس وجود دارد، بنابراین نیاز به آزمون های جدید آزمایشگاهی می¬باشد. یکی از جدید ترین روش های سنجش کمی که در حال حاضر مورد توجه بسیاری از محققین قرار گرفته روش تشخیص باکتری توسط Real Time PCR می¬باشد. هدف ما هم از این مطالعه شناسایی باکتری های جنس بروسلا در نمونه های شیر و پنیر توسط روش Real Time PCR می¬باشد. 25 نمونه شیر گاو (محلی) و 25 نمونه پنیر از مناطق مختلف شهرستان شهرکرد تهیه شد و به منظور تشخیص مولکولی،استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج DNA (شرکت سیناژن) انجام و سپس واکنش Real Time PCR با استفاده از دستگاه مدل Rotor-Gene ساخت شرکت Corbett استرالیا بر روی نمونه ها انجام شد. در این تحقیق از 50 نمونه مورد بررسی تنها در 2 نمونه شیر (4%) بروسلا آبورتوس تشخیص داده شد. در نمونه های پنیر آلودگی به بروسلا گزارش نگردید. این بررسی نشان می دهد روش های مولکولی مثل Real Time PCR باید به عنوان روش هایی مکمل جهت تشخیص بروسلا در کنار روش های رایج مورد استفاده قرار گیرند.
1. Paktoja J, Reinemann D, Ruegg P. (2009). associations among milk quality indicators in raw bulk milk. Dairy Sci J. 92 :4978-4987.
2. Vizcaino N, Verger JM, Grayon M, Zygmunt MS, Cloeckaert A. (1997). DNA polymorphism at the omp-31 locus of Brucella spp. evidence for a large deletion in Brucella abortus and other species-specific markers. Microbiology J. 143: 2913-2921.
3. Cloeckaert A, Jacques I, Grilló MJ, Mar´ın CM, Grayon M, Blasco JM, Verger JM. (2004). Development and evaluation as vaccines in mice of Brucella melitensis Rev.1 single and double deletion mutants of the bp26 and omp31 genes coding for antigens of diagnostic significance in ovine brucellosis. Vaccine J. 22: 2827-2835.
4. Pappas G, Solera J, Akritidis N, Tsianos E. (2005). New approaches to the antibiotic treatment of brucellosis. Antimicrobial Agents J. 26: 101-105.
5. Cutler SJ, Whatmore AM, Commander NJ. (2005). Brucellosis new aspects of an old disease. Appl Microbiol J. 98: 1270-1281.
6. ایزدی الف، مسلمی الف. (1392). مطالعه و شناسایی مولکولی Brucella spp در محصولات لبنی توسط تکنیک Nested PCR. مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی و مولکولی. 3 (11): 98-91.
7. Junaidu A, Oboegbulem S, Salihu M. (2008). Seroprevalence of brucellosis in prison farm in Sokato, Nigeria. Asian Journal of Epidemiology. 1: 24-28.
8. Namanda AT, Kakai R, Otsyula M. (2009). The role of unpasteurized “hawked” milk in
the transmission of brucellosis in Eldoret municipality, Kenya. Infect Developing Countries J. 3(4): 260-266.
9. Al Dahouk S, Tomaso H, Nockler K, Neubauer H, Frangoulidis D. (2003). Laboratory-based diagnosis of brucellosis-a review of the literature. Part II: serological tests for brucellosis. Clin Lab J. 49(11-12): 577-589.
10. Morales-Garcia MR, Garcia-Méndez N, Regalado-Jacobo SD, Lopez-Merino A, Contreras-Rodriguez A. (2014). [Clinical, serological and polymerase chain reaction follow-up of a family with brucellosis]. Rev Chilena Infectol J. 31(4):425-433.
11. Hekmatimoghaddam S, Sadeh M, Khalili MB, Mollaabedin M, Sazmand A. (2013). Comparison of PCR, Wright agglutination test and blood culture for diagnosis of brucellosis in suspected patients. Pak J Biol Sci. 16(22): 1589-1592.
12. Gopaul KK, Kolass MS, Smith CJ, Whatmore AM. Rapid Identification of Brucella Isolates to the Species Level by Real Time PCR Based Single Nucleotide Polymorphism (SNP) Analysis. BMC Microbiol, 2008; 8: 86.
13. Real-Time PCR Applications Guide. Bio-Rad Laboratories, Inc. All rights reserved (2006).
14. Hinic V, Brodard I, Thomann A, Cvetnic Z, Makaya P.V, Frey J, Abril C. (2008). Novel identification and differentiation of Brucella melitensis, B. abortus, B. suis, B. ovis, B. canis, and B. neotomae suitable for both conventional and real-time PCR systems. J Microbiol Methods. 75: 375-378.
15. Ali Sh, Akhter Sh, Neubauer H, Melzer F, Khan I, Ali Q, Irfan M. (2015). Serological, cultural, and molecular evidence of Brucella infection in small ruminants in Pakistan. J Infect Dev Ctries. 9(5):470-475.
16. Akbarmehr J. (2003). Survery on the Contamination of Fresh White Cheese Produced in Sarab and Rural Area with Brucella Spp. J Fac Vel Med Univ Tehran. 58(3):203-206.
17. Kazemi B, Yousefi Namin SA, Dowlatshahi M, Bandepour M, Kafilzadeh F, Gachkar L, Mahmoudinejad F, Samarghandi A, Mardani M. (2008). Detection of Brucella by Peripheral Blood PCR and Comparison with Culture and Serological Methods in Suspected Cases. Iranian J Publ Health. 37(4): 96-102.
18. Xavier M, Paixao T, B. den Hartigh A, Tsolis R, Santos R. (2010). Pathogenesis of Brucella Spp. Open Vet Sci J. 4: 109-118.
19. Akbarmehr J, KhandaghiJ. (2012). A Survey on the Prevalence of Salmonella and Coliforms in Unpasteurized Iranian Cheese Using Conventional Culture Method. Afr J Microbiol Res. 6(5): 968-971.
20. Zowghi E, Ebadi A, Yarahmadi M. (2008). Isolation and identification of brucella organisms in iran. Iran J Clin Infect Diseases. 3: 185-188.
.21موثق م ح. (1391). تعیین آلودگی شیر خام گاو با باکتری بروسلا آبورتوس در منطقه ایلخچی به روش الیزا. مجله علوم غذایی و تغذیه. 10 (1): 97-101.
