بررسی پاسخ IgE ،IgG تام انسانی و زیر کلاس‌های آن علیه آنتی‌ژن‌های خام مایع کیست هیداتیک گاو، گوسفند، موش و آنتی ژنB با استفاده از روش الایزا
محورهای موضوعی : پژوهش های بالینی دام های بزرگ
کلید واژه: گاو, گوسفند, کیست هیداتیک, الایزا, آنتی‌ژن, موش,
چکیده مقاله :
استفاده از آنتی ژن های خام مایع کیست هیداتیک با منشأ حیوانی و بررسی پاسخ های ایمونولوژیکی، در تشخیص صحیح و به موقع بیماری با استفاده از روش های سرولوژی کاری ارزشمند است. مطالعه حاضر با هدف مقایسه پاسخ سرم های انسانی به آنتی ژن های مورد مطالعه گاو، گوسفند، موش و آنتی ژن B برای دسترسی به آنتی ژنی که بیشترین پاسخ را ایجاد کند، طراحی و اجرا گردید. ازکشتارگاه صنعتی ایلام تعداد 30 نمونه مایع کیست هیداتیک جداگانه از هر میزبان گاو و گوسفند، جمع آوری و آنتی ژن اولیه، استخراج و آماده سازی گردید. سه گروه موش Balb/c با آنتی ژن خام مایع کیست هیداتیک گوسفندی به طور تجربی آلوده شدند. سرم انسان های بیمار هیداتیدی علیه آنتی ژن های مورد مطالعه، آزمایش شدند و پاسخ آنتی بادی های E، G تام انسانی و زیر کلاس های آن علیه آنتی ژن های مذکور با استفاده از روش الایزا به صورت مورد-شاهدی بررسی گردیدند. شدت پاسخ به هر آنتی ژن محاسبه و با دیگر آنتی ژن ها مقایسه شد. از آزمون های آماری Anova و Post Hoc برای تحلیل نتایج استفاده شد. IgG4 انسان بیشترین میانگین OD را علیه آنتی ژن گاو ایجاد نمود. شدت پاسخ برای آنتی ژن گاو برابر 10.2و سپس آنتی ژن B برابر9 گزارش شد. پاسخ IgE انسان به غیر ازIgG4 از دیگر زیرکلاس های IgG بیشتر بود. آنتی ژن های مورد مطالعه واکنش متقاطع قابل توجهی ایجاد کردند. آنتی ژن موش برای طراحی کیت تشخیص بیماری هیداتیدوز انسانی مناسب تر به نظر می رسد که حتی می تواند در طراحی کیت های تشخیصی جایگزین شود. آنتی بادی ها IgG تام انسان و زیر کلاس IgG4 بیشترین شدت پاسخ را علیه آنتی ژن های مورد مطالعه در مقایسه با دیگر آنتی بادی ها ایجاد کردند.
Finding a human based antigen is either time consuming, hazardous, expensive or very difficult and if applicable it is in very low scale. Therefore the aim of the current study was to compare the human responses against antigen B, cow, sheep and mice crude hydatid cyst fluid (HCF) antigens of Echinococcus granulosus. Hydatid cysts obtained from lungs and livers of sheep and cattle slauthered from local abattoirs in Ilam city, and was used as the source of antigen either for the SDS, Western blotting or ELISA analysis or for experimentally infecting the mice. 30 samples of sheep and 30 samples of cattle hydatid cyst fluid antigen were used as the source of antigen and also to experrimentally infect the mice. human sera samples were collectesd from surgery section of hospitals in Ilam city . IgG and IgE responses were measured using ELISA in case-control study design. Each response was comparly to the others. Results were analysed using Anova and Post Hoc methods. HCF recovered from cysts was centrifuged at 10000 rpm for 5 minutes. The supernatant was dialysed against PBS, freezed-thawed and used as crude HCF.There was an increasing in IgG4 subclass level against cattle hydatid cyst crude antigen with 10.2 times against cut off and B antigen with 9 times against cut off. In this analysis all IgG class and subclasses and IgE antibody responses showed a higher mean OD than that of the cut off, indicating that all human sera from patients with hydatidosis reacted againstcow, sheep and mice crude hydatid cyst fluid antigens and also antigen B. There was an acceptable cross reaction of human immune responses against cattle, sheep, mice and B with that of human using ELISA. Mice antigen is suitable for designing a diagnostic kit. Human total IgG and IgG4 had the highest responses against these antigens comparing to other antibodies.Hyadatid cyst fluid antigen of both cattle and sheep were significantly useful in serodiagnosis of hydatidosis similar to that of human and therefore can be used in hydatid cyst diagnosis kit using ELISA.
1- ارفع، ف. (1388): کرم شناسی پزشکی، سستودها. چاپ ششم، تهران، انتشارات خسروی، صفحه 124-115.
2- اسلامی، ع. (1385): کرم شناسی دامپزشکی، سستودها. چاپ سوم، تهران، انتشارات دانشگاه تهران، صفحه 146-144.
3- موبدی، ا.، دلیمی، ع. (1374): اپیدمیولوژی کیست هیداتیک در ایران و جهان. چاپ اول، تهران، انتشارات مقدم، صفحه 147-132.
4- Auer,H., Stockl, C., Suhendra, S.,(2009): Sensitivity and specificity of new commercial tests for the detection of specific Echinococcus antibodies.Wien Klin Wochenschr:37-41
5- Beaver, P.C., Jung, R.C., Cupp, E.W., (1984):Cyclophyllideantapeworms. In: Clinical parasitology. 9th ed.Philadelphia:Lea and Febiger:527-43
6- Bowles, J., Blair, D., McManus, D.P.,(1992):Genetic variants within the genus Echinococcus identified by mitochondrial DNA sequencing. Mol Biochem Parasitology.54(2): 165-173
7- Dempster, R.P., Berridge, M.V., Harrison, G.B., Heath, D.D.,( 1991): Echinococcus granulosus: development of an intermediate host mouse modle for use in vaccination studies. International Journal Parasitology.21(5):549-554
8- Golass, L., Abebe, T., Hailu, A.,(2011): Evaluation of crud hidatid cyst fluid antigen for the serological diagnosis of hydatidosis in cattle. Journal Helmintology.85(1):100-108
9- Jahani, Z., Meshgi, B., Ragabi.B, M., Jalousian, F.,(2014):Improved serodiagnosis of hydatid cyst diseas using gold nanoparticle labelee antigen B in naturally infected sheep. Iranian journal parasitology.9(2):218-225
10- Jiang, L., Zhang, Y. G., Liu, M. X.,(2012): Analysis on the reactivity of five subunits of antigen B family serodiagnosis of echinococcosis.Exp Parasitology.131(1):85-91
11- Khosravi, A., Ghafourian,S., Shamsi, M., Sadeghifard, N., Maleki, A., Babaahmadi, E.,(2012): Crossreaction beetwin the crud hidatid cyst fluid antigens of human and animals origin in response to human IgG class and subclass.Journal Parasitology Research.b:947-948
12- Khosravi, A., Shamsi, M., Sadeghifard, N., Ghafourian,S.,(2012):Evaluation of mice,sheep and human IgG and IgE antibody responses aginst the mice crud Hydatid cyst fluid(HCF)antigens.Journal of Cell and Biology.6(5):66-72
13- Liance, M., Janin, V., Bresson-Handi, S., (2000) : Immunodiagnosis of Echinococcus infections: confirmatory testing and species differentiation by a new commercial Western Blot.Journal Clincal Microbiology.38(10):3718-3721
14- Mamuti, W., Yamasaki, H., Sako, Y., Nakaya, K., Nakao, M., Marshall ,W., (2002) : Usefulness of Hydatid Cyst Fluid of Echinococcus granulosus developed in mice with secondary infection for serodiagnosis of cystic echinococcosis in humans. clinical and diagnostic laboratory immunology. 9(3):573-576
15- Sari, C., Ertug, S., Karadam, S. Y.,(2009): The comparative evaluation of Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA), Indirect Hemagglutination Test (IHA) and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) in the diagnosis of cystic echinococcosis.Turkiye Parasitology Derg.33(1): 73-76
16- Sbihi, Y., Jansen, D., Osuna, A.,( 1996): Serologic recognition of hydatid cyst antigens using different purification methods.Diagnosis Microbiology Infection Disease.24:205-211.
17- Sbihi , Y. , Janssen , D. , Osuna, A . , (1997): Specific recognition of hydatid cyst antigens by serum IgG, IgE, and IgA using western blot. Journal Clinical Laboratory Anal.11(3):154-157.
18- Siracusano, A., Buttari, B., Delunardo, F., Profumo, E., Margutti, P., Ortana, E., Rigano, R., Teggi, A.,( 2004): Critical points in the immunodiagnosis of cystic echinococcosis in humans.journal Parasitologia.46:401-403
19- Tabatabaie, F., Akhlaghi, L., Noori, M., Maleki, F.,(2013):Prepration and purification of antigens of hydatid cyst fluid by serologic diagnosis. Annals of Biological Reaserch.4(6):236-241
20- Tawfeek, G. M., Elwakil, H. S., El-Hoseiny, L., :(2011) Comparative analysis of the diagnostic performance of crude sheep hydatid cyst fluid, purified antigen B and its subunit (12 Kda), assessed by ELISA, in the diagnosis of human cystic echinococcosis.Parasitology Reserch.108(2):371-376
21- Wen, H., Craig, P.S.,( 1994): Immunoglobulin G sub class responses in human cystic and alveolar echinococcosis. Am Journal Tropical Medical Hygiene.51:741-748
22- Zhang, W., You, H., Li, J., Zhang, Z., Troson, G., Ali, H., (2003): Immunoglobulin profiles in murine intermediate host modelof resistance for Echinococcus grnulosus infection. Parasite Immunology.253:161-168.
_||_