طراحی، کلونینگ و بیان ژن ctxB-tcpA-c-cpe در اشریشیا کلی به عنوان کاندیدای واکسن وبا

الموضوعات :

نگار صعود ¹ , محمد کارگر ² , سید محمد حسین حسینی ³ , مجتبی جعفری‌ نیا ⁴

1 - دانشجوی دکتری ژنتیک دانشگاه آزاد علوم تحقیقات
2 - دانشگاه آزاد اسلامی، واحد جهرم، گروه میکروبیولوژی
3 - استادیار بخش ایمنی شناسی، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شعبه شیراز، سازمان تحقیق، آموزش و ترویج کشاورزی، شیراز، ایران.
4 - گروه زیست شناسی واحد مرودشت دانشگاه آزاد اسلامی مرودشت ایران

تاريخ الإرسال : 23 السبت , رمضان, 1441 تاريخ التأكيد : 29 الجمعة , صفر, 1442 تاريخ الإصدار : 10 السبت , شوال, 1442

الکلمات المفتاحية: واکسن ویبریو کلرا, پایانه C توکسین کلاستریدیوم پرفرینجنس, tcpA, ctxB,

ملخص المقالة :

سابقه و هدف: پیلی و زیر واحد B توکسین مهمترین عوامل بیماری‌زایی ویبریو کلرا می‌باشند. در این پژوهش، از پایانه C توکسین کلاستریدیوم پرفرینجنس به عنوان یک سیستم تحویل استفاده گردید و با ایجاد کایمرای TcpA-CtxB پروتین حاصل در باکتری اشریشیا کلی بیان شد.مواد و روش‌ها: به صورت تجربی، توانایی سازه دارای CtxB-TcpA-CPE در مقایسه با توالی‌های پروتینی کامل هر یک از پروتین‌های CtxB، TcpA و C-CPE مورد مطالعه قرار گرفت. تکثیر قطعات ژنی با استفاده از PCR و سپس کلونسازی در وکتورهای بیانی انجام شد. به منظور ساخت سازه، پروتین کایمرای هدف با استفاده از لینکر طراحی و به روش سنتتیک تولید شد. پس از تولید، پروتین‌ها تخلیص و سپس با روش ایمونوبلات مورد تایید قرار گرفتند.یافتهها: پروتین کایمرا تولید شده 484 اسیدامینه داشت. این تعداد آمینواسید میتواند نشان دهنده پایداری پروتین باشد. ژن c-cpe، ژن tcpA و ژن ctxB به ترتیب دارای اندازههای 381،375 و 675 جفت باز بودند. نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان دهنده‌ی همولوژی نوکلئوتیدی محصولات بدست آمده با توالی ژن‌های ثبت شده در NCBI بود. این ژن‌ها به طور موفقیت آمیزی در میزبان اشریشیا کلی وارد و اندازه باند پروتینی آن‌ها در SDS-PAGE به ترتیب، 15، 25، 25 و 52 کیلودالتون بود.نتیجه‌گیری: براساس مطالعات فیزیکوشیمیایی صورت گرفته، به نظر می‌رسد که این پروتین نوترکیب کاندیدای خوبی برای بررسی به عنوان واکسن خوراکی ویبریو کلرا باشد که البته برای اثبات این فرضیه به انجام آزمون‌های چالشی و مطالعات تکمیلی بیشتری نیاز دارد.