راه اندازی روش Real-time PCR برای تشخیص و تعیین کمی ویروس سرخک با استفاده از ژن F

الموضوعات : Molecular Microbiology

طاهره زارعی ¹ , خسرو آقایی‌پور ² , فرشید کفیل‌زاده ³ , عبدالحمید شوشتری ⁴

1 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروبیولوژی
2 - موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج، بخش بیوتکنولوژی
3 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروبیولوژی
4 - موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج، بخش تحقیق و تشخیص بیماری‌های طیور

تاريخ التأكيد : 29 الجمعة , محرم, 1431 تاريخ الإصدار : 15 الجمعة , محرم, 1431

الکلمات المفتاحية:

ملخص المقالة :

سابقه و هدف: با وجود کنترل بیماری سرخک در جهان، اما گزارش‌هایی از ابتلا به این ویروس در جمعیت‌های واکسینه شده وجود دارد. بنابراین تشخیص دقیق و به‌موقع این ویروس ضروری است. روش‌های جدید مولکولی در تشخیص ویروس ارائه شده است که توان تعیین مقدار این ویروس را ندارند. هدف از این پژوهش راه اندازی روش Real-time PCR با استفاده از ژن F ویروس سرخک می‌باشد. مواد و روش‌ها: این مطالعه با طراحی دو پرایمر و یک پروب راه اندازی و از ژن F کلون شده در داخل پلاسمید pET-22b(+) استفاده گردید. رقت‌های متوالی در مبنای 10 از پلاسمید استاندارد حاوی ژن آماده شد و منحنی استاندارد رسم گردید. جهت انجام پروژه از کیت Taq Man ساخت شرکت ABI استفاده گردید. یافته‌ها: حداقل 30 ذره ویروسی در هر واکنش مشخص گردید و در محدوده رقت‌های 4-10تا 9- 10 معادل ( 101×3- 106×3) نسخه بهترین حالت خطی برای منحنی استاندارد دیده شد. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که تکنیک Real-time PCR می‌تواند به عنوان روشی بسیار اختصاصی و سریع برای تشخیص و تعیین تعداد ویروس سرخک از نمونه‌های حاوی این ویروس به‌کار رود.